ସେଣ୍ଟ ଜନ୍ସ ୱାର୍ଟରେ ଜୈବ ସକ୍ରିୟ ଯୌଗିକଗୁଡ଼ିକର ଇନ ଭିଟ୍ରୋ ଅର୍ଗାନଜେନେସିସ୍ ଏବଂ ଉତ୍ପାଦନ ଉପରେ ଉଦ୍ଭିଦ ବୃଦ୍ଧି ନିୟାମକ ଏବଂ ଲୁହା ଅକ୍ସାଇଡ୍ ନାନୋପାର୍ଟିକାଲ୍ସର ସମନ୍ୱୟ ପ୍ରଭାବ।

ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ, ମିଳିତ ଚିକିତ୍ସାର ଉତ୍ତେଜକ ପ୍ରଭାବଉଦ୍ଭିଦ ବୃଦ୍ଧି ନିୟାମକ*ହାଇପରିକମ୍ ପର୍ଫୋରାଟମ୍* L. ରେ ଇନ ଭିଟ୍ରୋ ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍ ଏବଂ ଦ୍ୱିତୀୟ ମେଟାବୋଲାଇଟ୍ ଉତ୍ପାଦନ ଉପରେ (2,4-D ଏବଂ କାଇନେଟିନ୍) ଏବଂ ଲୌହ ଅକ୍ସାଇଡ୍ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସ (Fe₃O₄-NPs) ତଦନ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା। ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ଡ୍ ଚିକିତ୍ସା [2,4-D (0.5 mg/L) + କାଇନେଟିନ୍ (2 mg/L) + Fe₃O₄-NPs (4 mg/L)] ଉଦ୍ଭିଦ ବୃଦ୍ଧି ପାରାମିଟରଗୁଡ଼ିକୁ ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଭାବରେ ଉନ୍ନତ କରିଥିଲା: ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗୋଷ୍ଠୀ ତୁଳନାରେ ଉଦ୍ଭିଦର ଉଚ୍ଚତା 59.6%, ମୂଳ ଲମ୍ବ 114.0%, ଅଙ୍କୁର ସଂଖ୍ୟା 180.0% ଏବଂ କାଲସ୍ ତାଜା ଓଜନ 198.3% ବୃଦ୍ଧି କରିଥିଲା। ଏହି ମିଳିତ ଚିକିତ୍ସା ପୁନର୍ଜନ୍ମ ଦକ୍ଷତା (50.85%) ବୃଦ୍ଧି କରିଥିଲା ​​ଏବଂ ହାଇପରସିନ୍ ପରିମାଣ 66.6% ବୃଦ୍ଧି କରିଥିଲା। GC-MS ବିଶ୍ଳେଷଣରୁ ହାଇପରସାଇଡ୍, β-ପାଥୋଲିନ୍ ଏବଂ ସେଟାଇଲ୍ ଆଲକୋହଲର ଉଚ୍ଚ ପରିମାଣ ପ୍ରକାଶ ପାଇଛି, ଯାହା ମୋଟ ଶିଖର କ୍ଷେତ୍ରର 93.36% ଅଟେ, ଯେତେବେଳେ ମୋଟ ଫେନୋଲିକ୍ସ ଏବଂ ଫ୍ଲାଭୋନୋଏଡ୍ସର ପରିମାଣ 80.1% ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଛି। ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ସୂଚାଇଥାଏ ଯେ ଉଦ୍ଭିଦ ବୃଦ୍ଧି ନିୟାମକ (PGRs) ଏବଂ Fe₃O₄ ନାନୋପାର୍ଟିକାଲ୍ (Fe₃O₄-NPs) ଅର୍ଗାନଜେନେସିସ୍ ଏବଂ ଜୈବ ସକ୍ରିୟ ଯୌଗିକ ସଂଗ୍ରହକୁ ଉତ୍ତେଜିତ କରି ଏକ ସମନ୍ୱୟବାଦୀ ପ୍ରଭାବ ପ୍ରୟୋଗ କରନ୍ତି, ଯାହା ଔଷଧୀୟ ଉଦ୍ଭିଦର ଜୈବପ୍ରଯୁକ୍ତିଗତ ଉନ୍ନତି ପାଇଁ ଏକ ପ୍ରତିଶ୍ରୁତିପୂର୍ଣ୍ଣ ରଣନୀତିକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ।
ସେଣ୍ଟ ଜନ୍ସ ୱାର୍ଟ (ହାଇପରିକମ୍ ପର୍ଫୋରାଟମ୍ ଏଲ୍.), ଯାହାକୁ ସେଣ୍ଟ ଜନ୍ସ ୱାର୍ଟ ଭାବରେ ମଧ୍ୟ ଜଣାଯାଏ, ଏହା ହାଇପରିକାସି ପରିବାରର ଏକ ବହୁବର୍ଷୀୟ ଔଷଧୀୟ ଉଦ୍ଭିଦ ଯାହାର ଆର୍ଥିକ ମୂଲ୍ୟ ଅଛି। [1] ଏହାର ସମ୍ଭାବ୍ୟ ଜୈବିକ ସକ୍ରିୟ ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକ ମଧ୍ୟରେ ପ୍ରାକୃତିକ ଟାନିନ୍, ଜାନ୍ଥୋନ୍, ଫ୍ଲୋରୋଗ୍ଲୁସିନୋଲ୍, ନାପ୍ଥାଲେନିଡିଆନ୍ଥ୍ରୋନ୍ (ହାଇପରିନ ଏବଂ ସ୍ୟୁଡୋହାଇପରିନ), ଫ୍ଲାଭୋନଏଡ୍ସ, ଫେନୋଲିକ୍ ଏସିଡ୍ ଏବଂ ଅତ୍ୟାବଶ୍ୟକ ତେଲ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ। [2,3,4] ସେଣ୍ଟ ଜନ୍ସ ୱାର୍ଟ ପାରମ୍ପରିକ ପଦ୍ଧତି ଦ୍ୱାରା ବଂଶବିସ୍ତାର କରାଯାଇପାରିବ; ତଥାପି, ପାରମ୍ପରିକ ପଦ୍ଧତିର ଋତୁକାଳୀନତା, କମ୍ ବିହନ ଅଙ୍କୁରିତ ହେବା ଏବଂ ରୋଗ ପ୍ରତି ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ଏହାର ବୃହତ ଚାଷ ଏବଂ ଦ୍ୱିତୀୟ ମେଟାବୋଲାଇଟ୍ସର ନିରନ୍ତର ଗଠନର ସମ୍ଭାବନାକୁ ସୀମିତ କରେ। [1,5,6]
ତେଣୁ, ଉଦ୍ଭିଦର ଦ୍ରୁତ ପ୍ରସାର, ଜର୍ମପ୍ଲାଜମ୍ ସମ୍ପଦର ସଂରକ୍ଷଣ ଏବଂ ଔଷଧୀୟ ଯୌଗିକଗୁଡ଼ିକର ବୃଦ୍ଧି ପାଇଁ ଇନ୍ ଭିଟ୍ରୋ ଟିସୁ କଲଚରକୁ ଏକ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ପଦ୍ଧତି ଭାବରେ ବିବେଚନା କରାଯାଏ [7, 8]। ଉଦ୍ଭିଦ ବୃଦ୍ଧି ନିୟାମକ (PGRs) ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରିବାରେ ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରନ୍ତି ଏବଂ କାଲସ୍ ଏବଂ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଜୀବମାନଙ୍କର ଇନ୍ ଭିଟ୍ରୋ ଚାଷ ପାଇଁ ଆବଶ୍ୟକ। ଏହି ବିକାଶମୂଳକ ପ୍ରକ୍ରିୟାଗୁଡ଼ିକର ସଫଳ ସମାପ୍ତି ପାଇଁ ସେମାନଙ୍କର ସାନ୍ଦ୍ରତା ଏବଂ ମିଶ୍ରଣର ଅପ୍ଟିମାଇଜେସନ୍ ଅତ୍ୟନ୍ତ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ [9]। ତେଣୁ, ସେଣ୍ଟ ଜନ୍ସ ୱାର୍ଟ (H. ପର୍ଫୋରାଟମ୍) [10] ର ବୃଦ୍ଧି ଏବଂ ପୁନର୍ଜନ୍ମ କ୍ଷମତାକୁ ଉନ୍ନତ କରିବା ପାଇଁ ନିୟାମକଗୁଡ଼ିକର ଉପଯୁକ୍ତ ରଚନା ଏବଂ ସାନ୍ଦ୍ରତାକୁ ବୁଝିବା ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ।
ଲୌହ ଅକ୍ସାଇଡ୍ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସ (Fe₃O₄) ହେଉଛି ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସର ଏକ ଶ୍ରେଣୀ ଯାହା ଟିସୁ କଲଚର ପାଇଁ ବିକଶିତ ହୋଇଛି କିମ୍ବା କରାଯାଉଛି। Fe₃O₄ ର ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଚୁମ୍ବକୀୟ ଗୁଣ, ଭଲ ଜୈବ ସୁସଙ୍ଗତତା ଏବଂ ଉଦ୍ଭିଦ ବୃଦ୍ଧିକୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରିବା ଏବଂ ପରିବେଶଗତ ଚାପକୁ ହ୍ରାସ କରିବାର କ୍ଷମତା ଅଛି, ତେଣୁ ଏହା ଟିସୁ କଲଚର ଡିଜାଇନରେ ଯଥେଷ୍ଟ ଧ୍ୟାନ ଆକର୍ଷଣ କରିଛି। ଏହି ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସର ସମ୍ଭାବ୍ୟ ପ୍ରୟୋଗରେ କୋଷ ବିଭାଜନକୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରିବା, ପୁଷ୍ଟିକର ଗ୍ରହଣକୁ ଉନ୍ନତ କରିବା ଏବଂ ଆଣ୍ଟିଅକ୍ସିଡାଣ୍ଟ ଏନଜାଇମଗୁଡ଼ିକୁ ସକ୍ରିୟ କରିବା ପାଇଁ ଇନ ଭିଟ୍ରୋ କଲଚରକୁ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ କରିବା ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ ହୋଇପାରେ [11]।
ଯଦିଓ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସ ଉଦ୍ଭିଦ ବୃଦ୍ଧି ଉପରେ ଭଲ ପ୍ରୋତ୍ସାହନକାରୀ ପ୍ରଭାବ ଦେଖାଇଛି, ତଥାପି *H. ପର୍ଫୋରାଟମ୍* ରେ Fe₃O₄ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସ ଏବଂ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ଡ ଉଦ୍ଭିଦ ବୃଦ୍ଧି ନିୟାମକଗୁଡ଼ିକର ମିଳିତ ପ୍ରୟୋଗ ଉପରେ ଅଧ୍ୟୟନ ବହୁତ କମ୍ ରହିଛି। ଏହି ଜ୍ଞାନର ଅଭାବ ପୂରଣ କରିବା ପାଇଁ, ଏହି ଅଧ୍ୟୟନ ଔଷଧୀୟ ଉଦ୍ଭିଦର ଗୁଣଗୁଡ଼ିକୁ ଉନ୍ନତ କରିବା ପାଇଁ ନୂତନ ଅନ୍ତର୍ଦୃଷ୍ଟି ପ୍ରଦାନ କରିବା ପାଇଁ ଇନ ଭିଟ୍ରୋ ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍ ଏବଂ ଦ୍ୱିତୀୟ ମେଟାବୋଲାଇଟ୍ ଉତ୍ପାଦନ ଉପରେ ସେମାନଙ୍କର ମିଳିତ ପ୍ରଭାବର ପ୍ରଭାବକୁ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରିଛି। ତେଣୁ, ଏହି ଅଧ୍ୟୟନର ଦୁଇଟି ଉଦ୍ଦେଶ୍ୟ ଅଛି: (1) କଲସ୍ ଗଠନ, ସୁଟ୍ ପୁନର୍ଜନ୍ମ ଏବଂ ଇନ ଭିଟ୍ରୋରେ ମୂଳ ସ୍ଥାପନକୁ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଭାବରେ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରିବା ପାଇଁ ଉଦ୍ଭିଦ ବୃଦ୍ଧି ନିୟାମକଗୁଡ଼ିକର ସାନ୍ଦ୍ରତାକୁ ଅନୁକୂଳ କରିବା; ଏବଂ (2) ଇନ ଭିଟ୍ରୋରେ ବୃଦ୍ଧି ପାରାମିଟର ଉପରେ Fe₃O₄ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସର ପ୍ରଭାବକୁ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରିବା। ଭବିଷ୍ୟତ ଯୋଜନାଗୁଡ଼ିକ ମଧ୍ୟରେ ଆକ୍ଲାଇମାଟାଇଜେସନ୍ (ଇନ୍ ଭିଟ୍ରୋ) ସମୟରେ ପୁନର୍ଜନ୍ମିତ ଉଦ୍ଭିଦଗୁଡ଼ିକର ବଞ୍ଚିବା ହାର ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ। ଆଶା କରାଯାଉଛି ଯେ ଏହି ଅଧ୍ୟୟନର ଫଳାଫଳ *H. ପର୍ଫୋରାଟମ୍* ର ମାଇକ୍ରୋପ୍ରୋପାଗେସନ୍ ଦକ୍ଷତାକୁ ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଭାବରେ ଉନ୍ନତ କରିବ, ଯାହା ଫଳରେ ଏହି ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଔଷଧୀୟ ଉଦ୍ଭିଦର ସ୍ଥାୟୀ ବ୍ୟବହାର ଏବଂ ଜୈବପ୍ରଯୁକ୍ତିବିଦ୍ୟା ପ୍ରୟୋଗରେ ଯୋଗଦାନ ଦେବ।
ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ, ଆମେ କ୍ଷେତରେ ଚାଷ ହେଉଥିବା ବାର୍ଷିକ ସେଣ୍ଟ ଜନ୍ସ ୱାର୍ଟ ଗଛ (ମାତୃ ଗଛ)ରୁ ପତ୍ର ଏକ୍ସପ୍ଲାଣ୍ଟ ପାଇଲୁ। ଏହି ଏକ୍ସପ୍ଲାଣ୍ଟଗୁଡ଼ିକୁ ଇନ ଭିଟ୍ରୋ କଲଚର ପରିସ୍ଥିତିକୁ ଉନ୍ନତ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। କଲଚର କରିବା ପୂର୍ବରୁ, ପତ୍ରଗୁଡ଼ିକୁ କିଛି ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଚାଲୁଥିବା ଡିଷ୍ଟିଲେଡ୍ ପାଣି ତଳେ ଭଲ ଭାବରେ ଧୋଇ ଦିଆଯାଇଥିଲା। ଏକ୍ସପ୍ଲାଣ୍ଟ ପୃଷ୍ଠଗୁଡ଼ିକୁ 30 ସେକେଣ୍ଡ ପାଇଁ 70% ଇଥାନଲ୍‌ରେ ବୁଡ଼ାଇ ଜୀବାଣୁମୁକ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା, ତା’ପରେ 1.5% ସୋଡିୟମ୍ ହାଇପୋକ୍ଲୋରାଇଟ୍ (NaOCl) ଦ୍ରବଣରେ 10 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ କିଛି ବୁନ୍ଦା ଟୁଇନ୍ 20 ଧାରଣ କରି ବୁଡ଼ାଇ ଦିଆଯାଇଥିଲା। ଶେଷରେ, ପରବର୍ତ୍ତୀ କଲଚର ମାଧ୍ୟମକୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତର କରିବା ପୂର୍ବରୁ ଏକ୍ସପ୍ଲାଣ୍ଟଗୁଡ଼ିକୁ ଜୀବାଣୁମୁକ୍ତ ଡିଷ୍ଟିଲେଡ୍ ପାଣିରେ ତିନିଥର ଧୋଇ ଦିଆଯାଇଥିଲା।
ପରବର୍ତ୍ତୀ ଚାରି ସପ୍ତାହ ମଧ୍ୟରେ, ପୁନର୍ଜନ୍ମ ହାର, ପ୍ରତି ଏକ୍ସପ୍ଲାଣ୍ଟରେ ଅଙ୍କ ସଂଖ୍ୟା ଏବଂ ଅଙ୍କ ଲମ୍ବ ସମେତ କାଟୁ ପୁନର୍ଜନ୍ମ ପାରାମିଟରଗୁଡ଼ିକ ମାପ କରାଯାଇଥିଲା। ଯେତେବେଳେ ପୁନଃଜନ୍ମିତ କାଟୁ ଅତି କମରେ 2 ସେମି ଲମ୍ବରେ ପହଞ୍ଚିଲା, ସେଗୁଡ଼ିକୁ ଅଧା-ଶକ୍ତି MS ମାଧ୍ୟମ, 0.5 mg/L ଇଣ୍ଡୋଲେବ୍ୟୁଟାଇରିକ ଏସିଡ୍ (IBA), ଏବଂ 0.3% ଗୁଆର୍ ଗମ୍ ବିଶିଷ୍ଟ ଏକ ମୂଳ ମାଧ୍ୟମକୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତରିତ କରାଯାଇଥିଲା। ରୁଟିଂ କଲଚର ତିନି ସପ୍ତାହ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଜାରି ରହିଥିଲା, ଏହି ସମୟ ମଧ୍ୟରେ ରୁଟିଂ ହାର, ମୂଳ ସଂଖ୍ୟା ଏବଂ ମୂଳ ଲମ୍ବ ମାପ କରାଯାଇଥିଲା। ପ୍ରତ୍ୟେକ ଚିକିତ୍ସାକୁ ତିନି ଥର ପୁନରାବୃତ୍ତି କରାଯାଇଥିଲା, ପ୍ରତି ପ୍ରତିକୃତିରେ 10ଟି ଏକ୍ସପ୍ଲାଣ୍ଟ କଲଚର କରାଯାଇଥିଲା, ଯାହା ପ୍ରତି ଚିକିତ୍ସାରେ ପ୍ରାୟ 30ଟି ଏକ୍ସପ୍ଲାଣ୍ଟ ପ୍ରଦାନ କରିଥିଲା।
ଗଛର ମୂଳରୁ ସବୁଠାରୁ ଉଚ୍ଚ ପତ୍ରର ଅଗ୍ରଭାଗ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଏକ ରୁଲର ବ୍ୟବହାର କରି ଗଛର ଉଚ୍ଚତା ସେଣ୍ଟିମିଟର (ସେମି) ରେ ମାପ କରାଯାଇଥିଲା। ଚାରାଗୁଡ଼ିକୁ ସତର୍କତାର ସହିତ ଅପସାରଣ କରିବା ଏବଂ ବଢ଼ୁଥିବା ମାଧ୍ୟମକୁ ଅପସାରଣ କରିବା ପରେ ମୂଳ ଲମ୍ବ ମିଲିମିଟର (ମିମି) ରେ ମାପ କରାଯାଇଥିଲା। ପ୍ରତ୍ୟେକ ଗଛରେ ପ୍ରତି ବିସ୍ତାରକ ଅଙ୍କୁର ସଂଖ୍ୟା ସିଧାସଳଖ ଗଣନା କରାଯାଇଥିଲା। ପତ୍ରରେ କଳା ଦାଗ ସଂଖ୍ୟା, ଯାହାକୁ ନୋଡୁଲ୍ସ କୁହାଯାଏ, ଦୃଶ୍ୟମାନ ଭାବରେ ମାପ କରାଯାଇଥିଲା। ଏହି କଳା ନୋଡୁଲ୍ସଗୁଡ଼ିକୁ ହାଇପରସିନ୍ କିମ୍ବା ଅକ୍ସିଡେଟିଭ୍ ଦାଗ ଥିବା ଗ୍ରନ୍ଥି ବୋଲି ବିଶ୍ୱାସ କରାଯାଏ ଏବଂ ଚିକିତ୍ସା ପ୍ରତି ଉଦ୍ଭିଦର ପ୍ରତିକ୍ରିୟାର ଏକ ଶାରୀରିକ ସୂଚକ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ। ସମସ୍ତ ବଢ଼ୁଥିବା ମାଧ୍ୟମକୁ ଅପସାରଣ କରିବା ପରେ, ଚାରାଗୁଡ଼ିକର ତାଜା ଓଜନ ମିଲିଗ୍ରାମ (ମିଗ୍ରା) ସଠିକତା ସହିତ ଏକ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋନିକ୍ ସ୍କେଲ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ମାପ କରାଯାଇଥିଲା।
କାଲସ୍ ଗଠନର ହାର ଗଣନା କରିବାର ପଦ୍ଧତି ନିମ୍ନଲିଖିତ: ବିଭିନ୍ନ ବୃଦ୍ଧି ନିୟାମକ (କିନାସେସ୍, 2,4-D, ଏବଂ Fe3O4) ଥିବା ଏକ ମାଧ୍ୟମରେ ଚାରି ସପ୍ତାହ ପାଇଁ ଏକ୍ସପ୍ଲାଣ୍ଟ କଲଚର କରିବା ପରେ, କାଲସ୍ ଗଠନ କରିବାକୁ ସକ୍ଷମ ଏକ୍ସପ୍ଲାଣ୍ଟ ସଂଖ୍ୟା ଗଣନା କରାଯାଏ। କାଲସ୍ ଗଠନର ହାର ଗଣନା କରିବାର ସୂତ୍ର ନିମ୍ନଲିଖିତ:
ପ୍ରତ୍ୟେକ ଚିକିତ୍ସା ତିନିଥର ପୁନରାବୃତ୍ତି କରାଯାଇଥିଲା, ପ୍ରତ୍ୟେକ ପୁନରାବୃତ୍ତିରେ ଅତି କମରେ 10ଟି ଏକ୍ସପ୍ଲାଣ୍ଟ ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇଥିଲା।
ପୁନର୍ଜନ୍ମ ହାର କଲସ୍ ଗଠନ ପର୍ଯ୍ୟାୟ ପରେ କଲସ୍ ଟିସୁର ଅନୁପାତକୁ ପ୍ରତିଫଳିତ କରେ ଯାହା ସଫଳତାର ସହିତ କଟି ବିଭେଦ ପ୍ରକ୍ରିୟାକୁ ସମାପ୍ତ କରେ। ଏହି ସୂଚକ କଲସ୍ ଟିସୁର ଭିନ୍ନ ଟିସୁରେ ରୂପାନ୍ତରିତ ହେବା ଏବଂ ନୂତନ ଉଦ୍ଭିଦ ଅଙ୍ଗରେ ବୃଦ୍ଧି ପାଇବାର କ୍ଷମତାକୁ ପ୍ରଦର୍ଶନ କରେ।
ମୂଳୀକରଣ ଗୁଣାଙ୍କ ହେଉଛି ମୂଳ ସୃଷ୍ଟି କରିବାକୁ ସକ୍ଷମ ଶାଖା ସଂଖ୍ୟା ଏବଂ ମୋଟ ଶାଖା ସଂଖ୍ୟାର ଅନୁପାତ। ଏହି ସୂଚକ ମୂଳୀକରଣ ପର୍ଯ୍ୟାୟର ସଫଳତାକୁ ପ୍ରତିଫଳିତ କରେ, ଯାହା ସୂକ୍ଷ୍ମ ପ୍ରଜନନ ଏବଂ ଉଦ୍ଭିଦ ପ୍ରସାରଣରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ, କାରଣ ଭଲ ମୂଳୀକରଣ ଚାରାଗୁଡ଼ିକୁ ବଢ଼ୁଥିବା ପରିସ୍ଥିତିରେ ଭଲ ଭାବରେ ବଞ୍ଚିବାରେ ସାହାଯ୍ୟ କରେ।
90% ମିଥାନଲ୍ ସହିତ ହାଇପରସିନ୍ ଯୌଗିକ ବାହାର କରାଯାଇଥିଲା। ପଚାଶ ମିଗ୍ରା ଶୁଖିଲା ଉଦ୍ଭିଦ ସାମଗ୍ରୀକୁ 1 ମିଲି ମିଥାନଲ୍ ସହିତ ଯୋଡା ଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଅନ୍ଧାରରେ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ ଏକ ଅଲ୍ଟ୍ରାସୋନିକ୍ କ୍ଲିନର୍ (ମଡେଲ୍ A5120-3YJ) ରେ 30 kHz ରେ 20 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ସୋନିକେଟ କରାଯାଇଥିଲା। ସୋନିକେଟେସନ୍ ପରେ, ନମୁନାକୁ 15 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 6000 rpm ରେ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫ୍ୟୁଗ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ସୁପରନାଟାଣ୍ଟ ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ କନସିକାଓ ଏଟ୍ ଅଲ୍ ଦ୍ୱାରା ବର୍ଣ୍ଣିତ ପଦ୍ଧତି ଅନୁସାରେ ଏକ ପ୍ଲସ୍-3000 S ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋଫୋଟୋମିଟର୍ ବ୍ୟବହାର କରି ହାଇପରସିନ୍ ର ଅବଶୋଷଣ 592 nm ରେ ମାପ କରାଯାଇଥିଲା। [14]।
ଉଦ୍ଭିଦ ବୃଦ୍ଧି ନିୟାମକ (PGRs) ଏବଂ ଲୁହା ଅକ୍ସାଇଡ୍ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସ (Fe₃O₄-NPs) ସହିତ ଅଧିକାଂଶ ଚିକିତ୍ସା ପୁନର୍ଜନ୍ମିତ କାଣ୍ଡ ପତ୍ରରେ କଳା ନୋଡ୍ୟୁଲ୍ ଗଠନକୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରିନଥିଲା। 0.5 କିମ୍ବା 1 mg/L 2,4-D, 0.5 କିମ୍ବା 1 mg/L କିନେଟିନ୍, କିମ୍ବା 1, 2, କିମ୍ବା 4 mg/L ଲୁହା ଅକ୍ସାଇଡ୍ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସ ସହିତ କୌଣସି ଚିକିତ୍ସାରେ କୌଣସି ନୋଡ୍ୟୁଲ୍ ପରିଲକ୍ଷିତ ହୋଇନଥିଲା। କିଛି ମିଶ୍ରଣ କାଇନେଟିନ୍ ଏବଂ/କିମ୍ବା ଲୁହା ଅକ୍ସାଇଡ୍ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସର ଅଧିକ ସାନ୍ଦ୍ରତାରେ ନୋଡ୍ୟୁଲ୍ ବିକାଶରେ ସାମାନ୍ୟ ବୃଦ୍ଧି ଦେଖାଇଥିଲା (କିନ୍ତୁ ପରିସଂଖ୍ୟାନଗତ ଭାବରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ନୁହେଁ), ଯେପରିକି 2,4-D (0.5-2 mg/L) ସହିତ କାଇନେଟିନ୍ (1-1.5 mg/L) ଏବଂ ଲୁହା ଅକ୍ସାଇଡ୍ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସ (2-4 mg/L) ର ମିଶ୍ରଣ। ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ଚିତ୍ର 2 ରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି। କଳା ନୋଡ୍ୟୁଲ୍ସ ହାଇପରସିନ୍-ସମୃଦ୍ଧ ଗ୍ରନ୍ଥିକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ, ଉଭୟ ପ୍ରାକୃତିକ ଭାବରେ ଘଟୁଥିବା ଏବଂ ଲାଭଦାୟକ। ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ, କଳା ନୋଡ୍ୟୁଲ୍ ମୁଖ୍ୟତଃ ଟିସୁର ବାଦାମୀ ହେବା ସହିତ ଜଡିତ ଥିଲା, ଯାହା ହାଇପରସିନ୍ ସଂଗ୍ରହ ପାଇଁ ଏକ ଅନୁକୂଳ ପରିବେଶ ସୂଚାଇଥାଏ। 2,4-D, କାଇନେଟିନ୍ ଏବଂ Fe₃O₄ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସ ସହିତ ଚିକିତ୍ସା କଲସ୍ ବୃଦ୍ଧି, ବ୍ରାଉନ୍ ରଙ୍ଗ ହ୍ରାସ ଏବଂ କ୍ଲୋରୋଫିଲ୍ ପରିମାଣ ବୃଦ୍ଧିକୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରିଥିଲା, ଯାହା ଉନ୍ନତ ମେଟାବୋଲିକ୍ କାର୍ଯ୍ୟ ଏବଂ ଅକ୍ସିଡେଟିଭ୍ କ୍ଷତିର ସମ୍ଭାବ୍ୟ ହ୍ରାସକୁ ସୂଚାଇଥିଲା [37]। ଏହି ଅଧ୍ୟୟନ ସେଣ୍ଟ ଜନ୍ସ ୱାର୍ଟ କଲସ୍ (ଚିତ୍ର 3a–g) ର ବୃଦ୍ଧି ଏବଂ ବିକାଶ ଉପରେ 2,4-D ଏବଂ Fe₃O₄ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସ ସହିତ ମିଶ୍ରଣରେ କାଇନେଟିନର ପ୍ରଭାବ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରିଥିଲା। ପୂର୍ବ ଅଧ୍ୟୟନଗୁଡିକ ଦେଖାଇଛି ଯେ Fe₃O₄ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସରେ ଆଣ୍ଟିଫଙ୍ଗାଲ୍ ଏବଂ ଆଣ୍ଟିମାଇକ୍ରୋବାୟଲ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଅଛି [38, 39] ଏବଂ, ଯେତେବେଳେ ଉଦ୍ଭିଦ ବୃଦ୍ଧି ନିୟାମକଙ୍କ ସହିତ ମିଶ୍ରଣରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଏ, ସେତେବେଳେ ଉଦ୍ଭିଦ ପ୍ରତିରକ୍ଷା ଯନ୍ତ୍ରକୁ ଉତ୍ତେଜିତ କରିପାରେ ଏବଂ କୋଷୀୟ ଚାପ ସୂଚକାଙ୍କକୁ ହ୍ରାସ କରିପାରେ [18]। ଯଦିଓ ଦ୍ୱିତୀୟ ମେଟାବୋଲାଇଟ୍ସର ଜୈବିକ ସଂଶ୍ଳେଷଣ ଜେନେଟିକାଲ୍ ଭାବରେ ନିୟନ୍ତ୍ରିତ ହୋଇଥାଏ, ସେମାନଙ୍କର ପ୍ରକୃତ ଉତ୍ପାଦନ ପରିବେଶଗତ ପରିସ୍ଥିତି ଉପରେ ଅତ୍ୟନ୍ତ ନିର୍ଭରଶୀଳ। ମେଟାବୋଲିକ୍ ଏବଂ ଆକୃତିଗତ ପରିବର୍ତ୍ତନ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଉଦ୍ଭିଦ ଜିନ୍ ର ପ୍ରକାଶନକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରି ଏବଂ ପରିବେଶଗତ କାରକଗୁଡ଼ିକର ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଦ୍ୱାରା ଦ୍ୱିତୀୟ ମେଟାବୋଲିଟ୍ ସ୍ତରକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରିପାରିବ। ଅଧିକନ୍ତୁ, ପ୍ରେରକମାନେ ନୂତନ ଜିନ୍‌ର ସକ୍ରିୟକରଣକୁ ଟ୍ରିଗର କରିପାରିବେ, ଯାହା ପରେ ଏନଜାଇମାଟିକ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ଉତ୍ତେଜିତ କରି, ଶେଷରେ ବହୁବିଧ ଜୈବସଂଶ୍ଳେଷଣ ପଥକୁ ସକ୍ରିୟ କରି ଦ୍ୱିତୀୟ ମେଟାବୋଲାଇଟ୍ ଗଠନକୁ ନେଇଯାଏ। ଏହା ବ୍ୟତୀତ, ଅନ୍ୟ ଏକ ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ ଛାଇ ହ୍ରାସ କରିବା ଦ୍ୱାରା ସୂର୍ଯ୍ୟାଲୋକର ଆଲୋକ ବୃଦ୍ଧି ପାଏ, ଯାହା ଫଳରେ *ହାଇପରିକମ୍ ପର୍ଫୋରାଟମ୍* ର ପ୍ରାକୃତିକ ବାସସ୍ଥାନରେ ଦିନର ତାପମାତ୍ରା ବୃଦ୍ଧି ପାଏ, ଯାହା ହାଇପରସିନ୍ ଉତ୍ପାଦନ ବୃଦ୍ଧି କରିବାରେ ମଧ୍ୟ ସହାୟକ ହୁଏ। ଏହି ତଥ୍ୟ ଉପରେ ଆଧାର କରି, ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଟିସୁ କଲଚରରେ ସମ୍ଭାବ୍ୟ ପ୍ରେରକ ଭାବରେ ଲୁହା ନାନୋପାର୍ଟିକାଲ୍ସର ଭୂମିକା ଅନୁସନ୍ଧାନ କରାଯାଇଥିଲା। ଫଳାଫଳରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ ଏହି ନାନୋପାର୍ଟିକାଲ୍ସ ଏନଜାଇମାଟିକ୍ ଉତ୍ତେଜନା ମାଧ୍ୟମରେ ହେସ୍ପେରିଡିନ୍ ଜୈବସଂଶ୍ଳେଷଣରେ ସାମିଲ ଜିନ୍‌କୁ ସକ୍ରିୟ କରିପାରିବ, ଯାହା ଫଳରେ ଏହି ଯୌଗିକର ସଂଗ୍ରହ ବୃଦ୍ଧି ପାଏ (ଚିତ୍ର 2)। ତେଣୁ, ପ୍ରାକୃତିକ ପରିସ୍ଥିତିରେ ବଢ଼ୁଥିବା ଉଦ୍ଭିଦମାନଙ୍କ ତୁଳନାରେ, ଏହା ଯୁକ୍ତି କରାଯାଇପାରେ ଯେ ମଧ୍ୟମ ଚାପକୁ ଦ୍ୱିତୀୟ ମେଟାବୋଲାଇଟ୍ସର ଜୈବସଂଶ୍ଳେଷଣରେ ସାମିଲ ଜିନ୍‌ର ସକ୍ରିୟକରଣ ସହିତ ମିଶ୍ରିତ କଲେ ଭିଭୋରେ ଏପରି ଯୌଗିକଗୁଡ଼ିକର ଉତ୍ପାଦନ ମଧ୍ୟ ବୃଦ୍ଧି ପାଇପାରିବ। ମିଶ୍ରଣ ଚିକିତ୍ସା ସାଧାରଣତଃ ପୁନର୍ଜନ୍ମ ହାର ଉପରେ ସକାରାତ୍ମକ ପ୍ରଭାବ ପକାଇଥାଏ, କିନ୍ତୁ କିଛି କ୍ଷେତ୍ରରେ, ଏହି ପ୍ରଭାବ ଦୁର୍ବଳ ହୋଇଯାଏ। ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଭାବରେ, 1 mg/L 2,4-D, 1.5 mg/L କାଇନେଜ୍ ଏବଂ ବିଭିନ୍ନ ସାନ୍ଦ୍ରତା ସହିତ ଚିକିତ୍ସା ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗୋଷ୍ଠୀ ତୁଳନାରେ ସ୍ୱାଧୀନ ଭାବରେ ଏବଂ ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଭାବରେ ପୁନର୍ଜନ୍ମ ହାରକୁ 50.85% ବୃଦ୍ଧି କରିପାରିବ (ଚିତ୍ର 4c)। ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ ନାନୋହର୍ମୋନର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ମିଶ୍ରଣ ଉଦ୍ଭିଦ ବୃଦ୍ଧି ଏବଂ ମେଟାବୋଲାଇଟ୍ ଉତ୍ପାଦନକୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରିବା ପାଇଁ ସମନ୍ୱୟମୂଳକ ଭାବରେ କାର୍ଯ୍ୟ କରିପାରିବ, ଯାହା ଔଷଧୀୟ ଉଦ୍ଭିଦର ଟିସୁ କଲଚର ପାଇଁ ବହୁତ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ। ପାଲମର ଏବଂ କେଲର [50] ଦେଖାଇଛନ୍ତି ଯେ 2,4-D ଚିକିତ୍ସା ସ୍ୱାଧୀନ ଭାବରେ ସେଣ୍ଟ ପର୍ଫୋରାଟମ୍‌ରେ କଲସ୍ ଗଠନକୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରିପାରିବ, ଯେତେବେଳେ କିନେଜ୍ ଯୋଗ କରିବା ଦ୍ୱାରା କଲସ୍ ଗଠନ ଏବଂ ପୁନର୍ଜନ୍ମକୁ ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଭାବରେ ବୃଦ୍ଧି କରାଯାଇଥିଲା। ଏହି ପ୍ରଭାବ ହରମୋନ୍ ସନ୍ତୁଳନର ଉନ୍ନତି ଏବଂ କୋଷ ବିଭାଜନର ଉତ୍ତେଜନା ଯୋଗୁଁ ହୋଇଥିଲା। ବାଲ୍ ଏବଂ ଅନ୍ୟମାନେ [51] ଜାଣିପାରିଲେ ଯେ Fe₃O₄-NP ଚିକିତ୍ସା ସ୍ୱାଧୀନ ଭାବରେ ଆଣ୍ଟିଅକ୍ସିଡାଣ୍ଟ ଏନଜାଇମଗୁଡ଼ିକର କାର୍ଯ୍ୟକୁ ବୃଦ୍ଧି କରିପାରିବ, ଯାହା ଦ୍ଵାରା ସେଣ୍ଟ ପର୍ଫୋରାଟମ୍‌ରେ ମୂଳ ବୃଦ୍ଧିକୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରେ। 0.5 mg/L, 1 mg/L, ଏବଂ 1.5 mg/L ସାନ୍ଦ୍ରତାରେ Fe₃O₄ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସ ଧାରଣ କରୁଥିବା ସଂସ୍କୃତି ଗଣମାଧ୍ୟମ ଅଳସୀ ଗଛର ପୁନର୍ଜନ୍ମ ହାରକୁ ଉନ୍ନତ କରିଥିଲା ​​[52]। କାଇନେଟିନ୍, 2,4-ଡାଇକ୍ଲୋରୋବେଞ୍ଜୋଥିଆଜୋଲିନୋନ୍, ଏବଂ Fe₃O₄ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସର ବ୍ୟବହାର କଲସ୍ ଏବଂ ମୂଳ ଗଠନ ହାରକୁ ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଭାବରେ ଉନ୍ନତ କରିଛି, ତଥାପି, ଇନ ଭିଟ୍ରୋ ପୁନର୍ଜନ୍ମ ପାଇଁ ଏହି ହରମୋନଗୁଡ଼ିକୁ ବ୍ୟବହାର କରିବାର ସମ୍ଭାବ୍ୟ ପାର୍ଶ୍ୱ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାଗୁଡ଼ିକୁ ବିଚାର କରିବାକୁ ପଡିବ। ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, 2,4-ଡାଇକ୍ଲୋରୋବେଞ୍ଜୋଥିଆଜୋଲିନୋନ୍ କିମ୍ବା କାଇନେଟିନ୍‌ର ଦୀର୍ଘକାଳୀନ କିମ୍ବା ଉଚ୍ଚ-ସାନ୍ଦ୍ରତା ବ୍ୟବହାର ସୋମାଟିକ୍ କ୍ଲୋନାଲ ପରିବର୍ତ୍ତନ, ଅକ୍ସିଡେଟିଭ୍ ଚାପ, ଅସ୍ୱାଭାବିକ କଲସ୍ ମର୍ଫୋଲୋଜି, କିମ୍ବା ଭିଟ୍ରିଫିକେସନ୍ ହୋଇପାରେ। ତେଣୁ, ଏକ ଉଚ୍ଚ ପୁନର୍ଜନ୍ମ ହାର ଆବଶ୍ୟକ ଭାବରେ ଜେନେଟିକ୍ ସ୍ଥିରତା ପୂର୍ବାନୁମାନ କରେ ନାହିଁ। ସମସ୍ତ ପୁନର୍ଜନ୍ମିତ ଉଦ୍ଭିଦଗୁଡ଼ିକୁ ଆଣବିକ ମାର୍କର (ଯଥା RAPD, ISSR, AFLP) କିମ୍ବା ସାଇଟୋଜେନେଟିକ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ ବ୍ୟବହାର କରି ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯିବା ଉଚିତ ଯାହା ଦ୍ୱାରା ସେମାନଙ୍କର ଏକରୂପତା ଏବଂ ଭିଭୋ ଉଦ୍ଭିଦ ସହିତ ସମାନତା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇପାରିବ [53,54,55]।
ଏହି ଅଧ୍ୟୟନ ପ୍ରଥମ ଥର ପାଇଁ ଦର୍ଶାଇଛି ଯେ Fe₃O₄ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସ ସହିତ ଉଦ୍ଭିଦ ବୃଦ୍ଧି ନିୟାମକ (2,4-D ଏବଂ କିନେଟିନ୍) ର ମିଳିତ ବ୍ୟବହାର *ହାଇପରିକମ୍ ପର୍ଫୋରାଟମ୍* ରେ ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍ ଏବଂ ପ୍ରମୁଖ ଜୈବ ସକ୍ରିୟ ମେଟାବୋଲାଇଟ୍ସ (ହାଇପରସିନ୍ ଏବଂ ହାଇପରସାଇଡ୍ ସମେତ) ସଂଗ୍ରହକୁ ବୃଦ୍ଧି କରିପାରିବ। ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ଡ ଚିକିତ୍ସା ପଦ୍ଧତି (1 mg/L 2,4-D + 1 mg/L କିନେଟିନ୍ + 4 mg/L Fe₃O₄-NPs) କେବଳ କାଲସ୍ ଗଠନ, ଅର୍ଗାନଜେନେସିସ୍ ଏବଂ ଦ୍ୱିତୀୟ ମେଟାବୋଲାଇଟ୍ ଉତ୍ପାଦନକୁ ସର୍ବାଧିକ କରିନାହିଁ ବରଂ ଏକ ମୃଦୁ ପ୍ରେରଣାଦାୟକ ପ୍ରଭାବ ମଧ୍ୟ ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିଛି, ଯାହା ଉଦ୍ଭିଦର ଚାପ ସହନଶୀଳତା ଏବଂ ଔଷଧୀୟ ମୂଲ୍ୟକୁ ସମ୍ଭାବ୍ୟ ଭାବରେ ଉନ୍ନତ କରୁଛି। ନାନୋଟେକ୍ନୋଲୋଜି ଏବଂ ଉଦ୍ଭିଦ ଟିସୁ କଲଚରର ମିଶ୍ରଣ ଔଷଧୀୟ ଯୌଗିକଗୁଡ଼ିକର ବଡ଼ ପରିମାଣର ଇନ ଭିଟ୍ରୋ ଉତ୍ପାଦନ ପାଇଁ ଏକ ସ୍ଥାୟୀ ଏବଂ ଦକ୍ଷ ପ୍ଲାଟଫର୍ମ ପ୍ରଦାନ କରେ। ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ଆଣବିକ ଯନ୍ତ୍ରପାତିର ଶିଳ୍ପ ପ୍ରୟୋଗ ଏବଂ ଭବିଷ୍ୟତ ଗବେଷଣା ପାଇଁ ପଥ ପ୍ରଶସ୍ତ କରେ, ଯାହାଦ୍ୱାରା ଔଷଧୀୟ ଉଦ୍ଭିଦ ଉପରେ ମୌଳିକ ଗବେଷଣାକୁ ବ୍ୟବହାରିକ ଜୈବ ପ୍ରଯୁକ୍ତିବିଦ୍ୟା ସହିତ ସଂଯୋଗ କରିଥାଏ।