ଏହି ଅଧ୍ୟୟନ ଦର୍ଶାଉଛି ଯେ ଧାନ ମୂଳରୁ ପୃଥକ କରାଯାଇଥିବା ରାଇଜୋସ୍ଫିୟର ସିମ୍ବୟୋଟିକ୍ କବକ *କୋସାକୋନିଆ ଓରିଜିଫିଲା* NP19 ହେଉଛି ଏକ ପ୍ରତିଶ୍ରୁତିପୂର୍ଣ୍ଣ ଉଦ୍ଭିଦ ବୃଦ୍ଧିକୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରୁଥିବା ଜୈବ କୀଟନାଶକ ଏବଂ *ପାଇରିକୁଲାରିଆ ଓରିଜା* ଦ୍ୱାରା ହେଉଥିବା ଧାନ ବିସ୍ଫୋରଣ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ପାଇଁ ଜୈବ କୀଟନାଶକ। ଖାଓ ଡକ୍ ମାଲି 105 (KDML105) ପ୍ରଜାତିର ଜାସ୍ମିନ୍ ଧାନ ଚାରାର ତାଜା ପତ୍ର ଉପରେ ଇନ୍ ଭିଟ୍ରୋ ପରୀକ୍ଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। ଫଳାଫଳରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ NP19 ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଭାବରେ *ପାଇରିକୁଲାରିଆ ଓରିଜା* କନିଡିଆର ଅଙ୍କୁରୀକରଣକୁ ବାଧା ଦେଇଥିଲା। *ପାଇରିକୁଲାରିଆ ଓରିଜା* ସଂକ୍ରମଣକୁ ତିନୋଟି ଭିନ୍ନ ଚିକିତ୍ସା ପରିସ୍ଥିତିରେ ବାଧା ଦିଆଯାଇଥିଲା: ପ୍ରଥମତଃ, ଧାନକୁ NP19 ସହିତ ଉପନିବେଶ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ *ପାଇରିକୁଲାରିଆ ଓରିଜା* କନିଡିଆ ସହିତ ଟୀକା ଦିଆଯାଇଥିଲା; ଦ୍ୱିତୀୟତଃ, ପତ୍ରରେ NP19 ଏବଂ *ପାଇରିକୁଲାରିଆ ଓରିଜା* କନିଡିଆର ମିଶ୍ରଣ ପ୍ରୟୋଗ କରାଯାଇଥିଲା;
ରାଇଜୋସ୍ଫିୟର ଜୀବାଣୁ *କୋସାକୋନିଆ ଓରିଜିଫିଲା* NP1914ଧାନ ମୂଳରୁ ପୃଥକ କରାଯାଇଥିଲା (*Oryza sativa* L. cv. RD6)। *Kosakonia oryziphila* NP19 ରେ ଉଦ୍ଭିଦ ବୃଦ୍ଧି-ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ ଗୁଣ ଅଛି, ଯେଉଁଥିରେ ନାଇଟ୍ରୋଜେନ୍ ସ୍ଥିରୀକରଣ, ଇଣ୍ଡୋଲିଆସେଟିକ୍ ଏସିଡ୍ (IAA) ଉତ୍ପାଦନ ଏବଂ ଫସଫେଟ୍ ଦ୍ରବଣୀକରଣ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ। ଆଶ୍ଚର୍ଯ୍ୟଜନକ ଭାବରେ, *Kosakonia oryziphila* NP19 କାଇଟିନେଜ୍ ଉତ୍ପାଦନ କରେ୧୪।KDML105 ଧାନ ବିହନରେ *କୋସାକୋନିଆ ଓରିଜିଫିଲା* NP19 ପ୍ରୟୋଗ କରିବା ଦ୍ୱାରା ଧାନ ବିସ୍ଫୋରଣ ସଂକ୍ରମଣ ପରେ ଧାନ ବଞ୍ଚିବାରେ ଉନ୍ନତି ଆସିଥିଲା। ଏହି ଅଧ୍ୟୟନର ଲକ୍ଷ୍ୟ ହେଉଛି (i) ଧାନ ବିସ୍ଫୋରଣ ବିରୁଦ୍ଧରେ *କୋସାକୋନିଆ ଓରିଜିଫିଲା* NP19 ର ନିରୋଧକ କ୍ରିୟାକୁ ସ୍ପଷ୍ଟ କରିବା ଏବଂ (ii) ଧାନ ବିସ୍ଫୋରଣ ନିୟନ୍ତ୍ରଣରେ *କୋସାକୋନିଆ ଓରିଜିଫିଲା* NP19 ର ପ୍ରଭାବ ଅନୁସନ୍ଧାନ କରିବା।
ପୁଷ୍ଟିକର ପଦାର୍ଥ ଗଛର ବୃଦ୍ଧି ଏବଂ ବିକାଶରେ ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରେ, ବିଭିନ୍ନ ଜୀବାଣୁ ରୋଗକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରୁଥିବା କାରକ ଭାବରେ କାର୍ଯ୍ୟ କରେ। ଏକ ଉଦ୍ଭିଦର ଖଣିଜ ପୁଷ୍ଟି ଏହାର ରୋଗ ପ୍ରତିରୋଧ, ଆକୃତିଗତ କିମ୍ବା ଟିସୁ ଗୁଣ ଏବଂ ତୀବ୍ରତା କିମ୍ବା ରୋଗଜୀବାଣୁ ବିରୁଦ୍ଧରେ ବଞ୍ଚିବାର କ୍ଷମତା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରେ। ଫସଫରସ୍ ଫେନୋଲିକ୍ ଯୌଗିକଗୁଡ଼ିକର ସଂଶ୍ଳେଷଣ ବୃଦ୍ଧି କରି ବିକାଶକୁ ଧୀର କରିପାରେ ଏବଂ ଧାନ ବିସ୍ଫୋରଣର ତୀବ୍ରତାକୁ ହ୍ରାସ କରିପାରେ। ପୋଟାସିୟମ୍ ସାଧାରଣତଃ ଧାନ ବିସ୍ଫୋରଣ, ଜୀବାଣୁ ପତ୍ର ଦାଗ, ପତ୍ର ଆବରଣ ଦାଗ, କାଣ୍ଡ ପଚା ଏବଂ ପତ୍ର ଦାଗ ଭଳି ଅନେକ ଧାନ ରୋଗର ପ୍ରକୋପକୁ ହ୍ରାସ କରେ। ପେରେନାଉଡ୍ ଦ୍ୱାରା କରାଯାଇଥିବା ଏକ ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ ଉଚ୍ଚ-ପୋଟାସିୟମ୍ ସାର ଧାନର କବକ ରୋଗର ପ୍ରକୋପକୁ ମଧ୍ୟ ହ୍ରାସ କରିପାରିବ ଏବଂ ଅମଳ ବୃଦ୍ଧି କରିପାରିବ। ଅନେକ ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ ସଲଫର୍ ସାର କବକ ରୋଗଜୀବାଣୁ ପ୍ରତି ଫସଲ ପ୍ରତିରୋଧକୁ ଉନ୍ନତ କରିପାରିବ।27ଅଧିକ ମ୍ୟାଗ୍ନେସିୟମ୍ (କ୍ଲୋରୋଫିଲର ଏକ ଉପାଦାନ) ଧାନ ଫାଟିପାରେ।21ଜିଙ୍କ୍ ସିଧାସଳଖ ରୋଗଜୀବାଣୁଙ୍କୁ ମାରିପାରେ, ଯାହା ଦ୍ଵାରା ରୋଗର ଗମ୍ଭୀରତା ହ୍ରାସ ପାଏ।22କ୍ଷେତ୍ର ପରୀକ୍ଷଣରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ ଯଦିଓ କ୍ଷେତ ମାଟିରେ ଫସଫରସ୍, ପୋଟାସିୟମ୍, ସଲଫର ଏବଂ ଜିଙ୍କ୍ ର ସାନ୍ଦ୍ରତା ପାତ୍ର ପରୀକ୍ଷଣ ତୁଳନାରେ ଅଧିକ ଥିଲା, ତଥାପି ଧାନ ବ୍ଲାଷ୍ଟିଂ ଧାନ ପତ୍ର ମାଧ୍ୟମରେ ବ୍ୟାପିଥାଏ। ମାଟିର ପୋଷକ ତତ୍ତ୍ୱ ଧାନ ବ୍ଲାଷ୍ଟିଂ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରିବାରେ ବହୁତ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ନ ହୋଇପାରେ, କାରଣ ଆପେକ୍ଷିକ ଆର୍ଦ୍ରତା ଏବଂ ତାପମାତ୍ରା ଶକ୍ତିଶାଳୀ ଜୀବାଣୁ ଆକ୍ରମଣ ପାଇଁ ପ୍ରତିକୂଳ।
କ୍ଷେତ୍ର ପରୀକ୍ଷଣରେ, ସମସ୍ତ ଚିକିତ୍ସାରେ ଷ୍ଟେନୋଟ୍ରୋଫୋମୋନାସ୍ ମାଲ୍ଟୋଫିଲିଆ, ପି. ଡିସପର୍ସା, ଜାନ୍ଥୋମୋନାସ୍ ସାଚାରି, ବର୍ଖୋଲଡେରିଆ ମଲ୍ଟିଭୋରାନ୍ସ, ବର୍ଖୋଲଡେରିଆ ଡିଫୁସା, ବର୍ଖୋଲଡେରିଆ ଭିଏଟନାମିଏନ୍ସିସ୍ ଏବଂ ସି. ଗ୍ଲେମ୍ ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇଥିଲା। ଷ୍ଟେନୋଟ୍ରୋଫୋମୋନାସ୍ ମାଲ୍ଟୋଫିଲିଆକୁ ଗହମ, ଓଟ୍ସ, କାକୁଡି, ମକା ଏବଂ ଆଳୁର ରାଇଜୋସ୍ପିୟରରୁ ପୃଥକ କରାଯାଇଛି ଏବଂ ଜୈବ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଦେଖାଇଛି।କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୋଲେଟୋଟ୍ରିଚମ୍ ନିମ୍ଫାଏ ବିରୁଦ୍ଧରେ।28 ଅଧିକନ୍ତୁ, ପି. ଡିସପର୍ସା କଳା ଶରୀର ବିରୁଦ୍ଧରେ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ବୋଲି ରିପୋର୍ଟ କରାଯାଇଛିପଚିବାମିଠା ଆଳୁ।29 ଅଧିକନ୍ତୁ, ଜାନ୍ଥୋମୋନାସ୍ ସାଚାରିର R1 ଷ୍ଟ୍ରେନ ବର୍ଖୋଲଡେରିଆ ଦ୍ୱାରା ହେଉଥିବା ଧାନ ବିସ୍ଫୋରଣ ଏବଂ ପ୍ୟାନିକାଲ ସଟ୍ ବିରୁଦ୍ଧରେ ପ୍ରତିପକ୍ଷ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଦେଖାଇଛି।ଗ୍ଲୁମାଏ.୩୦ବୁର୍ଖୋଲଡେରିଆ ଓରାଇଜା NP19 ଅଙ୍କୁରିତ ହେବା ସମୟରେ ଧାନ ଟିସୁ ସହିତ ଏକ ସହଜୀବାଣୁ ସମ୍ପର୍କ ସ୍ଥାପନ କରିପାରେ ଏବଂ କିଛି ଧାନ କିସମ ପାଇଁ ଏକ ସ୍ଥାନୀୟ ସହଜୀବାଣୁ କବକ ହୋଇପାରେ। ଅନ୍ୟ ମାଟି ଜୀବାଣୁ ପ୍ରତିରୋପଣ ପରେ ଧାନକୁ ଉପନିବେଶ କରିପାରନ୍ତି, ବ୍ଲାଷ୍ଟ ଫଙ୍ଗସ୍ NP19, ଥରେ ଉପନିବେଶିତ ହେବା ପରେ, ଏହି ରୋଗ ବିରୁଦ୍ଧରେ ଧାନର ପ୍ରତିରକ୍ଷା ଯନ୍ତ୍ରରେ ଅନେକ କାରଣକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରେ। NP19 କେବଳ P. oryzaeର ବୃଦ୍ଧିକୁ 50% ରୁ ଅଧିକ ଦମନ କରେ ନାହିଁ (ଅନଲାଇନ୍ ପରିଶିଷ୍ଟରେ ପରିପୂରକ ସାରଣୀ S1 ଦେଖନ୍ତୁ), ବରଂ ପତ୍ରରେ ବ୍ଲାଷ୍ଟ କ୍ଷତ ସଂଖ୍ୟାକୁ ମଧ୍ୟ ହ୍ରାସ କରେ ଏବଂ କ୍ଷେତ୍ର ପରୀକ୍ଷଣରେ NP19 (RBf, RFf-B, ଏବଂ RBFf-B) ସହିତ ଟୀକାଯୁକ୍ତ କିମ୍ବା ଉପନିବେଶିତ ଧାନର ଅମଳ ବୃଦ୍ଧି କରେ (ଚିତ୍ର S3)।
ପାଇକୁଲାରିଆ ଓରାଇଜା କବକ, ଯାହା ଗଛ ବିସ୍ଫୋରଣର କାରଣ ହୁଏ, ଏକ ହେମିଟ୍ରୋଫିକ କବକ ଯାହାକୁ ସଂକ୍ରମଣ ସମୟରେ ହୋଷ୍ଟ ଗଛରୁ ପୁଷ୍ଟିକର ପୋଷକ ତତ୍ତ୍ୱ ଆବଶ୍ୟକ ହୁଏ। ଗଛଗୁଡ଼ିକ ଫଙ୍ଗଲ୍ ସଂକ୍ରମଣକୁ ଦମନ କରିବା ପାଇଁ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାଶୀଳ ଅମ୍ଳଜାନ ପ୍ରଜାତି (ROS) ଉତ୍ପାଦନ କରେ; ତଥାପି, ପାଇକୁଲାରିଆ ଓରାଇଜା ହୋଷ୍ଟ-ଉତ୍ପାଦିତ ROS କୁ ପ୍ରତିହତ କରିବା ପାଇଁ ବିଭିନ୍ନ ରଣନୀତି ବ୍ୟବହାର କରେ।31ପେରୋକ୍ସିଡେଜ୍ଗୁଡ଼ିକ ରୋଗ ପ୍ରତିରୋଧରେ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରୁଥିବା ଦେଖାଯାଏ, ଯେଉଁଥିରେ କୋଷ କାନ୍ଥ ପ୍ରୋଟିନର କ୍ରସ୍-ଲିଙ୍କିଂ, ଜାଇଲେମ୍ କାନ୍ଥର ଘନତା, ROS ଉତ୍ପାଦନ ଏବଂ ହାଇଡ୍ରୋଜେନ୍ ପେରକ୍ସାଇଡ୍ର ନିରପେକ୍ଷତା ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ।32ଆଣ୍ଟିଅକ୍ସିଡାଣ୍ଟ ଏନଜାଇମଗୁଡ଼ିକ ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ROS ସ୍କାଭେଞ୍ଜିଂ ସିଷ୍ଟମ ଭାବରେ କାର୍ଯ୍ୟ କରିପାରନ୍ତି। ସେମାନଙ୍କର ଆଣ୍ଟିଅକ୍ସିଡାଣ୍ଟ ଗୁଣ ମାଧ୍ୟମରେ, ସୁପରଅକ୍ସାଇଡ୍ ଡିସମ୍ୟୁଟେଜ୍ (SOD) ଏବଂ ପେରୋକ୍ସିଡେଜ୍ (POD) ପ୍ରତିରକ୍ଷା ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଆରମ୍ଭ କରିବାରେ ସାହାଯ୍ୟ କରନ୍ତି, SOD ପ୍ରଥମ ପ୍ରତିରକ୍ଷା ଧାଡି ଭାବରେ କାର୍ଯ୍ୟ କରେ।33ଚାଉଳରେ, *ପାଇରିକୁଲାରିଆ ଓରାଇଜା* ଏବଂ *ଜାନ୍ଥୋମୋନାସ୍ ଓରାଇଜା ପିଭି. ଓରାଇଜା* ଭଳି ଉଦ୍ଭିଦ ରୋଗଜୀବାଣୁ ସଂକ୍ରମଣ ପରେ ଉଦ୍ଭିଦ ପେରୋକ୍ସିଡେଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ପ୍ରେରିତ ହୁଏ।32ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ, *Magnaporthe oryzae* NP19 ସହିତ ଉପନିବେଶିତ ଏବଂ/ଅଥବା ଟୀକାକରଣ କରାଯାଇଥିବା ଧାନରେ ପେରୋକ୍ସିଡେଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଥିଲା; ତଥାପି, *Magnaporthe oryzae* ପେରୋକ୍ସିଡେଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରିନଥିଲା। H₂O₂ ସିନ୍ଥେଜ୍ ଭାବରେ ସୁପରଅକ୍ସାଇଡ୍ ଡିସମ୍ୟୁଟେଜ୍ (SOD), O₂⁻ କୁ H₂O₂ କୁ ହ୍ରାସ କରିବାକୁ ଉତ୍ପ୍ରେରକ କରିଥାଏ। ଉଦ୍ଭିଦ ଭିତରେ H₂O₂ ର ସାନ୍ଦ୍ରତାକୁ ସନ୍ତୁଳିତ କରି ବିଭିନ୍ନ ଚାପ ପ୍ରତି ଉଦ୍ଭିଦ ପ୍ରତିରୋଧରେ SOD ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରେ, ଯାହାଦ୍ୱାରା ବିଭିନ୍ନ ଚାପ ପ୍ରତି ଉଦ୍ଭିଦ ସହନଶୀଳତା ବୃଦ୍ଧି ପାଏ³⁴। ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ, ପାତ୍ର ପରୀକ୍ଷଣରେ, *Magnaporthe oryzae* ଟୀକାକରଣ (30 DAT) ର 30 ଦିନ ପରେ, RF ଏବଂ RBF ଗୋଷ୍ଠୀରେ SOD କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଯଥାକ୍ରମେ R ଗୋଷ୍ଠୀ ତୁଳନାରେ 121.9% ଏବଂ 104.5% ଅଧିକ ଥିଲା, ଯାହା *Magnaporthe oryzae* ସଂକ୍ରମଣ ପ୍ରତି SOD ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସୂଚାଇଥାଏ। ପାତ୍ର ଏବଂ କ୍ଷେତ୍ର ପରୀକ୍ଷଣ ଉଭୟରେ, *Magnaporthe oryzae* NP19-ଇନୋକୁଲେଟେଡ୍ ଚାଉଳରେ SOD କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଟୀକାକରଣର 30 ଦିନ ପରେ ଅଣଇନୋକୁଲେଟେଡ୍ ଚାଉଳ ତୁଳନାରେ ଯଥାକ୍ରମେ 67.7% ଏବଂ 28.8% ଅଧିକ ଥିଲା। ଉଦ୍ଭିଦର ଜୈବ ରାସାୟନିକ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପରିବେଶ, ଚାପ ଉତ୍ସ ଏବଂ ଉଦ୍ଭିଦର ପ୍ରକାର³⁵ ଦ୍ୱାରା ପ୍ରଭାବିତ ହୋଇଥାଏ। ଉଦ୍ଭିଦ ଆଣ୍ଟିଅକ୍ସିଡାଣ୍ଟ ଏନଜାଇମ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ପରିବେଶଗତ କାରକ ଦ୍ୱାରା ସିଧାସଳଖ ପ୍ରଭାବିତ ହୁଏ, ଯାହା ଫଳସ୍ୱରୂପ ଉଦ୍ଭିଦ ଅଣୁଜୀବ ସମ୍ପ୍ରଦାୟକୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରି ଉଦ୍ଭିଦ ଆଣ୍ଟିଅକ୍ସିଡାଣ୍ଟ ଏନଜାଇମ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରେ।
ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ ବ୍ୟବହୃତ ଧାନ ବ୍ଲାଷ୍ଟ ରୋଗ ଫଙ୍ଗସ୍ (କୋସାକୋନିଆ ଓରିଜିଫିଲା NP19, NCBI ଆକ୍ସେସନ୍ ନମ୍ବର PP861312) ଷ୍ଟ୍ରେନ୍ ଥିଲା13ଥାଇଲ୍ୟାଣ୍ଡର ନାଖୋନ୍ ଫାନୋମ୍ ପ୍ରଦେଶରେ (୧୬° ୫୯′ ୪୨.୯″ ଉତ୍ତର ୧୦୪° ୨୨′ ୧୭.୯″ ପୂର୍ବ) ଧାନ କିସମର ମୂଳରୁ ପୃଥକୀକରଣ କରାଯାଇଛି। ଏହି ପ୍ରଜାତିକୁ ପୁଷ୍ଟିକର ଝୋଳ (NB) ରେ ୩୦° ସେଲ୍ସିୟସ୍ ଏବଂ ୧୫୦ rpm ରେ ୧୮ ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ କଲଚର କରାଯାଇଥିଲା। ଜୀବାଣୁର ସାନ୍ଦ୍ରତା ଗଣନା କରିବା ପାଇଁ, ୬୦୦ nm ରେ ଜୀବାଣୁର ସାନ୍ଦ୍ରତାର ଅବଶୋଷଣ ମାପ କରାଯାଇଥିଲା। ଜୀବାଣୁର ସାନ୍ଦ୍ରତାର ସାନ୍ଦ୍ରତାକୁ ସ୍ଥିର କରାଯାଇଥିଲା।୧୦⁶ଜୀବାଣୁମୁକ୍ତ ଡିଆୟୋନାଇଜଡ୍ ପାଣି ସହିତ CFU/mL (ଡିଏଚ୍₂ଓ)। ଧାନ ବ୍ଲାଷ୍ଟ ଫଙ୍ଗସ୍ (ପାଇରିକୁଲାରିଆ ଓରାଇଜା) କୁ ଆଳୁ ଡେକ୍ସଟ୍ରୋଜ୍ ଆଗର (PDA) ଉପରେ ସ୍ପଟ୍-ଇନୋକ୍ୟୁଲେଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ 25°C ତାପମାତ୍ରାରେ 7 ଦିନ ପାଇଁ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା। କବକ ମାଇସେଲିୟମ୍ କୁ ଚାଉଳ ବ୍ରାନ୍ ଆଗର ମଧ୍ୟମ (2% (w/v) ଚାଉଳ ବ୍ରାନ୍, 0.5% (w/v) ସୁକ୍ରୋଜ୍, ଏବଂ 2% (w/v) ଆଗରକୁ ଡିଆୟୋନାଇଜ୍ଡ ପାଣିରେ ଦ୍ରବୀଭୂତ, pH 7) ରେ ସ୍ଥାନାନ୍ତରିତ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ 25°C ତାପମାତ୍ରାରେ 7 ଦିନ ପାଇଁ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା। କୋନିଡିଆକୁ ପ୍ରେରିତ କରିବା ପାଇଁ ଏକ ସମ୍ବେଦନଶୀଳ ଧାନ କଲ୍ଟିଭାର୍ (KDML105) ର ଏକ ଜୀବାଣୁମୁକ୍ତ ପତ୍ରକୁ ମାଇସେଲିୟମ୍ ଉପରେ ରଖାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ମିଳିତ UV ଏବଂ ଧଳା ଆଲୋକରେ 5 ଦିନ ପାଇଁ 25°C ତାପମାତ୍ରାରେ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା। 10 ମିଲି ଜୀବାଣୁମୁକ୍ତ 0.025% (v/v) ଟୁଇନ୍ 20 ଦ୍ରବଣ ସହିତ ମାଇସେଲିୟମ୍ ଏବଂ ସଂକ୍ରମିତ ପତ୍ର ପୃଷ୍ଠକୁ ଧୀରେ ପୋଛି କୋନିଡିଆ ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା। ମାଇସେଲିୟମ୍, ଅଗର ଏବଂ ଚାଉଳ ପତ୍ର ବାହାର କରିବା ପାଇଁ ଫଙ୍ଗାଲ୍ ଦ୍ରବଣକୁ ଚିଜ୍କ୍ଲଥ୍ ର ଆଠଟି ସ୍ତର ମାଧ୍ୟମରେ ଛାଣି ଦିଆଯାଇଥିଲା। ଅଧିକ ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ ସସପେନସନ୍ରେ କନିଡିଆ ସାନ୍ଦ୍ରତାକୁ 5 × 10⁵ କନିଡିଆ/ମିଲିରେ ସଜାଡ଼ି ଦିଆଯାଇଥିଲା।
କୋସାକୋନିଆ ଓରିଜିଫିଲା NP19 କୋଷଗୁଡ଼ିକର ସତେଜ ସଂସ୍କୃତି 37 °C ତାପମାତ୍ରାରେ 24 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ NB ମାଧ୍ୟମରେ କଲଚର କରି ପ୍ରସ୍ତୁତ କରାଯାଇଥିଲା। ସେଣ୍ଟ୍ରିଫ୍ୟୁଗେସନ୍ (3047 × g, 10 ମିନିଟ୍) ପରେ, କୋଷ ପେଲେଟ୍ ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା, 10 mM ଫସଫେଟ୍-ବଫର୍ ହୋଇଥିବା ସାଲାଇନ୍ (PBS, pH 7.2) ସହିତ ଦୁଇଥର ଧୋଇ ଦିଆଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ସମାନ ବଫରରେ ପୁନଃସ୍ଥାପିତ କରାଯାଇଥିଲା। କୋଷ ସସପେନ୍ସନର ଅପ୍ଟିକାଲ୍ ଘନତା 600 nm ରେ ମାପ କରାଯାଇଥିଲା, ଯାହା ପ୍ରାୟ 1.0 ମୂଲ୍ୟ ପାଇଥିଲା (ପୁଷ୍ଟିକର ଆଗର ପ୍ଲେଟ୍ ଉପରେ ପ୍ଲେଟିଂ ଦ୍ୱାରା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିବା 1.0 × 10⁷ CFU/μl ସହିତ ସମତୁଲ୍ୟ)। P. oryzae ର କନିଡିଆକୁ PBS ଦ୍ରବଣରେ ସସପେନ୍ସ କରି ଏବଂ ଏକ ହେମୋସାଇଟୋମିଟର ବ୍ୟବହାର କରି ଗଣନା କରି ପ୍ରାପ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା। *K. oryziphila* NP19 ଏବଂ *P ର ସସପେନ୍ସନ। ପତ୍ର ସ୍ମିୟର ପରୀକ୍ଷଣ ପାଇଁ, K. oryziphila* conidia କୁ ଯଥାକ୍ରମେ 1.0 × 10⁷ CFU/μL ଏବଂ 5.0 × 10² conidia/μL ସାନ୍ଦ୍ରତାରେ ତାଜା ଚାଉଳ ପତ୍ରରେ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରାଯାଇଥିଲା। ଚାଉଳ ନମୁନା ପ୍ରସ୍ତୁତି ପଦ୍ଧତି ନିମ୍ନଲିଖିତ ଥିଲା: ଧାନ ବିହନରୁ 5 ସେମି ଲମ୍ବା ପତ୍ର କାଟି ପେଟ୍ରି ପାତ୍ରରେ ରଖାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଓଦା ଶୋଷକ କାଗଜ ସହିତ ଆବରଣ କରାଯାଇଥିଲା। ପାଞ୍ଚଟି ଚିକିତ୍ସା ଗୋଷ୍ଠୀ ସ୍ଥାପନ କରାଯାଇଥିଲା: (i) R: ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଭାବରେ ଜୀବାଣୁ ଟୀକା ବିନା ଚାଉଳ ପତ୍ର, 0.025% (v/v) ସହିତ ପରିପୂରକ 20 ସମାଧାନ; (ii) RB + F: ଚାଉଳ ବିସ୍ଫୋରଣ ସୃଷ୍ଟିକାରୀ ଫଙ୍ଗସର 2 μL କନିଡିଆ ସସପେନସନ ସହିତ ପରିପୂରକ K. oryziphila NP19 ସହିତ ଟୀକାକରଣ; (iii) R + BF: ଗ୍ରୁପ R ରେ ଥିବା ଚାଉଳକୁ ବ୍ଲାଷ୍ଟ ଫଙ୍ଗାଲ୍ କନିଡିଆ ସସପେନସନ ଏବଂ K. oryziphila NP19 (ଆବର୍ତ୍ତନ ଅନୁପାତ 1:1) ର ମିଶ୍ରଣର 4 μl ସହିତ ପରିପୂରକ; (iv) R + F: ଗ୍ରୁପ R ରେ ଥିବା ଚାଉଳକୁ 2 μl ବ୍ଲାଷ୍ଟ ଫଙ୍ଗାଲ୍ କନିଡିଆ ସସପେନସନ ସହିତ ପରିପୂରକ; (v) RF + B: ଗ୍ରୁପ R ରେ ଥିବା ଚାଉଳକୁ 2 μl ବ୍ଲାଷ୍ଟ ଫଙ୍ଗାଲ୍ କନିଡିଆ ସସପେନସନ ସହିତ ପରିପୂରକ କରି 30 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଇନକ୍ୟୁବେଟେଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ତାପରେ 2 μl K. oryziphila NP19 ସେହି ସ୍ଥାନରେ ଯୋଡା ଯାଇଥିଲା। ସମସ୍ତ ପେଟ୍ରି ଡିସକୁ 25°C ରେ 30 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଅନ୍ଧାରରେ ଇନକ୍ୟୁବେଟେଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ତାପରେ ନିରନ୍ତର ଆଲୋକ ତଳେ ରଖାଯାଇଥିଲା। ପ୍ରତ୍ୟେକ ଗୋଷ୍ଠୀକୁ ତ୍ରିପ୍ରତିଲିପିରେ ଗଠନ କରାଯାଇଥିଲା। 72 ଘଣ୍ଟା କଲଚର ପରେ, ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋନ୍ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପି (SEM) ସ୍କାନିଂ କରି ଉଦ୍ଭିଦ ଟିସୁଗୁଡ଼ିକୁ ପର୍ଯ୍ୟବେକ୍ଷଣ ଏବଂ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। ସଂକ୍ଷେପରେ, ଉଦ୍ଭିଦ ଟିସୁଗୁଡ଼ିକୁ 2.5% (v/v) ଗ୍ଲୁଟାରାଲଡିହାଇଡ୍ ଧାରଣ କରିଥିବା ଫସଫେଟ୍ ବଫରରେ ସ୍ଥିର କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଇଥାନଲ୍ ଦ୍ରବଣର ଏକ ଶୃଙ୍ଖଳା ମାଧ୍ୟମରେ ଡିହାଇଡ୍ରେଟେଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା। କାର୍ବନ ଡାଇଅକ୍ସାଇଡ୍ ସହିତ କ୍ରିଟିକାଲ-ପଏଣ୍ଟ ଶୁଖିବା ପରେ, ନମୁନାଗୁଡ଼ିକୁ ସୁନା ସହିତ ସ୍ପଟର-ଲେପ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଶେଷରେ ଏକ ସ୍କାନିଂ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋନ୍ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପ ବ୍ୟବହାର କରି ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇଥିଲା।15
ପୋଷ୍ଟ ସମୟ: ଡିସେମ୍ବର-୧୫-୨୦୨୫