ପରିମାଣାତ୍ମକ ଗିବେରେଲିନ୍ ବାୟୋସେନ୍ସର ଶୁଟ୍ ଆପିକାଲ୍ ମେରିଷ୍ଟେମ୍‌ରେ ଇଣ୍ଟରନୋଡ୍ ସ୍ପେସିଫିକେସନ୍‌ରେ ଗିବେରେଲିନ୍‌ର ଭୂମିକା ପ୍ରକାଶ କରେ

କାଣ୍ଡ ଗଠନ ପାଇଁ ସୁଟ୍ ଆପିକାଲ୍ ମେରିଷ୍ଟେମ୍ (SAM) ବୃଦ୍ଧି ଅତ୍ୟନ୍ତ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ। ଉଦ୍ଭିଦ ହରମୋନ୍ଗିବେରେଲିନ୍(GAs) ଉଦ୍ଭିଦ ବୃଦ୍ଧି ସମନ୍ୱୟ କରିବାରେ ପ୍ରମୁଖ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରନ୍ତି, କିନ୍ତୁ SAM ରେ ସେମାନଙ୍କର ଭୂମିକା ଖରାପ ଭାବରେ ବୁଝାପଡ଼ି ରହିଛି। ଏଠାରେ, ଆମେ GA ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନଲ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ଏହାର ଜରୁରୀ ନିୟାମକ କାର୍ଯ୍ୟକୁ ଦମନ କରିବା ପାଇଁ DELLA ପ୍ରୋଟିନ୍ ଇଞ୍ଜିନିୟରିଂ କରି GA ସିଗନାଲିଂର ଏକ ରେଟିଓମେଟ୍ରିକ୍ ବାୟୋସେନ୍ସର ବିକଶିତ କରିଛୁ ଏବଂ GA ଚିହ୍ନଟକରଣ ଉପରେ ଏହାର ଅବନତିକୁ ସଂରକ୍ଷଣ କରି ରଖିଛୁ। ଆମେ ପ୍ରଦର୍ଶନ କରୁଛୁ ଯେ ଏହି ଅବନତି-ଆଧାରିତ ବାୟୋସେନ୍ସର ବିକାଶ ସମୟରେ GA ସ୍ତର ଏବଂ ସେଲୁଲାର ସେନ୍ସିଂରେ ପରିବର୍ତ୍ତନକୁ ସଠିକ୍ ଭାବରେ ରେକର୍ଡ କରେ। ଆମେ SAM ରେ GA ସିଗନାଲିଂ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ମ୍ୟାପ୍ କରିବା ପାଇଁ ଏହି ବାୟୋସେନ୍ସର ବ୍ୟବହାର କରିଛୁ। ଆମେ ଦେଖାଉଛୁ ଯେ ଉଚ୍ଚ GA ସିଗନାଲଗୁଡ଼ିକ ମୁଖ୍ୟତଃ ଅଙ୍ଗ ପ୍ରାଇମୋର୍ଡିଆ ମଧ୍ୟରେ ଅବସ୍ଥିତ କୋଷଗୁଡ଼ିକରେ ଉପସ୍ଥିତ ଥାଏ, ଯାହା ଇଣ୍ଟର୍ନୋଡ୍ କୋଷର ପୂର୍ବବର୍ତ୍ତୀ। ଲାଭ ଏବଂ କାର୍ଯ୍ୟ କ୍ଷତି ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର କରି, ଆମେ ଆହୁରି ପ୍ରଦର୍ଶନ କରୁଛୁ ଯେ GA କୋଷ ବିଭାଜନ ସମତଳର ଦିଗନିର୍ଦ୍ଦେଶକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରେ, ଇଣ୍ଟର୍ନୋଡ୍ ର କାନୋନିକାଲ୍ ସେଲ୍ୟୁଲାର୍ ସଂଗଠନ ସ୍ଥାପନ କରେ, ଏହାଦ୍ୱାରା SAM ରେ ଇଣ୍ଟର୍ନୋଡ୍ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟକରଣକୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରେ।
ଶୁଟ୍ ଆପିକାଲ୍ ମେରିଷ୍ଟେମ୍ (SAM), ଯାହା ଶୁଟ୍ ଶୀର୍ଷରେ ଅବସ୍ଥିତ, ଷ୍ଟେମ୍ କୋଷଗୁଡ଼ିକର ଏକ ସ୍ଥାନ ଧାରଣ କରେ ଯାହାର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଉଦ୍ଭିଦର ସାରା ଜୀବନରେ ଏକ ମଡ୍ୟୁଲାର୍ ଏବଂ ପୁନରାବୃତ୍ତିମୂଳକ ଭାବରେ ପାର୍ଶ୍ଵିକ ଅଙ୍ଗ ଏବଂ ଷ୍ଟେମ୍ ନୋଡ୍ ସୃଷ୍ଟି କରେ। ଏହି ପୁନରାବୃତ୍ତି ୟୁନିଟ୍, କିମ୍ବା ଉଦ୍ଭିଦ ନୋଡ୍ ମଧ୍ୟରୁ ପ୍ରତ୍ୟେକରେ ନୋଡ୍‌ଗୁଡ଼ିକରେ ଇଣ୍ଟରନୋଡ୍ ଏବଂ ପାର୍ଶ୍ଵିକ ଅଙ୍ଗ ଏବଂ ପତ୍ର ଅକ୍ଷରେ ଅକ୍ଷ ମେରିଷ୍ଟେମ୍ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ। ବିକାଶ ସମୟରେ ଉଦ୍ଭିଦ ନୋଡ୍‌ଗୁଡ଼ିକର ବୃଦ୍ଧି ଏବଂ ସଂଗଠନ ପରିବର୍ତ୍ତନ ହୁଏ। ଆରବିଡୋପ୍ସିସ୍‌ରେ, ଉଦ୍ଭିଦ ପର୍ଯ୍ୟାୟ ସମୟରେ ଇଣ୍ଟରନୋଡାଲ୍ ବୃଦ୍ଧି ଦମନ କରାଯାଏ, ଏବଂ ରୋସେଟ୍ ପତ୍ରର ଅକ୍ଷରେ ଅକ୍ଷରେ ଅକ୍ଷ ମେରିଷ୍ଟେମ୍ ସୁପ୍ତ ରହିଥାଏ। ଫୁଲ ପର୍ଯ୍ୟାୟକୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ ସମୟରେ, SAM ପୁଷ୍ପବୃତ୍ତ ମେରିଷ୍ଟେମ୍ ହୋଇଯାଏ, ଯାହା ବିସ୍ତାରିତ ଇଣ୍ଟରନୋଡ୍ ଏବଂ ଅକ୍ଷ ବୁଡ୍, କାଉଲାଇନ୍ ପତ୍ରର ଅକ୍ଷରେ ଶାଖାଲେଟ୍ ଏବଂ ପରେ, ପତ୍ରହୀନ ଫୁଲ ସୃଷ୍ଟି କରେ। ଯଦିଓ ଆମେ ପତ୍ର, ଫୁଲ ଏବଂ ଶାଖାର ଆରମ୍ଭକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରୁଥିବା ଯନ୍ତ୍ରକୁ ବୁଝିବାରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଅଗ୍ରଗତି କରିଛୁ, ଇଣ୍ଟରନୋଡ୍ କିପରି ଉତ୍ପନ୍ନ ହୁଏ ସେ ବିଷୟରେ ଆପେକ୍ଷିକ ଭାବରେ କମ୍ ଜଣାଯାଏ।
GA ର ସ୍ପାଟିଓଟେମ୍ପୋରାଲ୍ ବଣ୍ଟନକୁ ବୁଝିବା ଦ୍ୱାରା ବିଭିନ୍ନ ଟିସୁରେ ଏବଂ ବିଭିନ୍ନ ବିକାଶମୂଳକ ପର୍ଯ୍ୟାୟରେ ଏହି ହରମୋନ୍‌ଗୁଡ଼ିକର କାର୍ଯ୍ୟକୁ ଭଲ ଭାବରେ ବୁଝିବାରେ ସାହାଯ୍ୟ ମିଳିବ। ଏହାର ନିଜସ୍ୱ ପ୍ରମୋଟରଙ୍କ କାର୍ଯ୍ୟ ଅଧୀନରେ ପ୍ରକାଶିତ RGA-GFP ଫ୍ୟୁଜନର ଅବନତିର ଦୃଶ୍ୟ ମୂଳରେ ମୋଟ GA ସ୍ତରର ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ବିଷୟରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ସୂଚନା ପ୍ରଦାନ କରେ15,16। ତଥାପି, RGA ପ୍ରକାଶନ ଟିସୁଗୁଡ଼ିକରେ ଭିନ୍ନ ହୋଇଥାଏ17 ଏବଂ GA18 ଦ୍ୱାରା ନିୟନ୍ତ୍ରିତ ହୁଏ। ତେଣୁ, RGA ପ୍ରମୋଟରଙ୍କ ଭିନ୍ନ ପ୍ରକାଶନ RGA-GFP ସହିତ ପରିଲକ୍ଷିତ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ପ୍ୟାଟର୍ନରେ ପରିଣତ ହୋଇପାରେ ଏବଂ ଏହି ପଦ୍ଧତି ପରିମାଣାତ୍ମକ ନୁହେଁ। ସମ୍ପ୍ରତି, ବାୟୋଆକ୍ଟିଭ୍ ଫ୍ଲୋରୋସେସିନ୍ (Fl)-ଲେବଲ୍ GA19,20 ମୂଳ ଏଣ୍ଡୋକର୍ଟେକ୍ସରେ GA ର ସଂଗ୍ରହ ଏବଂ GA ପରିବହନ ଦ୍ୱାରା ଏହାର କୋଷୀୟ ସ୍ତରର ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ପ୍ରକାଶ କରିଛି। ସମ୍ପ୍ରତି, GA FRET ସେନ୍ସର nlsGPS1 ଦେଖାଇଛି ଯେ GA ସ୍ତର ମୂଳ, ଫିଲାମେଣ୍ଟ ଏବଂ ଅନ୍ଧକାର-ବର୍ଦ୍ଧିତ ହାଇପୋକୋଟାଇଲ୍ସ21 ରେ କୋଷ ଦୀର୍ଘତା ସହିତ ସମ୍ପର୍କିତ। ତଥାପି, ଆମେ ଦେଖିଛୁ, GA ସାନ୍ଦ୍ରତା GA ସଙ୍କେତ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରୁଥିବା ଏକମାତ୍ର ପାରାମିଟର ନୁହେଁ, କାରଣ ଏହା ଜଟିଳ ସେନ୍ସିଂ ପ୍ରକ୍ରିୟା ଉପରେ ନିର୍ଭର କରେ। ଏଠାରେ, DELLA ଏବଂ GA ସିଗନାଲିଂ ପଥ ବିଷୟରେ ଆମର ବୁଝାମଣା ଉପରେ ଆଧାର କରି, ଆମେ GA ସିଗନାଲିଂ ପାଇଁ ଏକ ଅବନତି-ଆଧାରିତ ରେଟିଓମେଟ୍ରିକ୍ ବାୟୋସେନ୍ସରର ବିକାଶ ଏବଂ ଚରିତ୍ର ରିପୋର୍ଟ କରୁଛୁ। ଏହି ପରିମାଣାତ୍ମକ ବାୟୋସେନ୍ସର ବିକଶିତ କରିବା ପାଇଁ, ଆମେ ଏକ ମ୍ୟୁଟେଣ୍ଟ GA-ସମ୍ବେଦନଶୀଳ RGA ବ୍ୟବହାର କରିଥିଲୁ ଯାହା ଏକ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ ପ୍ରୋଟିନ୍ ସହିତ ଫ୍ୟୁଜ୍ ହୋଇଥିଲା ଏବଂ ଟିସୁରେ ସର୍ବବ୍ୟାପୀ ପ୍ରକାଶିତ ହୋଇଥିଲା, ଏବଂ ଏକ GA-ଅସମ୍ବେଦନଶୀଳ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ ପ୍ରୋଟିନ୍ ମଧ୍ୟ ବ୍ୟବହାର କରିଥିଲୁ। ଆମେ ଦେଖାଉଛୁ ଯେ ମ୍ୟୁଟେଣ୍ଟ RGA ପ୍ରୋଟିନ୍ ଫ୍ୟୁଜନ୍ ସର୍ବବ୍ୟାପୀ ପ୍ରକାଶିତ ହେବା ସମୟରେ ଅନ୍ତର୍ଜୈଟ GA ସିଗନାଲିଂରେ ବାଧା ସୃଷ୍ଟି କରେ ନାହିଁ, ଏବଂ ଏହି ବାୟୋସେନ୍ସର ଉଚ୍ଚ ସ୍ପାଟିଓଟେମ୍ପୋରାଲ୍ ରିଜୋଲ୍ୟୁସନ୍ ସହିତ ସେନ୍ସିଂ ଉପକରଣ ଦ୍ୱାରା GA ଇନପୁଟ୍ ଏବଂ GA ସିଗନାଲ ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣରୁ ପରିଣାମସ୍ୱରୂପ ସିଗନାଲିଂ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ପରିମାଣ କରିପାରିବ। ଆମେ GA ସିଗନାଲିଂ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପର ସ୍ପାଟିଓଟେମ୍ପୋରାଲ୍ ବଣ୍ଟନକୁ ମ୍ୟାପ୍ କରିବା ଏବଂ SAM ଏପିଡରମିସ୍ରେ GA କିପରି ସେଲ୍ୟୁଲାର୍ ଆଚରଣକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରେ ତାହା ପରିମାଣ କରିବା ପାଇଁ ଏହି ବାୟୋସେନ୍ସର ବ୍ୟବହାର କରିଥିଲୁ। ଆମେ ପ୍ରଦର୍ଶନ କରୁଛୁ ଯେ GA ଅଙ୍ଗ ପ୍ରାଇମୋର୍ଡିଆ ମଧ୍ୟରେ ଅବସ୍ଥିତ SAM କୋଷଗୁଡ଼ିକର ଡିଭିଜନ ପ୍ଲେନର ଦିଗନିର୍ଦ୍ଦେଶକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରେ, ଯାହା ଦ୍ଵାରା ଇଣ୍ଟର୍ନୋଡର କାନୋନିକାଲ୍ ସେଲ୍ୟୁଲାର୍ ସଂଗଠନକୁ ପରିଭାଷିତ କରେ।
ଶେଷରେ, ଆମେ ପଚାରିଲୁ ଯେ qmRGA ବଢ଼ୁଥିବା ହାଇପୋକୋଟାଇଲ୍ସ ବ୍ୟବହାର କରି ଅନ୍ତର୍ଜାତୀୟ GA ସ୍ତରର ପରିବର୍ତ୍ତନ ରିପୋର୍ଟ କରିପାରିବ କି? ଆମେ ପୂର୍ବରୁ ଦେଖାଇଥିଲୁ ଯେ ନାଇଟ୍ରେଟ୍ GA ସଂଶ୍ଳେଷଣକୁ ବୃଦ୍ଧି କରି ବୃଦ୍ଧିକୁ ଉତ୍ତେଜିତ କରେ ଏବଂ, ପରିବର୍ତ୍ତେ, DELLA34 ଅବନତି। ତଦନୁସାରେ, ଆମେ ଦେଖିଲୁ ଯେ ପ୍ରଚୁର ନାଇଟ୍ରେଟ୍ ଯୋଗାଣ (10 mM NO3−) ଅଧୀନରେ ଚାଷ ହୋଇଥିବା pUBQ10::qmRGA ଚାରାରେ ହାଇପୋକୋଟାଇଲ୍ ଲମ୍ବ ନାଇଟ୍ରେଟ୍-ଅଭାବ ପରିସ୍ଥିତିରେ ଚାଷ ହୋଇଥିବା ଚାରା ଅପେକ୍ଷା ଯଥେଷ୍ଟ ଅଧିକ ଥିଲା (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 6a)। ବୃଦ୍ଧି ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସହିତ ସଂଗତ, ନାଇଟ୍ରେଟ୍ ଅନୁପସ୍ଥିତିରେ ଚାଷ ହୋଇଥିବା ଚାରା ତୁଳନାରେ 10 mM NO3− ପରିସ୍ଥିତିରେ ଚାଷ ହୋଇଥିବା ଚାରାର ହାଇପୋକୋଟାଇଲ୍ସରେ GA ସଙ୍କେତ ଅଧିକ ଥିଲା (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 6b, c)। ତେଣୁ, qmRGA ମଧ୍ୟ GA ସାନ୍ଦ୍ରତାରେ ଅନ୍ତର୍ଜାତୀୟ ପରିବର୍ତ୍ତନ ଦ୍ୱାରା ପ୍ରେରିତ GA ସଙ୍କେତରେ ପରିବର୍ତ୍ତନର ତଦାରଖ କରିବାକୁ ସକ୍ଷମ କରେ।
ସେନ୍ସର ଡିଜାଇନ୍ ଉପରେ ଆଧାର କରି ଆଶା କରାଯାଇଥିବା qmRGA ଦ୍ୱାରା ଚିହ୍ନଟ ହୋଇଥିବା GA ସଙ୍କେତ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ GA ସାନ୍ଦ୍ରତା ଏବଂ GA ଧାରଣା ଉପରେ ନିର୍ଭର କରେ କି ନାହିଁ ତାହା ବୁଝିବା ପାଇଁ, ଆମେ ଉଦ୍ଭିଦ ଏବଂ ପ୍ରଜନନ ଟିସୁରେ ତିନୋଟି GID1 ରିସେପ୍ଟରର ପ୍ରକାଶନ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରିଥିଲୁ। ଚାରାଗୁଡ଼ିକରେ, GID1-GUS ରିପୋର୍ଟର ରେଖା ଦେଖାଇଥିଲା ଯେ GID1a ଏବଂ c କୋଟିଲେଡନରେ ଅତ୍ୟନ୍ତ ପ୍ରକାଶିତ ହୋଇଥିଲା (ଚିତ୍ର 3a–c)। ଏହା ସହିତ, ସମସ୍ତ ତିନୋଟି ରିସେପ୍ଟର ପତ୍ର, ପାର୍ଶ୍ଵ ମୂଳ ପ୍ରାଇମୋର୍ଡିଆ, ମୂଳ ଟିପ୍ସ (GID1b ର ମୂଳ କ୍ୟାପ୍ ବ୍ୟତୀତ) ଏବଂ ରକ୍ତନଳୀ ପ୍ରଣାଳୀରେ ପ୍ରକାଶିତ ହୋଇଥିଲା (ଚିତ୍ର 3a–c)। ପୁଷ୍ପବୃତ୍ତ SAM ରେ, ଆମେ କେବଳ GID1b ଏବଂ 1c ପାଇଁ GUS ସଙ୍କେତ ଚିହ୍ନଟ କରିଥିଲୁ (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 7a–c)। ସିଟୁ ହାଇବ୍ରିଡାଇଜେସନ୍ ଏହି ପ୍ରକାଶନ ଢାଞ୍ଚାଗୁଡ଼ିକୁ ନିଶ୍ଚିତ କରିଥିଲା ​​ଏବଂ ଆହୁରି ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିଥିଲା ​​ଯେ GID1c SAM ରେ ନିମ୍ନ ସ୍ତରରେ ସମାନ ଭାବରେ ପ୍ରକାଶିତ ହୋଇଥିଲା, ଯେତେବେଳେ GID1b SAM ର ପରିଧିରେ ଉଚ୍ଚ ପ୍ରକାଶନ ଦେଖାଇଥିଲା (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 7d–l)। pGID1b::2xmTQ2-GID1b ଟ୍ରାନ୍ସଲେସନାଲ୍ ଫ୍ୟୁଜନ୍ ମଧ୍ୟ GID1b ପ୍ରକାଶନର ଏକ ଗ୍ରେଡେଡ୍ ପରିସର ପ୍ରକାଶ କରିଥିଲା, SAM ର କେନ୍ଦ୍ରରେ କମ୍ କିମ୍ବା କୌଣସି ପ୍ରକାଶନ ଠାରୁ ଅଙ୍ଗ ସୀମାରେ ଉଚ୍ଚ ପ୍ରକାଶନ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 7m)। ତେଣୁ, GID1 ରିସେପ୍ଟରଗୁଡ଼ିକ ଟିସୁ ମଧ୍ୟରେ ଏବଂ ଭିତରେ ସମାନ ଭାବରେ ବଣ୍ଟିତ ହୋଇନାହିଁ। ପରବର୍ତ୍ତୀ ପରୀକ୍ଷଣରେ, ଆମେ ଏହା ମଧ୍ୟ ଦେଖିଲୁ ଯେ GID1 (pUBQ10::GID1a-mCherry) ର ଅତ୍ୟଧିକ ପ୍ରକାଶନ ହାଇପୋକୋଟାଇଲ୍ସରେ qmRGA ର ସମ୍ବେଦନଶୀଳତାକୁ ବାହ୍ୟ GA ପ୍ରୟୋଗରେ ବୃଦ୍ଧି କରିଥିଲା ​​(ଚିତ୍ର 3d, e)। ବିପରୀତରେ, ହାଇପୋକୋଟାଇଲରେ qd17mRGA ଦ୍ୱାରା ମାପ କରାଯାଇଥିବା ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ GA3 ଚିକିତ୍ସା ପ୍ରତି ଅସମ୍ବେଦନଶୀଳ ଥିଲା (ଚିତ୍ର 3f, g)। ଉଭୟ ପରୀକ୍ଷା ପାଇଁ, ସେନ୍ସରର ଦ୍ରୁତ ଆଚରଣ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରିବା ପାଇଁ ବିହନଗୁଡ଼ିକୁ GA (100 μM GA3) ର ଉଚ୍ଚ ସାନ୍ଦ୍ରତା ସହିତ ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିଲା, ଯେଉଁଠାରେ GID1 ରିସେପ୍ଟର ସହିତ ବାନ୍ଧି ହେବାର କ୍ଷମତା ବୃଦ୍ଧି ପାଇଥିଲା କିମ୍ବା ହଜି ଯାଇଥିଲା। ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ଏକତ୍ର ନିଶ୍ଚିତ କରେ ଯେ qmRGA ବାୟୋସେନ୍ସର ଏକ GA ଏବଂ GA ସେନ୍ସର ଭାବରେ ଏକ ମିଳିତ କାର୍ଯ୍ୟ କରେ, ଏବଂ ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ GID1 ରିସେପ୍ଟରର ଭିନ୍ନ ପ୍ରକାଶନ ସେନ୍ସରର ନିର୍ଗମନକୁ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଭାବରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରିପାରିବ।
ଆଜି ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ, SAM ରେ GA ସଙ୍କେତଗୁଡ଼ିକର ବଣ୍ଟନ ଅସ୍ପଷ୍ଟ ରହିଛି। ତେଣୁ, ଆମେ L1 ସ୍ତର (ଏପିଡର୍ମିସ୍; ଚିତ୍ର 4a, b, ପଦ୍ଧତି ଏବଂ ପରିପୂରକ ପଦ୍ଧତି ଦେଖନ୍ତୁ) ଉପରେ ଧ୍ୟାନ ଦେଇ GA ସଙ୍କେତ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପର ଉଚ୍ଚ-ରିଜୋଲ୍ୟୁସନ୍ ପରିମାଣାତ୍ମକ ମାନଚିତ୍ର ଗଣନା କରିବା ପାଇଁ qmRGA-ପ୍ରକାଶକ ଉଦ୍ଭିଦ ଏବଂ pCLV3::mCherry-NLS ଷ୍ଟେମ୍ ସେଲ୍ ରିପୋର୍ଟର 35 ବ୍ୟବହାର କରିଥିଲୁ, କାରଣ L1 SAM ବୃଦ୍ଧିକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରିବାରେ ଏକ ପ୍ରମୁଖ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରେ 36। ଏଠାରେ, pCLV3::mCherry-NLS ପ୍ରକାଶନ GA ସଙ୍କେତ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପର ସ୍ଥାନୀୟ ଟେମ୍ପୋରାଲ୍ ବଣ୍ଟନ ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ ଏକ ସ୍ଥିର ଜ୍ୟାମିତିକ ସନ୍ଦର୍ଭ ବିନ୍ଦୁ ପ୍ରଦାନ କରିଥିଲା ​​37। ଯଦିଓ GA କୁ ପାର୍ଶ୍ଵିକ ଅଙ୍ଗ ବିକାଶ ପାଇଁ ଅତ୍ୟାବଶ୍ୟକ ବୋଲି ବିବେଚନା କରାଯାଏ 4, ଆମେ ଦେଖିଲୁ ଯେ P3 ପର୍ଯ୍ୟାୟ (ଚିତ୍ର 4a, b) ରୁ ଆରମ୍ଭ କରି ଫୁଲର ପ୍ରାଇମୋର୍ଡିୟମ୍ (P) ରେ GA ସଙ୍କେତ କମ୍ ଥିଲା, ଯେତେବେଳେ ଯୁବ P1 ଏବଂ P2 ପ୍ରାଇମୋର୍ଡିୟମ୍ ମାନଙ୍କର କେନ୍ଦ୍ରୀୟ କ୍ଷେତ୍ର (ଚିତ୍ର 4a, b) ପରି ମଧ୍ୟମ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଥିଲା। ଅର୍ଗାନ ପ୍ରାଇମୋର୍ଡିୟମ୍ ସୀମାରେ ଉଚ୍ଚ GA ସଙ୍କେତ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଚିହ୍ନଟ ହୋଇଥିଲା, ଯାହା P1/P2 (ସୀମା ପାର୍ଶ୍ୱରେ) ରୁ ଆରମ୍ଭ ହୋଇ P4 ରେ ପହଞ୍ଚିଥିଲା, ଏବଂ ପ୍ରାଇମୋର୍ଡିଆ ମଧ୍ୟରେ ଅବସ୍ଥିତ ପରିଧିୟ ଅଞ୍ଚଳର ସମସ୍ତ କୋଷରେ ମଧ୍ୟ ପରିଲକ୍ଷିତ ହୋଇଥିଲା (ଚିତ୍ର 4a, b ଏବଂ ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 8a, b)। ଏହି ଉଚ୍ଚ GA ସଙ୍କେତ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ କେବଳ ଏପିଡରମିସ୍ରେ ନୁହେଁ ବରଂ L2 ଏବଂ ଉପର L3 ସ୍ତରଗୁଡ଼ିକରେ ମଧ୍ୟ ପରିଲକ୍ଷିତ ହୋଇଥିଲା (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 8b)। qmRGA ବ୍ୟବହାର କରି SAM ରେ ଚିହ୍ନଟ ହୋଇଥିବା GA ସଙ୍କେତଗୁଡ଼ିକର ଢାଞ୍ଚା ମଧ୍ୟ ସମୟ ସହିତ ଅପରିବର୍ତ୍ତିତ ରହିଥିଲା ​​(ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 8c–f, k)। ଯଦିଓ qd17mRGA ନିର୍ମାଣକୁ ଆମେ ବିସ୍ତୃତ ଭାବରେ ବର୍ଣ୍ଣିତ କରିଥିବା ପାଞ୍ଚଟି ସ୍ୱାଧୀନ ରେଖାରୁ T3 ଉଦ୍ଭିଦର SAM ରେ ପଦ୍ଧତିଗତ ଭାବରେ ନିମ୍ନନିୟନ୍ତ୍ରିତ କରାଯାଇଥିଲା, ଆମେ pRPS5a::VENUS-2A-TagBFP ନିର୍ମାଣ ସହିତ ପ୍ରାପ୍ତ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ପ୍ୟାଟର୍ନଗୁଡ଼ିକୁ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରିପାରିଲୁ (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 8g–j, l)। ଏହି ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ରେଖାରେ, SAM ରେ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ଅନୁପାତରେ କେବଳ ସାମାନ୍ୟ ପରିବର୍ତ୍ତନ ଚିହ୍ନଟ ହୋଇଥିଲା, କିନ୍ତୁ SAM କେନ୍ଦ୍ରରେ ଆମେ TagBFP ସହିତ ଜଡିତ VENUS ରେ ଏକ ସ୍ପଷ୍ଟ ଏବଂ ଅପ୍ରତ୍ୟାଶିତ ହ୍ରାସ ଦେଖିଲୁ। ଏହା ନିଶ୍ଚିତ କରେ ଯେ qmRGA ଦ୍ୱାରା ପରିଲକ୍ଷିତ ସିଗନାଲିଂ ପ୍ୟାଟର୍ନ mRGA-VENUS ର GA-ନିର୍ଭରଶୀଳ ଅବନତିକୁ ପ୍ରତିଫଳିତ କରେ, କିନ୍ତୁ ଏହା ମଧ୍ୟ ଦର୍ଶାଏ ଯେ qmRGA ମେରିଷ୍ଟେମ କେନ୍ଦ୍ରରେ GA ସିଗନାଲିଂ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ଅତିରଞ୍ଜିତ କରିପାରେ। ସଂକ୍ଷେପରେ, ଆମର ଫଳାଫଳ ଏକ GA ସିଗନାଲିଂ ପ୍ୟାଟର୍ନ ପ୍ରକାଶ କରେ ଯାହା ମୁଖ୍ୟତଃ ପ୍ରାଇମୋର୍ଡିଆର ବଣ୍ଟନକୁ ପ୍ରତିଫଳିତ କରେ। ଆନ୍ତଃ-ପ୍ରାଇମୋର୍ଡିଆଲ୍ କ୍ଷେତ୍ର (IPR) ର ଏହି ବଣ୍ଟନ ବିକାଶଶୀଳ ପ୍ରାଇମୋର୍ଡିଆମ୍ ଏବଂ କେନ୍ଦ୍ରୀୟ କ୍ଷେତ୍ର ମଧ୍ୟରେ ଉଚ୍ଚ GA ସିଗନାଲିଂ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପର ଧୀରେ ଧୀରେ ପ୍ରତିଷ୍ଠା ହେତୁ ହୋଇଥାଏ, ଯେତେବେଳେ ସେହି ସମୟରେ ପ୍ରାଇମୋର୍ଡିଆମ୍ ରେ GA ସିଗନାଲିଂ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ହ୍ରାସ ପାଏ (ଚିତ୍ର 4c, d)।
GID1b ଏବଂ GID1c ରିସେପ୍ଟରର ବଣ୍ଟନ (ଉପରେ ଦେଖନ୍ତୁ) ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ GA ରିସେପ୍ଟରର ଭିନ୍ନ ପ୍ରକାଶନ SAM ରେ GA ସଙ୍କେତ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପର ଢାଞ୍ଚାକୁ ଆକାର ଦେବାରେ ସାହାଯ୍ୟ କରେ। ଆମେ ଆଶ୍ଚର୍ଯ୍ୟ ହେଲୁ ଯେ GA ର ଭିନ୍ନ ସଂଚୟ ଏଥିରେ ସାମିଲ ହୋଇପାରେ କି ନାହିଁ। ଏହି ସମ୍ଭାବନାକୁ ଅନୁସନ୍ଧାନ କରିବା ପାଇଁ, ଆମେ nlsGPS1 GA FRET ସେନ୍ସର21 ବ୍ୟବହାର କରିଥିଲୁ। 100 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 10 μM GA4+7 ସହିତ ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା nlsGPS1 ର SAM ରେ ବର୍ଦ୍ଧିତ ସକ୍ରିୟକରଣ ଫ୍ରିକ୍ୱେନ୍ସି ଚିହ୍ନଟ ହୋଇଥିଲା (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 9a–e), ଯାହା ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ nlsGPS1 SAM ରେ GA ସାନ୍ଦ୍ରତାରେ ପରିବର୍ତ୍ତନର ପ୍ରତିକ୍ରିୟା କରେ, ଯେପରି ଏହା ମୂଳରେ କରେ21। nlsGPS1 ସକ୍ରିୟକରଣ ଫ୍ରିକ୍ୱେନ୍ସିର ସ୍ଥାନିକ ବଣ୍ଟନ SAM ର ବାହ୍ୟ ସ୍ତରଗୁଡ଼ିକରେ ଅପେକ୍ଷାକୃତ କମ୍ GA ସ୍ତର ପ୍ରକାଶ କରିଥିଲା, କିନ୍ତୁ ଦେଖାଇଥିଲା ଯେ ସେଗୁଡିକ କେନ୍ଦ୍ରରେ ଏବଂ SAM ର ସୀମାରେ ଉଚ୍ଚ ହୋଇଥିଲା (ଚିତ୍ର 4e ଏବଂ ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 9a,c)। ଏହା ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ GA ମଧ୍ୟ SAM ରେ qmRGA ଦ୍ୱାରା ପ୍ରକାଶିତ ସ୍ଥାନିକ ପ୍ୟାଟର୍ନ ସହିତ ବଣ୍ଟନ କରାଯାଇଛି। ଏକ ପରିପୂରକ ପଦ୍ଧତି ଭାବରେ, ଆମେ SAM କୁ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ GA (GA3-, GA4-, GA7-Fl) କିମ୍ବା କେବଳ Fl ସହିତ ଏକ ନକାରାତ୍ମକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରିଥିଲୁ। Fl ସିଗନାଲ ସମଗ୍ର SAM ରେ ବଣ୍ଟନ କରାଯାଇଥିଲା, କେନ୍ଦ୍ରୀୟ ଅଞ୍ଚଳ ଏବଂ ପ୍ରାଇମୋର୍ଡିୟମ୍ ସମେତ, ଯଦିଓ ଏକ କମ୍ ତୀବ୍ରତାରେ (ଚିତ୍ର 4j ଏବଂ ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 10d)। ବିପରୀତରେ, ସମସ୍ତ ତିନୋଟି GA-Fl ବିଶେଷ ଭାବରେ ପ୍ରାଇମୋର୍ଡିୟମ୍ ସୀମା ମଧ୍ୟରେ ଏବଂ IPR ର ବାକି ସ୍ଥାନରେ ବିଭିନ୍ନ ଡିଗ୍ରୀ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ସଂଗୃହିତ ହୋଇଥିଲା, GA7-Fl IPR ର ସର୍ବବୃହତ ଡୋମେନରେ ସଂଗୃହିତ ହୋଇଥିଲା (ଚିତ୍ର 4k ଏବଂ ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 10a,b)। ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ତୀବ୍ରତାର ପରିମାଣିକୀକରଣରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ Fl-ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା SAM ତୁଳନାରେ GA-Fl-ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା SAM ରେ IPR ରୁ ଅଣ-IPR ତୀବ୍ରତା ଅନୁପାତ ଅଧିକ ଥିଲା (ଚିତ୍ର 4l ଏବଂ ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 10c)। ଏକତ୍ର, ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ GA ଅଙ୍ଗ ସୀମାର ନିକଟତମ ସ୍ଥାନରେ ଥିବା IPR କୋଷଗୁଡ଼ିକରେ ଅଧିକ ସାନ୍ଦ୍ରତାରେ ଉପସ୍ଥିତ ଅଛି। ଏହା ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ SAM GA ସିଗନାଲିଂ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପର ଢାଞ୍ଚା GA ରିସେପ୍ଟରର ଭିନ୍ନ ପ୍ରକାଶନ ଏବଂ ଅଙ୍ଗ ସୀମା ନିକଟରେ IPR କୋଷଗୁଡ଼ିକରେ GA ର ଭିନ୍ନ ସଂଚୟରୁ ପରିଣାମ ସ୍ୱରୂପ। ଏହିପରି, ଆମର ବିଶ୍ଳେଷଣ GA ସିଗନାଲିଂର ଏକ ଅପ୍ରତ୍ୟାଶିତ ସ୍ପାଟିଓଟେମ୍ପୋରାଲ ଢାଞ୍ଚା ପ୍ରକାଶ କରିଥିଲା, SAM ର କେନ୍ଦ୍ର ଏବଂ ପ୍ରାଇମୋର୍ଡିୟମରେ କମ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଏବଂ ପରିଧି ଅଞ୍ଚଳରେ IPR ରେ ଅଧିକ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ସହିତ।
SAM ରେ ଡିଫରେନ୍ସିଆଲ୍ GA ସିଗନାଲିଂ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପର ଭୂମିକା ବୁଝିବା ପାଇଁ, ଆମେ SAM qmRGA pCLV3::mCherry-NLS ର ରିଅଲ୍-ଟାଇମ୍ ଟାଇମ୍-ଲାପ୍ସ ଇମେଜିଂ ବ୍ୟବହାର କରି GA ସିଗନାଲିଂ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ, କୋଷ ବିସ୍ତାର ଏବଂ କୋଷ ବିଭାଜନ ମଧ୍ୟରେ ସମ୍ପର୍କ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରିଥିଲୁ। ବୃଦ୍ଧି ନିୟନ୍ତ୍ରଣରେ GA ର ଭୂମିକାକୁ ଦୃଷ୍ଟିରେ ରଖି, କୋଷ ବିସ୍ତାର ପାରାମିଟର ସହିତ ଏକ ସକାରାତ୍ମକ ସମ୍ପର୍କ ଆଶା କରାଯାଉଥିଲା। ତେଣୁ, ଆମେ ପ୍ରଥମେ GA ସିଗନାଲିଂ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ମାନଚିତ୍ରକୁ କୋଷ ପୃଷ୍ଠ ବୃଦ୍ଧି ହାରର ମାନଚିତ୍ର ସହିତ (ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ କୋଷ ପାଇଁ ଏବଂ ବିଭାଜନ ସମୟରେ କନ୍ୟା କୋଷ ପାଇଁ କୋଷ ପ୍ରସାରଣର ଶକ୍ତି ପାଇଁ ଏକ ପ୍ରକ୍ସି ଭାବରେ) ଏବଂ ବୃଦ୍ଧି ଆନିସୋଟ୍ରୋପିର ମାନଚିତ୍ର ସହିତ ତୁଳନା କରିଥିଲୁ, ଯାହା କୋଷ ବିସ୍ତାରର ଦିଗକୁ ମାପ କରେ (ଏଠାରେ ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ କୋଷ ପାଇଁ ଏବଂ ବିଭାଜନ ସମୟରେ କନ୍ୟା କୋଷ ପାଇଁ ମଧ୍ୟ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ; ଚିତ୍ର 5a, b, ପଦ୍ଧତି ଏବଂ ପରିପୂରକ ପଦ୍ଧତି ଦେଖନ୍ତୁ)। SAM କୋଷ ପୃଷ୍ଠ ବୃଦ୍ଧି ହାରର ଆମର ମାନଚିତ୍ର ପୂର୍ବ ପର୍ଯ୍ୟବେକ୍ଷଣ ସହିତ ସୁସଙ୍ଗତ 38,39, ସୀମାରେ ସର୍ବନିମ୍ନ ବୃଦ୍ଧି ହାର ଏବଂ ବିକାଶଶୀଳ ଫୁଲରେ ସର୍ବାଧିକ ବୃଦ୍ଧି ହାର (ଚିତ୍ର 5a)। ପ୍ରମୁଖ ଉପାଦାନ ବିଶ୍ଳେଷଣ (PCA) ଦେଖାଇଥିଲା ଯେ GA ସିଗନାଲିଂ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ କୋଷ ପୃଷ୍ଠ ବୃଦ୍ଧି ତୀବ୍ରତା ସହିତ ନକାରାତ୍ମକ ଭାବରେ ସହବନ୍ଧିତ ଥିଲା (ଚିତ୍ର 5c)। ଆମେ ଏହା ମଧ୍ୟ ଦେଖାଇଲୁ ଯେ GA ସିଗନାଲିଂ ଇନପୁଟ୍ ଏବଂ ବୃଦ୍ଧି ତୀବ୍ରତା ସମେତ ପରିବର୍ତ୍ତନର ମୁଖ୍ୟ ଅକ୍ଷଗୁଡ଼ିକ ଉଚ୍ଚ CLV3 ପ୍ରକାଶନ ଦ୍ୱାରା ନିର୍ଣ୍ଣିତ ଦିଗକୁ ଅର୍ଧଗୋନାଲ୍ ଥିଲା, ଯାହା ଅବଶିଷ୍ଟ ବିଶ୍ଳେଷଣରେ SAM କେନ୍ଦ୍ରରୁ କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ବାଦ ଦେବା ନିଶ୍ଚିତ କରିଥିଲା। ସ୍ପିୟରମ୍ୟାନ୍ ସହସଂଯୋଗ ବିଶ୍ଳେଷଣ PCA ଫଳାଫଳକୁ ନିଶ୍ଚିତ କରିଥିଲା ​​(ଚିତ୍ର 5d), ସୂଚାଇଥିଲା ଯେ IPR ରେ ଉଚ୍ଚ GA ସିଗନାଲଗୁଡ଼ିକ ଉଚ୍ଚ କୋଷ ପ୍ରସାରଣରେ ପରିଣାମ ଦେଇନାହିଁ। ତଥାପି, ସହସଂଯୋଗ ବିଶ୍ଳେଷଣ GA ସିଗନାଲିଂ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଏବଂ ବୃଦ୍ଧି ଆନିସୋଟ୍ରୋପି (ଚିତ୍ର 5c, d) ମଧ୍ୟରେ ଏକ ସାମାନ୍ୟ ସକାରାତ୍ମକ ସହସଂଯୋଗ ପ୍ରକାଶ କରିଥିଲା, ଯାହା ସୂଚାଇ ଦେଉଛି ଯେ IPR ରେ ଉଚ୍ଚ GA ସିଗନାଲିଂ କୋଷ ବୃଦ୍ଧିର ଦିଗ ଏବଂ ସମ୍ଭବତଃ କୋଷ ବିଭାଜନ ସମତଳର ସ୍ଥିତିକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରେ।
a, b SAM ରେ ହାରାହାରି ପୃଷ୍ଠ ବୃଦ୍ଧି (a) ଏବଂ ବୃଦ୍ଧି ଆନିସୋଟ୍ରୋପି (b) ର ଉତ୍ତାପ ମାନଚିତ୍ର ସାତଟି ସ୍ୱାଧୀନ ଉଦ୍ଭିଦରୁ ଅଧିକ ଥିଲା (କୋଷ ପ୍ରସାରଣର ଶକ୍ତି ଏବଂ ଦିଗ ପାଇଁ ପ୍ରକ୍ସି ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ)। c PCA ବିଶ୍ଳେଷଣରେ ନିମ୍ନଲିଖିତ ଚଳକ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ ଥିଲା: GA ସଙ୍କେତ, ପୃଷ୍ଠ ବୃଦ୍ଧି ତୀବ୍ରତା, ପୃଷ୍ଠ ବୃଦ୍ଧି ଆନିସୋଟ୍ରୋପି, ଏବଂ CLV3 ପ୍ରକାଶନ। PCA ଉପାଦାନ 1 ମୁଖ୍ୟତଃ ପୃଷ୍ଠ ବୃଦ୍ଧି ତୀବ୍ରତା ସହିତ ନକାରାତ୍ମକ ଭାବରେ ସହସମ୍ପର୍କିତ ଥିଲା ଏବଂ GA ସଙ୍କେତ ସହିତ ସକାରାତ୍ମକ ଭାବରେ ସହସମ୍ପର୍କିତ ଥିଲା। PCA ଉପାଦାନ 2 ମୁଖ୍ୟତଃ ପୃଷ୍ଠ ବୃଦ୍ଧି ଆନିସୋଟ୍ରୋପି ସହିତ ସକାରାତ୍ମକ ଭାବରେ ସହସମ୍ପର୍କିତ ଥିଲା ଏବଂ CLV3 ପ୍ରକାଶନ ସହିତ ନକାରାତ୍ମକ ଭାବରେ ସହସମ୍ପର୍କିତ ଥିଲା। ପ୍ରତିଶତ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଉପାଦାନ ଦ୍ୱାରା ବ୍ୟାଖ୍ୟା କରାଯାଇଥିବା ପରିବର୍ତ୍ତନକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ। d CZ ବାଦ ଦେଇ ଟିସୁ ସ୍କେଲରେ GA ସଙ୍କେତ, ପୃଷ୍ଠ ବୃଦ୍ଧି ତୀବ୍ରତା ଏବଂ ପୃଷ୍ଠ ବୃଦ୍ଧି ଆନିସୋଟ୍ରୋପି ମଧ୍ୟରେ ସ୍ପିୟରମ୍ୟାନ୍ ସହସମ୍ପର୍କ ବିଶ୍ଳେଷଣ। ଡାହାଣ ପାର୍ଶ୍ୱରେ ଥିବା ସଂଖ୍ୟା ହେଉଛି ଦୁଇଟି ଚଳକ ମଧ୍ୟରେ ସ୍ପିୟରମ୍ୟାନ୍ rho ମୂଲ୍ୟ। ତାରାକୃତି ଏପରି ମାମଲାଗୁଡ଼ିକୁ ସୂଚିତ କରେ ଯେଉଁଠାରେ ସହସମ୍ପର୍କ/ନକାରାତ୍ମକ ସହସମ୍ପର୍କ ଅତ୍ୟନ୍ତ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ। e କନଫୋକାଲ୍ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପି ଦ୍ୱାରା Col-0 SAM L1 କୋଷଗୁଡ଼ିକର 3D ଦୃଶ୍ୟକରଣ। 10 ଘଣ୍ଟାରେ SAM (କିନ୍ତୁ ପ୍ରାଇମୋର୍ଡିୟମ୍ ନୁହେଁ) ରେ ଗଠିତ ନୂତନ କୋଷ କାନ୍ଥଗୁଡ଼ିକ ସେମାନଙ୍କର କୋଣ ମୂଲ୍ୟ ଅନୁସାରେ ରଙ୍ଗୀନ ହୋଇଥାଏ। ରଙ୍ଗ ବାରଟି ତଳ ଡାହାଣ କୋଣରେ ଦେଖାଯାଇଛି। ଇନସେଟ୍ 0 ଘଣ୍ଟାରେ ଅନୁରୂପ 3D ପ୍ରତିଛବି ଦେଖାଉଛି। ସମାନ ଫଳାଫଳ ସହିତ ପରୀକ୍ଷଣ ଦୁଇଥର ପୁନରାବୃତ୍ତି ହୋଇଥିଲା। f ବାକ୍ସ ପ୍ଲଟ୍ IPR ଏବଂ ଅଣ-IPR Col-0 SAM (n = 10 ସ୍ୱାଧୀନ ଉଦ୍ଭିଦ) ରେ କୋଷ ବିଭାଜନ ହାର ପ୍ରଦର୍ଶନ କରେ। କେନ୍ଦ୍ର ରେଖା ମଧ୍ୟମା ଦର୍ଶାଏ, ଏବଂ ବାକ୍ସ ସୀମା 25ତମ ଏବଂ 75ତମ ପ୍ରତିଶତ ସୂଚାଇଥାଏ। ହ୍ୱିସ୍କର୍ସ R ସଫ୍ଟୱେର୍ ସହିତ ନିର୍ଣ୍ଣିତ ସର୍ବନିମ୍ନ ଏବଂ ସର୍ବାଧିକ ମୂଲ୍ୟ ସୂଚାଇଥାଏ। P ମୂଲ୍ୟଗୁଡ଼ିକ ୱେଲ୍ଚଙ୍କ ଦୁଇ-ଲାଞ୍ଜଯୁକ୍ତ t-ପରୀକ୍ଷା ସହିତ ପ୍ରାପ୍ତ ହୋଇଥିଲା। g, h ଯୋଜନାବଦ୍ଧ ଚିତ୍ର ଦର୍ଶାଉଛି (g) SAM (ଧଳା ବିନ୍ଦୁ ରେଖା) ର କେନ୍ଦ୍ରରୁ ରେଡିଆଲ୍ ଦିଗ ସମ୍ବନ୍ଧରେ ନୂତନ କୋଷ କାନ୍ଥ (ମାଜେଣ୍ଟା) ର କୋଣକୁ କିପରି ମାପ କରିବେ (କେବଳ ତୀବ୍ର କୋଣ ମୂଲ୍ୟ, ଅର୍ଥାତ୍, 0-90°, ବିଚାର କରାଯାଏ), ଏବଂ (h) ମେରିଷ୍ଟେମ୍ ମଧ୍ୟରେ ପରିଧି/ପାର୍ଶ୍ଵିକ ଏବଂ ରେଡିଆଲ୍ ଦିଗ। i ଯଥାକ୍ରମେ SAM (ଗାଢ଼ ନୀଳ), IPR (ମଧ୍ୟମ ନୀଳ), ଏବଂ ଅଣ-IPR (ହାଲୁକା ନୀଳ) ରେ କୋଷ ବିଭାଜନ ସମତଳ ଦିଗନିର୍ଦ୍ଦେଶନର ଫ୍ରିକ୍ୱେନ୍ସି ହିଷ୍ଟୋଗ୍ରାମ। P ମୂଲ୍ୟଗୁଡ଼ିକ ଏକ ଦୁଇ-ଲାଞ୍ଜ ବିଶିଷ୍ଟ କୋଲମୋଗୋରୋଭ-ସ୍ମିରନୋଭ ପରୀକ୍ଷା ଦ୍ୱାରା ପ୍ରାପ୍ତ ହୋଇଥିଲା। ସମାନ ଫଳାଫଳ ସହିତ ପରୀକ୍ଷଣ ଦୁଇଥର ପୁନରାବୃତ୍ତି ହୋଇଥିଲା। j ଯଥାକ୍ରମେ P3 (ହାଲୁକା ସବୁଜ), P4 (ମଧ୍ୟମ ସବୁଜ), ଏବଂ P5 (ଗାଢ଼ ସବୁଜ) ପାଖାପାଖି IPR ର କୋଷ ବିଭାଜନ ସମତଳ ଦିଗନିର୍ଦ୍ଦେଶନର ଫ୍ରିକ୍ୱେନ୍ସି ହିଷ୍ଟୋଗ୍ରାମ। P ମୂଲ୍ୟଗୁଡ଼ିକ ଏକ ଦୁଇ-ଲାଞ୍ଜ ବିଶିଷ୍ଟ କୋଲମୋଗୋରୋଭ-ସ୍ମିରନୋଭ ପରୀକ୍ଷା ଦ୍ୱାରା ପ୍ରାପ୍ତ ହୋଇଥିଲା। ସମାନ ଫଳାଫଳ ସହିତ ପରୀକ୍ଷଣ ଦୁଇଥର ପୁନରାବୃତ୍ତି ହୋଇଥିଲା।
ତେଣୁ, ଆମେ ପରବର୍ତ୍ତୀ ସମୟରେ ପରୀକ୍ଷା ସମୟରେ ନୂତନ ଭାବରେ ଗଠିତ କୋଷ କାନ୍ଥ ଚିହ୍ନଟ କରି GA ସଙ୍କେତ ଏବଂ କୋଷ ବିଭାଜନ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ମଧ୍ୟରେ ସମ୍ପର୍କ ଅନୁସନ୍ଧାନ କରିଥିଲୁ (ଚିତ୍ର 5e)। ଏହି ପଦ୍ଧତି ଆମକୁ କୋଷ ବିଭାଜନର ଫ୍ରିକ୍ୱେନ୍ସି ଏବଂ ଦିଗ ମାପିବାକୁ ଅନୁମତି ଦେଇଥିଲା। ଆଶ୍ଚର୍ଯ୍ୟଜନକ ଭାବରେ, ଆମେ ପାଇଲୁ ଯେ IPR ଏବଂ SAM ର ଅବଶିଷ୍ଟ ଅଂଶ (ଅଣ-IPR, ଚିତ୍ର 5f) ରେ କୋଷ ବିଭାଜନର ଫ୍ରିକ୍ୱେନ୍ସି ସମାନ ଥିଲା, ଯାହା ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ IPR ଏବଂ ଅଣ-IPR କୋଷ ମଧ୍ୟରେ GA ସଙ୍କେତରେ ପାର୍ଥକ୍ୟ କୋଷ ବିଭାଜନକୁ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଭାବରେ ପ୍ରଭାବିତ କରେ ନାହିଁ। ଏହା, ଏବଂ GA ସଙ୍କେତ ଏବଂ ବୃଦ୍ଧି ଆନିସୋଟ୍ରୋପି ମଧ୍ୟରେ ସକାରାତ୍ମକ ସମ୍ପର୍କ, ଆମକୁ ବିଚାର କରିବାକୁ ପ୍ରେରଣା ଦେଇଥିଲା ଯେ GA ସଙ୍କେତ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ କୋଷ ବିଭାଜନ ସମତଳର ଦିଗକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରିପାରିବ କି ନାହିଁ। ଆମେ ମେରିଷ୍ଟେମ୍ କେନ୍ଦ୍ର ଏବଂ ନୂତନ କୋଷ କାନ୍ଥର କେନ୍ଦ୍ରକୁ ସଂଯୋଗ କରୁଥିବା ରେଡିଆଲ୍ ଅକ୍ଷ ସହିତ ଏକ ତୀବ୍ର କୋଣ ଭାବରେ ନୂତନ କୋଷ କାନ୍ଥର ଦିଗନିର୍ଦ୍ଦେଶ ମାପିଲୁ (ଚିତ୍ର 5e-i) ଏବଂ ରେଡିଆଲ୍ ଅକ୍ଷ ସହିତ 90° ପାଖାପାଖି କୋଣରେ କୋଷଗୁଡ଼ିକ ବିଭାଜିତ ହେବାର ଏକ ସ୍ପଷ୍ଟ ପ୍ରବୃତ୍ତି ଦେଖିଲୁ, ଯାହାର ସର୍ବାଧିକ ଫ୍ରିକ୍ୱେନ୍ସି 70-80° (23.28%) ଏବଂ 80-90° (22.62%) (ଚିତ୍ର 5e,i) ରେ ପରିଧି/ଅନୁପ୍ରାନ୍ତ ଦିଗରେ କୋଷ ବିଭାଜନ ସହିତ ସମାନ ଥିଲା (ଚିତ୍ର 5h)। ଏହି କୋଷ ବିଭାଜନ ଆଚରଣରେ GA ସଙ୍କେତର ଅବଦାନ ପରୀକ୍ଷା କରିବା ପାଇଁ, ଆମେ IPR ଏବଂ ଅଣ-IPR ରେ କୋଷ ବିଭାଜନ ପାରାମିଟରଗୁଡ଼ିକୁ ପୃଥକ ଭାବରେ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରିଥିଲୁ (ଚିତ୍ର 5i)। ଆମେ ଦେଖିଲୁ ଯେ IPR କୋଷଗୁଡିକରେ ବିଭାଜନ କୋଣ ବଣ୍ଟନ ଅଣ-IPR କୋଷଗୁଡିକ କିମ୍ବା ସମଗ୍ର SAM ରେ ଥିବା କୋଷଗୁଡିକ ଠାରୁ ଭିନ୍ନ ଥିଲା, IPR କୋଷଗୁଡିକ ପାର୍ଶ୍ଵ/ବୃତ୍ତାକାର କୋଷ ବିଭାଜନର ଏକ ଅଧିକ ଅନୁପାତ ପ୍ରଦର୍ଶନ କରୁଥିଲେ, ଅର୍ଥାତ୍, 70-80° ଏବଂ 80-90° (33.86% ଏବଂ 30.71%, ଯଥାକ୍ରମେ, ଅନୁରୂପ ଅନୁପାତ) (ଚିତ୍ର 5i)। ତେଣୁ, ଆମର ପର୍ଯ୍ୟବେକ୍ଷଣଗୁଡ଼ିକ ଉଚ୍ଚ GA ସଙ୍କେତ ଏବଂ ପରିଧି ଦିଗ ନିକଟରେ ଏକ କୋଷ ବିଭାଜନ ସମତଳ ଦିଗ ମଧ୍ୟରେ ଏକ ସମ୍ପର୍କ ପ୍ରକାଶ କରିଥିଲା, ଯାହା GA ସଙ୍କେତ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଏବଂ ବୃଦ୍ଧି ଆନିସୋଟ୍ରୋପି (ଚିତ୍ର 5c, d) ମଧ୍ୟରେ ସମ୍ପର୍କ ସହିତ ସମାନ। ଏହି ସମ୍ପର୍କର ସ୍ଥାନିକ ସଂରକ୍ଷଣକୁ ଆହୁରି ପ୍ରତିଷ୍ଠା କରିବା ପାଇଁ, ଆମେ P3 ରୁ ଆରମ୍ଭ କରି ପ୍ରାଇମୋର୍ଡିୟମ୍ ଚାରିପାଖରେ ଥିବା IPR କୋଷଗୁଡିକରେ ବିଭାଜନ ସମତଳ ଦିଗକୁ ମାପିଥିଲୁ, କାରଣ P4 ରୁ ଆରମ୍ଭ କରି ଏହି ଅଞ୍ଚଳରେ ସର୍ବାଧିକ GA ସଙ୍କେତ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଚିହ୍ନଟ ହୋଇଥିଲା (ଚିତ୍ର 4)। P3 ଏବଂ P4 ପାଖାପାଖି IPR ର ବିଭାଜନ କୋଣଗୁଡ଼ିକ କୌଣସି ପରିସଂଖ୍ୟାନଗତ ଭାବରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପାର୍ଥକ୍ୟ ଦେଖାଇ ନଥିଲେ ମଧ୍ୟ P4 ପାଖାପାଖି IPR ରେ ପାର୍ଶ୍ୱ କୋଷ ବିଭାଜନର ଏକ ବର୍ଦ୍ଧିତ ଆବୃତ୍ତି ପରିଲକ୍ଷିତ ହୋଇଥିଲା (ଚିତ୍ର 5j)। ତଥାପି, P5 ପାଖାପାଖି IPR କୋଷଗୁଡ଼ିକରେ, କୋଷ ବିଭାଜନ ସମତଳର ଦିଗନିର୍ଦ୍ଦେଶରେ ପାର୍ଥକ୍ୟ ପରିସଂଖ୍ୟାନଗତ ଭାବରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ହୋଇଗଲା, ଅନୁପ୍ରବେଶ କୋଷ ବିଭାଜନର ଫ୍ରିକ୍ୱେନ୍ସିରେ ତୀବ୍ର ବୃଦ୍ଧି ସହିତ (ଚିତ୍ର 5j)। ଏକତ୍ର, ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ GA ସଙ୍କେତ SAM ରେ କୋଷ ବିଭାଜନର ଦିଗନିର୍ଦ୍ଦେଶକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରିପାରିବ, ଯାହା ପୂର୍ବ ରିପୋର୍ଟଗୁଡ଼ିକ ସହିତ ସୁସଙ୍ଗତ 40,41 ଯେ ଉଚ୍ଚ GA ସଙ୍କେତ IPR ରେ କୋଷ ବିଭାଜନର ପାର୍ଶ୍ୱ ଦିଗନିର୍ଦ୍ଦେଶକୁ ପ୍ରେରିତ କରିପାରିବ।
ଏହା ପୂର୍ବାନୁମାନ କରାଯାଇଛି ଯେ IPR ରେ ଥିବା କୋଷଗୁଡ଼ିକ ପ୍ରାଇମୋର୍ଡିଆରେ ସାମିଲ ହେବ ନାହିଁ ବରଂ ଇଣ୍ଟରନୋଡ୍ସ 2,42,43 ରେ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ ହେବ। IPR ରେ କୋଷ ବିଭାଜନର ଅନୁପ୍ରବେଶ ଦିଗନିର୍ଦ୍ଦେଶ ଇଣ୍ଟରନୋଡରେ ଏପିଡର୍ମାଲ କୋଷଗୁଡ଼ିକର ସମାନ୍ତରାଳ ଅନୁଦୈର୍ଘ୍ୟ ଧାଡିଗୁଡ଼ିକର ସାଧାରଣ ସଂଗଠନ ସୃଷ୍ଟି କରିପାରେ। ଉପରେ ବର୍ଣ୍ଣିତ ଆମର ପର୍ଯ୍ୟବେକ୍ଷଣ ସୂଚାଏ ଯେ GA ସିଗନାଲିଂ କୋଷ ବିଭାଜନର ଦିଗକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରି ଏହି ପ୍ରକ୍ରିୟାରେ ଏକ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରିଥାଏ।
ଅନେକ DELLA ଜିନ୍‌ର କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତା ହ୍ରାସ ପାଇବା ଫଳରେ ଏକ ଗଠନାତ୍ମକ GA ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସୃଷ୍ଟି ହୁଏ, ଏବଂ ଏହି ପରିକଳ୍ପନାକୁ ପରୀକ୍ଷା କରିବା ପାଇଁ ଡେଲା ମ୍ୟୁଟାଣ୍ଟ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ44। ଆମେ ପ୍ରଥମେ SAM ରେ ପାଞ୍ଚଟି DELLA ଜିନ୍‌ର ପ୍ରକାଶନ ଢାଞ୍ଚା ବିଶ୍ଳେଷଣ କରିଥିଲୁ। GUS ଲାଇନ୍45 ର ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନାଲ୍ ଫ୍ୟୁଜନ୍ ପ୍ରକାଶ କରିଥିଲା ​​ଯେ SAM ରେ GAI, RGA, RGL1, ଏବଂ RGL2 (ଅନେକ କମ୍ ପରିମାଣରେ) ପ୍ରକାଶିତ ହୋଇଥିଲା (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 11a–d)। ଇନ ସିଟୁ ହାଇବ୍ରିଡାଇଜେସନ୍ ଆହୁରି ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିଥିଲା ​​ଯେ GAI mRNA ବିଶେଷ ଭାବରେ ପ୍ରାଇମୋର୍ଡିଆ ଏବଂ ବିକାଶଶୀଳ ଫୁଲରେ ଜମା ହୁଏ (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 11e)। SAM କାନୋପିରେ ଏବଂ ପୁରୁଣା ଫୁଲରେ RGL1 ଏବଂ RGL3 mRNA ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇଥିଲା, ଯେତେବେଳେ RGL2 mRNA ସୀମାବର୍ତ୍ତୀ ଅଞ୍ଚଳରେ ଅଧିକ ଥିଲା (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 11f–h)। pRGL3::RGL3-GFP SAM ର କନଫୋକାଲ୍ ଇମେଜିଂ ଇନ ସିଟୁ ହାଇବ୍ରିଡାଇଜେସନ୍ ଦ୍ୱାରା ପରିଲକ୍ଷିତ ପ୍ରକାଶନକୁ ନିଶ୍ଚିତ କରିଥିଲା ​​ଏବଂ ଦେଖାଇଥିଲା ଯେ RGL3 ପ୍ରୋଟିନ୍ SAM ର କେନ୍ଦ୍ରୀୟ ଅଂଶରେ ଜମା ହୁଏ (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 11i)। pRGA::GFP-RGA ରେଖା ବ୍ୟବହାର କରି, ଆମେ ଏହା ମଧ୍ୟ ପାଇଲୁ ଯେ SAM ରେ RGA ପ୍ରୋଟିନ୍ ଜମା ହୁଏ, କିନ୍ତୁ P4 ରୁ ଆରମ୍ଭ କରି ସୀମାରେ ଏହାର ପ୍ରଚୁରତା ହ୍ରାସ ପାଏ (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 11j)। ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଯେ, RGL3 ଏବଂ RGA ର ପ୍ରକାଶନ ଢାଞ୍ଚା IPR ରେ ଉଚ୍ଚ GA ସଙ୍କେତ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ସହିତ ସୁସଙ୍ଗତ, ଯେପରି qmRGA (ଚିତ୍ର 4) ଦ୍ୱାରା ଚିହ୍ନଟ ହୋଇଛି। ଅଧିକନ୍ତୁ, ଏହି ତଥ୍ୟ ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ ସମସ୍ତ DELLA SAM ରେ ପ୍ରକାଶିତ ହୋଇଛି ଏବଂ ସେମାନଙ୍କର ପ୍ରକାଶନ ସାମୂହିକ ଭାବରେ ସମଗ୍ର SAM କୁ ବ୍ୟାପିଛି।
ଆମେ ପରବର୍ତ୍ତୀ ସମୟରେ ୱାଇଲ୍ଡ-ଟାଇପ୍ SAM (Ler, ନିୟନ୍ତ୍ରଣ) ଏବଂ gai-t6 rga-t2 rgl1-1 rgl2-1 rgl3-4 della quintuple (ଗ୍ଲୋବାଲ୍) ମ୍ୟୁଟାଣ୍ଟ (ଚିତ୍ର 6a, b) ରେ କୋଷ ବିଭାଜନ ପାରାମିଟରଗୁଡିକ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରିଥିଲୁ। ଆଶ୍ଚର୍ଯ୍ୟଜନକ ଭାବରେ, ଆମେ ୱାଇଲ୍ଡ ପ୍ରକାର (ଚିତ୍ର 6c) ତୁଳନାରେ ଡେଲା ଗ୍ଲୋବାଲ୍ ମ୍ୟୁଟାଣ୍ଟ SAM ରେ କୋଷ ବିଭାଜନ କୋଣ ଫ୍ରିକ୍ୱେନ୍ସି ବଣ୍ଟନରେ ଏକ ପରିସଂଖ୍ୟାନଗତ ଭାବରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପରିବର୍ତ୍ତନ ଦେଖିଲୁ। ଡେଲା ଗ୍ଲୋବାଲ୍ ମ୍ୟୁଟାଣ୍ଟରେ ଏହି ପରିବର୍ତ୍ତନ 80-90° କୋଣ (34.71% ବନାମ 24.55%) ଏବଂ କିଛି ପରିମାଣରେ, 70-80° କୋଣ (23.78% ବନାମ 20.18%) ର ଫ୍ରିକ୍ୱେନ୍ସି ବୃଦ୍ଧି ଯୋଗୁଁ ହୋଇଥିଲା, ଅର୍ଥାତ୍, ଟ୍ରାନ୍ସଭର୍ସ କୋଷ ବିଭାଜନ (ଚିତ୍ର 6c) ସହିତ ସମାନ। ଡେଲା ଗ୍ଲୋବାଲ୍ ମ୍ୟୁଟାଣ୍ଟ (0-60°) ର ଫ୍ରିକ୍ୱେନ୍ସି ମଧ୍ୟ ଡେଲା ଗ୍ଲୋବାଲ୍ ମ୍ୟୁଟାଣ୍ଟ (ଚିତ୍ର 6c) ରେ କମ୍ ଥିଲା। ଡେଲା ଗ୍ଲୋବାଲ୍ ମ୍ୟୁଟାଣ୍ଟ (ଚିତ୍ର 6b) ର SAM ରେ ଅନୁପ୍ରବେଶ କୋଷ ବିଭାଜନର ଫ୍ରିକ୍ୱେନ୍ସି ଯଥେଷ୍ଟ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଥିଲା। ଡେଲା ଗ୍ଲୋବାଲ୍ ମ୍ୟୁଟାଣ୍ଟରେ IPR ରେ ଅନୁପ୍ରବେଶ କୋଷ ବିଭାଜନର ଫ୍ରିକ୍ୱେନ୍ସି ମଧ୍ୟ ୱାଇଲ୍ଡ ପ୍ରକାର (ଚିତ୍ର 6d) ତୁଳନାରେ ଅଧିକ ଥିଲା। IPR କ୍ଷେତ୍ର ବାହାରେ, ୱାଇଲ୍ଡ ପ୍ରକାରର କୋଷ ବିଭାଜନ କୋଣଗୁଡ଼ିକର ଏକ ସମାନ ବଣ୍ଟନ ଥିଲା, ଯେଉଁଠାରେ ଡେଲା ଗ୍ଲୋବାଲ୍ ମ୍ୟୁଟାଣ୍ଟ IPR (ଚିତ୍ର 6e) ପରି ସ୍ପର୍ଶକାନ୍ତିକ ବିଭାଗକୁ ପସନ୍ଦ କରୁଥିଲେ। ଆମେ ga2 ଅକ୍ସିଡେଜ୍ (ga2ox) କ୍ୱିଣ୍ଟୁପଲ୍ ମ୍ୟୁଟାଣ୍ଟ (ga2ox1-1, ga2ox2-1, ga2ox3-1, ga2ox4-1, ଏବଂ ga2ox6-2) ର SAM ରେ କୋଷ ବିଭାଜନର ଦିଗନିର୍ଦ୍ଦେଶକୁ ମଧ୍ୟ ପରିମାଣିତ କରିଥିଲୁ, ଏକ GA-ନିଷ୍କ୍ରିୟ ମ୍ୟୁଟାଣ୍ଟ ପୃଷ୍ଠଭୂମି ଯେଉଁଥିରେ GA ଜମା ହୁଏ। GA ସ୍ତର ବୃଦ୍ଧି ସହିତ ସମନ୍ୱିତ, କ୍ୱିଣ୍ଟୁପଲ୍ ga2ox ମ୍ୟୁଟାଣ୍ଟ ଇନଫ୍ଲୋରେସେନ୍ସର SAM Col-0 (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 12a, b) ଅପେକ୍ଷା ବଡ଼ ଥିଲା, ଏବଂ Col-0 ତୁଳନାରେ, କ୍ୱିଣ୍ଟୁପଲ୍ ga2ox SAM କୋଷ ବିଭାଜନ କୋଣଗୁଡ଼ିକର ଏକ ସ୍ପଷ୍ଟ ଭାବରେ ଭିନ୍ନ ବଣ୍ଟନ ଦେଖାଇଥିଲା, କୋଣ ଆବୃତ୍ତି 50° ରୁ 90° କୁ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଥିଲା, ଅର୍ଥାତ୍ ପୁଣି ସ୍ପର୍ଶକାନ୍ତି ବିଭାଜନକୁ ପସନ୍ଦ କରୁଥିଲା (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 12a–c)। ତେଣୁ, ଆମେ ଦେଖାଉଛୁ ଯେ GA ସଙ୍କେତ ଏବଂ GA ସଂଗ୍ରହର ଗଠନାତ୍ମକ ସକ୍ରିୟକରଣ IPR ଏବଂ SAM ର ବାକି ଅଂଶରେ ପାର୍ଶ୍ଵ କୋଷ ବିଭାଜନକୁ ପ୍ରେରଣା ଦିଏ।
a, b କନଫୋକାଲ୍ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପି ବ୍ୟବହାର କରି PI-ଷ୍ଟେଣ୍ଡ Ler (a) ଏବଂ ଗ୍ଲୋବାଲ୍ ଡେଲା ମ୍ୟୁଟାଣ୍ଟ (b) SAM ର L1 ସ୍ତରର 3D ଭିଜୁଆଲାଇଜେସନ୍। 10-ଘଣ୍ଟା ଅବଧିରେ SAM (କିନ୍ତୁ ପ୍ରାଇମୋର୍ଡିୟମ୍ ନୁହେଁ) ରେ ଗଠିତ ନୂତନ କୋଷ କାନ୍ଥଗୁଡ଼ିକୁ ସେମାନଙ୍କର କୋଣ ମୂଲ୍ୟ ଅନୁସାରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି ଏବଂ ରଙ୍ଗ କରାଯାଇଛି। ଇନସେଟ୍ 0 ଘଣ୍ଟାରେ SAM ଦେଖାଉଛି। ତଳ ଡାହାଣ କୋଣରେ ରଙ୍ଗ ବାର ପ୍ରଦର୍ଶିତ ହୋଇଛି। (b) ରେ ଥିବା ତୀର ଗ୍ଲୋବାଲ୍ ଡେଲା ମ୍ୟୁଟାଣ୍ଟରେ ସଂଲଗ୍ନ କୋଷ ଫାଇଲଗୁଡ଼ିକର ଏକ ଉଦାହରଣକୁ ସୂଚାଇଛି। ସମାନ ଫଳାଫଳ ସହିତ ପରୀକ୍ଷଣ ଦୁଇଥର ପୁନରାବୃତ୍ତି ହୋଇଥିଲା। ce ସମଗ୍ର SAM (d), IPR (e), ଏବଂ Ler ଏବଂ ଗ୍ଲୋବାଲ୍ ଡେଲା ମଧ୍ୟରେ ଅଣ-IPR (f) ରେ କୋଷ ବିଭାଜନ ସମତଳ ଦିଗନିର୍ଦ୍ଦେଶନର ଫ୍ରିକ୍ୱେନ୍ସି ବଣ୍ଟନର ତୁଳନା। P ମୂଲ୍ୟଗୁଡ଼ିକ ଏକ ଦୁଇ-ଲାଞ୍ଜ ବିଶିଷ୍ଟ କୋଲମୋଗୋରୋଭ-ସ୍ମିରନୋଭ୍ ପରୀକ୍ଷା ବ୍ୟବହାର କରି ପ୍ରାପ୍ତ ହୋଇଥିଲା। f, g Col-0 (i) ଏବଂ pCUC2::gai-1-VENUS (j) ଟ୍ରାନ୍ସଜେନିକ୍ ଉଦ୍ଭିଦର PI-ଷ୍ଟେଣ୍ଡ SAM ର କନଫୋକାଲ୍ ପ୍ରତିଛବିଗୁଡ଼ିକର 3D ଭିଜୁଆଲାଇଜେସନ୍। ପ୍ୟାନେଲଗୁଡ଼ିକ (a, b) 10 ଘଣ୍ଟା ମଧ୍ୟରେ SAM ରେ ଗଠିତ ନୂତନ କୋଷ କାନ୍ଥ (କିନ୍ତୁ ପ୍ରାଇମୋର୍ଡିଆ ନୁହେଁ) ଦେଖାଏ। ସମାନ ଫଳାଫଳ ସହିତ ପରୀକ୍ଷଣ ଦୁଇଥର ପୁନରାବୃତ୍ତି ହୋଇଥିଲା। h–j Col-0 ଏବଂ pCUC2::gai-1-VENUS ଉଦ୍ଭିଦ ମଧ୍ୟରେ ସମଗ୍ର SAM (h), IPR (i) ଏବଂ ଅଣ-IPR (j) ରେ ଅବସ୍ଥିତ କୋଷ ବିଭାଜନ ସମତଳ ଦିଗଗୁଡ଼ିକର ଫ୍ରିକ୍ୱେନ୍ସି ବଣ୍ଟନର ତୁଳନା। P ମୂଲ୍ୟଗୁଡ଼ିକ ଏକ ଦୁଇ-ଲାଞ୍ଜ ବିଶିଷ୍ଟ Kolmogorov–Smirnov ପରୀକ୍ଷା ବ୍ୟବହାର କରି ପ୍ରାପ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା।
ଆମେ ପରବର୍ତ୍ତୀ ସମୟରେ IPR ରେ ବିଶେଷ ଭାବରେ GA ସିଗନାଲିଂକୁ ବାଧା ଦେବାର ପ୍ରଭାବ ପରୀକ୍ଷା କରିଥିଲୁ। ଏହି ଉଦ୍ଦେଶ୍ୟରେ, ଆମେ VENUS ସହିତ ମିଶ୍ରିତ ଏକ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ନକାରାତ୍ମକ gai-1 ପ୍ରୋଟିନର ପ୍ରକାଶନକୁ ଚଳାଇବା ପାଇଁ କୋଟିଲେଡନ୍ କପ୍ 2 (CUC2) ପ୍ରମୋଟର ବ୍ୟବହାର କରିଥିଲୁ (pCUC2::gai-1-VENUS ରେଖାରେ)। ବନ୍ୟ-ପ୍ରକାର SAM ରେ, CUC2 ପ୍ରମୋଟର P4 ରୁ ସୀମା କୋଷ ସମେତ SAM ରେ ଅଧିକାଂଶ IPR ର ପ୍ରକାଶନକୁ ଚଳାଇଥାଏ, ଏବଂ pCUC2::gai-1-VENUS ଉଦ୍ଭିଦରେ ସମାନ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପ୍ରକାଶନ ପରିଲକ୍ଷିତ ହୋଇଥିଲା (ନିମ୍ନରେ ଦେଖନ୍ତୁ)। pCUC2::gai-1-VENUS ଉଦ୍ଭିଦର SAM କିମ୍ବା IPR ମଧ୍ୟରେ କୋଷ ବିଭାଜନ କୋଣର ବଣ୍ଟନ ବନ୍ୟ ପ୍ରକାରର ଉଦ୍ଭିଦ ଠାରୁ ଯଥେଷ୍ଟ ଭିନ୍ନ ନଥିଲା, ଯଦିଓ ଅପ୍ରତ୍ୟାଶିତ ଭାବରେ ଆମେ ପାଇଲୁ ଯେ ଏହି ଉଦ୍ଭିଦଗୁଡ଼ିକରେ IPR ବିନା କୋଷଗୁଡ଼ିକ 80-90° (ଚିତ୍ର 6f–j) ର ଉଚ୍ଚ ଆବୃତ୍ତିରେ ବିଭକ୍ତ ହୋଇଥିଲା।
ଏହା ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇଛି ଯେ କୋଷ ବିଭାଜନର ଦିଗ SAM ର ଜ୍ୟାମିତି ଉପରେ ନିର୍ଭର କରେ, ବିଶେଷକରି ଟିସୁ ବକ୍ରତା ଦ୍ୱାରା ସୃଷ୍ଟି ହୋଇଥିବା ଟେନସାଇଲ୍ ଚାପ46। ତେଣୁ ଆମେ ପଚାରିଲୁ ଯେ SAM ର ଆକୃତି ଡେଲା ଗ୍ଲୋବାଲ୍ ମ୍ୟୁଟାଣ୍ଟ ଏବଂ pCUC2::gai-1-VENUS ଉଦ୍ଭିଦରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ ହୋଇଥିଲା କି? ପୂର୍ବରୁ ରିପୋର୍ଟ କରାଯାଇଥିବା ପରି12, ଡେଲା ଗ୍ଲୋବାଲ୍ ମ୍ୟୁଟାଣ୍ଟ SAM ର ଆକାର ବନ୍ୟ ପ୍ରକାର ଅପେକ୍ଷା ବଡ଼ ଥିଲା (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 13a, b, d)। CLV3 ଏବଂ STM RNA ର ଇନ ସିଟୁ ହାଇବ୍ରିଡାଇଜେସନ୍ ଡେଲା ମ୍ୟୁଟାଣ୍ଟରେ ମେରିଷ୍ଟେମ୍ ପ୍ରସାରଣକୁ ନିଶ୍ଚିତ କରିଥିଲା ​​ଏବଂ ଷ୍ଟେମ୍ କୋଷ ନିଚ୍ ର ପାର୍ଶ୍ଵିକ ପ୍ରସାରଣକୁ ଆହୁରି ଦେଖାଇଥିଲା (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 13e, f, h, i)। ତଥାପି, SAM ବକ୍ରତା ଉଭୟ ଜିନୋଟାଇପ୍‌ରେ ସମାନ ଥିଲା (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 13k, m, n, p)। ଆମେ ଜଙ୍ଗଲୀ ପ୍ରକାର ତୁଳନାରେ ବକ୍ରତାରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ ବିନା gai-t6 rga-t2 rgl1-1 rgl2-1 della quadruple mutant ରେ ଆକାରରେ ସମାନ ବୃଦ୍ଧି ଦେଖିଲୁ (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 13c, d, g, j, l, o, p)। ଡେଲା quadruple mutant ରେ କୋଷ ବିଭାଜନ ଦିଗନିର୍ଦ୍ଦେଶର ଫ୍ରିକ୍ୱେନ୍ସି ମଧ୍ୟ ପ୍ରଭାବିତ ହୋଇଥିଲା, କିନ୍ତୁ ଡେଲା ମୋନୋଲିଥିକ ମ୍ୟୁଟାଣ୍ଟ (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 12d–f) ତୁଳନାରେ କମ୍ ପରିମାଣରେ। ଏହି ଡୋଜେଜ୍ ପ୍ରଭାବ, ବକ୍ରତା ଉପରେ ପ୍ରଭାବର ଅଭାବ ସହିତ, ସୂଚିତ କରେ ଯେ ଡେଲା quadruple mutant ରେ ଅବଶିଷ୍ଟ RGL3 କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ DELLA କାର୍ଯ୍ୟକଳାପର କ୍ଷତି ହେତୁ କୋଷ ବିଭାଜନ ଦିଗନିର୍ଦ୍ଦେଶରେ ପରିବର୍ତ୍ତନକୁ ସୀମିତ କରେ ଏବଂ ପାର୍ଶ୍ୱ କୋଷ ବିଭାଜନରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ SAM ଜ୍ୟାମିତିରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ ବଦଳରେ GA ସଙ୍କେତ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପରେ ପରିବର୍ତ୍ତନର ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ଘଟେ। ଉପରେ ବର୍ଣ୍ଣିତ ପରି, CUC2 ପ୍ରମୋଟର P4 ରୁ ଆରମ୍ଭ କରି SAM ରେ IPR ପ୍ରକାଶନକୁ ଚଲାନ୍ତି (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 14a, b), ଏବଂ ବିପରୀତରେ, pCUC2::gai-1-VENUS SAM ର ଆକାର ହ୍ରାସ ପାଇଥିଲା କିନ୍ତୁ ବକ୍ରତା ଅଧିକ ଥିଲା (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 14c–h)। pCUC2::gai-1-VENUS SAM ଆକୃତିରେ ଏହି ପରିବର୍ତ୍ତନର ଫଳସ୍ୱରୂପ ବନ୍ୟ ପ୍ରକାର ତୁଳନାରେ ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଚାପର ଏକ ଭିନ୍ନ ବଣ୍ଟନ ହୋଇପାରେ, ଯେଉଁଥିରେ ଉଚ୍ଚ ପରିଧି ଚାପ SAM କେନ୍ଦ୍ରରୁ କମ୍ ଦୂରତାରେ ଆରମ୍ଭ ହୁଏ47। ବିକଳ୍ପ ଭାବରେ, pCUC2::gai-1-VENUS SAM ଆକୃତିରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ ଟ୍ରାନ୍ସଜିନ୍ ପ୍ରକାଶନ ଦ୍ୱାରା ପ୍ରେରିତ ଆଞ୍ଚଳିକ ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଗୁଣରେ ପରିବର୍ତ୍ତନରୁ ହୋଇପାରେ48। ଉଭୟ କ୍ଷେତ୍ରରେ, ଏହା GA ସିଗନାଲିଂରେ ପରିବର୍ତ୍ତନର ପ୍ରଭାବକୁ ଆଂଶିକ ଭାବରେ ପୂରଣ କରିପାରିବ ଯାହା କୋଷଗୁଡିକ ପରିଧି/ଅନୁକ୍ରମିକ ଦିଗନିର୍ଦ୍ଦେଶରେ ବିଭାଜିତ ହେବାର ସମ୍ଭାବନାକୁ ବୃଦ୍ଧି କରି, ଆମର ପର୍ଯ୍ୟବେକ୍ଷଣକୁ ବ୍ୟାଖ୍ୟା କରେ।
ଏକତ୍ରିତ ଭାବରେ, ଆମର ତଥ୍ୟ ନିଶ୍ଚିତ କରେ ଯେ IPR ରେ କୋଷ ବିଭାଜନ ସମତଳର ପାର୍ଶ୍ଵିକ ଦିଗନିର୍ଦ୍ଦେଶନରେ ଉଚ୍ଚ GA ସିଗନାଲିଂ ଏକ ସକ୍ରିୟ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରେ। ସେମାନେ ଏହା ମଧ୍ୟ ଦର୍ଶାନ୍ତି ଯେ ମେରିଷ୍ଟେମ୍ ବକ୍ରତା IPR ରେ କୋଷ ବିଭାଜନ ସମତଳର ଦିଗନିର୍ଦ୍ଦେଶକୁ ମଧ୍ୟ ପ୍ରଭାବିତ କରେ।
IPR ରେ ଡିଭିଜନ ପ୍ଲେନର ଟ୍ରାନ୍ସଭର୍ସ ଓରିଏଣ୍ଟେସନ୍, ଉଚ୍ଚ GA ସିଗନାଲିଂ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଯୋଗୁଁ, ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ GA SAM ମଧ୍ୟରେ ଏପିଡର୍ମିସ୍ ରେ ଏକ ରେଡିଆଲ୍ ସେଲ୍ ଫାଇଲକୁ ପୂର୍ବ-ସଂଗଠିତ କରିଥାଏ ଯାହା ପରେ ଏପିଡର୍ମିଲ୍ ଇଣ୍ଟର୍ନୋଡ୍ ରେ ମିଳିବ ସେଲ୍ୟୁଲାର୍ ସଂଗଠନକୁ ପରିଭାଷିତ କରିଥାଏ। ପ୍ରକୃତରେ, ଡେଲା ଗ୍ଲୋବାଲ୍ ମ୍ୟୁଟାଣ୍ଟଙ୍କ SAM ପ୍ରତିଛବିରେ ଏପରି ସେଲ୍ ଫାଇଲଗୁଡ଼ିକ ପ୍ରାୟତଃ ଦୃଶ୍ୟମାନ ହେଉଥିଲା (ଚିତ୍ର 6b)। ତେଣୁ, SAM ରେ GA ସିଗନାଲିଂର ସ୍ଥାନିୟ ପ୍ୟାଟର୍ନର ବିକାଶମୂଳକ କାର୍ଯ୍ୟକୁ ଆହୁରି ଅନୁସନ୍ଧାନ କରିବା ପାଇଁ, ଆମେ ୱାଇଲ୍ଡ-ଟାଇପ୍ (Ler ଏବଂ Col-0), ଡେଲା ଗ୍ଲୋବାଲ୍ ମ୍ୟୁଟାଣ୍ଟ ଏବଂ pCUC2::gai-1-VENUS ଟ୍ରାନ୍ସଜେନିକ୍ ଉଦ୍ଭିଦରେ IPR ରେ କୋଷଗୁଡ଼ିକର ସ୍ଥାନିୟ ସଂଗଠନ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରିବା ପାଇଁ ସମୟ-ଲାପ୍ସ ଇମେଜିଂ ବ୍ୟବହାର କରିଥିଲୁ।
ଆମେ ଦେଖିଲୁ ଯେ qmRGA ଦେଖାଇଛି ଯେ IPR ରେ GA ସଙ୍କେତ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ P1/P2 ରୁ ବୃଦ୍ଧି ପାଇ P4 ରେ ପହଞ୍ଚିଛି, ଏବଂ ଏହି ଢାଞ୍ଚା ସମୟ ସହିତ ସ୍ଥିର ରହିଛି (ଚିତ୍ର 4a–f ଏବଂ ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 8c–f, k)। ବର୍ଦ୍ଧିତ GA ସଙ୍କେତ ସହିତ IPR ରେ କୋଷଗୁଡ଼ିକର ସ୍ଥାନିକ ସଂଗଠନ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରିବା ପାଇଁ, ଆମେ ପ୍ରଥମ ପର୍ଯ୍ୟବେକ୍ଷଣ ପରେ 34 ଘଣ୍ଟା ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିବା ସେମାନଙ୍କର ବିକାଶମୂଳକ ଭାଗ୍ୟ ଅନୁସାରେ P4 ର ଉପରେ ଏବଂ ପାର୍ଶ୍ୱରେ Ler IPR କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ଲେବଲ୍ କରିଥିଲୁ, ଅର୍ଥାତ୍ ଦୁଇ ଥରରୁ ଅଧିକ ପ୍ଲାଷ୍ଟିଡ୍ ସମୟ, ଯାହା ଆମକୁ P1/P2 ରୁ P4 ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ପ୍ରାଇମୋର୍ଡିୟମ୍ ବିକାଶ ସମୟରେ IPR କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ଅନୁସରଣ କରିବାକୁ ଅନୁମତି ଦେଇଥିଲା। ଆମେ ତିନୋଟି ଭିନ୍ନ ରଙ୍ଗ ବ୍ୟବହାର କରିଥିଲୁ: P4 ନିକଟରେ ପ୍ରାଇମୋର୍ଡିୟମ୍ ରେ ସଂଯୁକ୍ତ ହୋଇଥିବା କୋଷଗୁଡ଼ିକ ପାଇଁ ହଳଦିଆ, IPR ରେ ଥିବା ପାଇଁ ସବୁଜ ଏବଂ ଉଭୟ ପ୍ରକ୍ରିୟାରେ ଅଂଶଗ୍ରହଣ କରିଥିବା କୋଷଗୁଡ଼ିକ ପାଇଁ ବାଇଗଣୀ (ଚିତ୍ର 7a–c)। t0 (0 h) ରେ, P4 ସାମ୍ନାରେ IPR କୋଷଗୁଡ଼ିକର 1-2 ସ୍ତର ଦୃଶ୍ୟମାନ ହେଉଥିଲା (ଚିତ୍ର 7a)। ଆଶା କରାଯାଉଥିଲା ଯେ, ଯେତେବେଳେ ଏହି କୋଷଗୁଡ଼ିକ ବିଭାଜିତ ହୋଇଥିଲେ, ସେମାନେ ମୁଖ୍ୟତଃ ଅନୁପ୍ରବେଶ ବିଭାଜନ ସମତଳ (ଚିତ୍ର 7a–c) ମାଧ୍ୟମରେ ତାହା କରିଥିଲେ। Col-0 SAM ବ୍ୟବହାର କରି ସମାନ ଫଳାଫଳ ମିଳିଥିଲା ​​(P3 ଉପରେ ଧ୍ୟାନ ଦେଇ, ଯାହାର ସୀମା Ler ରେ P4 ସହିତ ସମାନ ଭାବରେ ଫୋଲ୍ଡ ହୋଇଥିଲା), ଯଦିଓ ଏହି ଜିନୋଟାଇପରେ ଫୁଲ ସୀମାରେ ଗଠିତ ଫୋଲ୍ଡ IPR କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ଅଧିକ ଶୀଘ୍ର ଲୁଚାଇ ଦେଇଥିଲା (ଚିତ୍ର 7g–i)। ତେଣୁ, IPR କୋଷଗୁଡ଼ିକର ବିଭାଜନ ଢାଞ୍ଚା କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ଇଣ୍ଟରନୋଡ୍ ପରି ରେଡିଆଲ୍ ଧାଡ଼ିରେ ପୂର୍ବ-ସଂଗଠିତ କରିଥାଏ। ରେଡିଆଲ୍ ଧାଡ଼ିଗୁଡ଼ିକର ସଂଗଠନ ଏବଂ କ୍ରମିକ ଅଙ୍ଗ ମଧ୍ୟରେ IPR କୋଷଗୁଡ଼ିକର ସ୍ଥାନୀୟକରଣ ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ ଏହି କୋଷଗୁଡ଼ିକ ଇଣ୍ଟରନୋଡାଲ୍ ପ୍ରୋଜେନିଟର।
ଏଠାରେ, ଆମେ ଏକ ରେଟିଓମେଟ୍ରିକ୍ GA ସିଗନାଲିଂ ବାୟୋସେନ୍ସର, qmRGA ବିକଶିତ କରିଛୁ, ଯାହା GA ଏବଂ GA ରିସେପ୍ଟର ସାନ୍ଦ୍ରତାରୁ ସୃଷ୍ଟି ହେଉଥିବା GA ସିଗନାଲିଂ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପର ପରିମାଣାତ୍ମକ ମ୍ୟାପିଂକୁ ଅନୁମତି ଦିଏ ଏବଂ ଅନ୍ତର୍ଜାତୀୟ ସିଗନାଲିଂ ପଥ ସହିତ ହସ୍ତକ୍ଷେପକୁ କମ କରିଥାଏ, ଯାହା ଦ୍ଵାରା କୋଷୀୟ ସ୍ତରରେ GA କାର୍ଯ୍ୟ ବିଷୟରେ ସୂଚନା ପ୍ରଦାନ କରିଥାଏ। ଏହି ଉଦ୍ଦେଶ୍ୟରେ, ଆମେ ଏକ ପରିବର୍ତ୍ତିତ DELLA ପ୍ରୋଟିନ୍, mRGA ନିର୍ମାଣ କରିଛୁ, ଯାହା DELLA ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା ଅଂଶୀଦାରମାନଙ୍କୁ ବାନ୍ଧିବାର କ୍ଷମତା ହରାଇଛି କିନ୍ତୁ GA-ପ୍ରବର୍ତ୍ତିତ ପ୍ରୋଟିଓଲାଇସିସ୍ ପ୍ରତି ସମ୍ବେଦନଶୀଳ ରହିଛି। qmRGA GA ସ୍ତରର ଉଭୟ ବାହ୍ୟ ଏବଂ ଅନ୍ତର୍ଜାତୀୟ ପରିବର୍ତ୍ତନର ପ୍ରତିକ୍ରିୟା କରେ, ଏବଂ ଏହାର ଗତିଶୀଳ ସେନ୍ସିଂ ଗୁଣ ବିକାଶ ସମୟରେ GA ସିଗନାଲିଂ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପରେ ସ୍ପାଟିଓଟେମ୍ପୋରାଲ୍ ପରିବର୍ତ୍ତନର ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନକୁ ସକ୍ଷମ କରେ। qmRGA ମଧ୍ୟ ଏକ ବହୁତ ନମନୀୟ ଉପକରଣ କାରଣ ଏହାକୁ ଏହାର ପ୍ରକାଶନ ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ପ୍ରମୋଟରକୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରି ବିଭିନ୍ନ ଟିସୁ ସହିତ ଅନୁକୂଳିତ କରାଯାଇପାରିବ (ଯଦି ଆବଶ୍ୟକ ହୁଏ), ଏବଂ GA ସିଗନାଲିଂ ପଥ ଏବଂ ଆଞ୍ଜିଓସ୍ପର୍ମ ମଧ୍ୟରେ PFYRE ମୋଟିଫ୍ ର ସଂରକ୍ଷିତ ପ୍ରକୃତିକୁ ଦୃଷ୍ଟିରେ ରଖି, ଏହା ଅନ୍ୟ ପ୍ରଜାତିକୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତରିତ ହେବାର ସମ୍ଭାବନା ଅଛି। ଏହା ସହିତ ସମାନ, ଚାଉଳ SLR1 DELLA ପ୍ରୋଟିନ୍ (HYY497AAA) ରେ ଏକ ସମତୁଲ୍ୟ ପରିବର୍ତ୍ତନ ମଧ୍ୟ SLR1 ର ବୃଦ୍ଧି ଦମନକାରୀ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ଦମନ କରିବା ପାଇଁ ଦେଖାଯାଇଥିଲା, ଯେତେବେଳେ ଏହାର GA-ମଧ୍ୟସ୍ଥତା ଅବନତିକୁ ସାମାନ୍ୟ ହ୍ରାସ କରିଥିଲା, mRGA23 ପରି। ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ, Arabidopsis ରେ ସାମ୍ପ୍ରତିକ ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ PFYRE ଡୋମେନ୍ (S474L) ରେ ଏକ ଏକକ ଆମିନୋ ଏସିଡ୍ ପରିବର୍ତ୍ତନ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଫ୍ୟାକ୍ଟର ପାର୍ଟନର୍ସ50 ସହିତ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା କରିବାର କ୍ଷମତାକୁ ପ୍ରଭାବିତ ନକରି RGA ର ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନାଲ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରିଥିଲା। ଯଦିଓ ଏହି ପରିବର୍ତ୍ତନ mRGA ରେ ଉପସ୍ଥିତ 3 ଆମିନୋ ଏସିଡ୍ ପ୍ରତିସ୍ଥାପନ ସହିତ ବହୁତ ନିକଟତର, ଆମର ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଜଣାପଡ଼ିଛି ଯେ ଏହି ଦୁଇଟି ପରିବର୍ତ୍ତନ DELLA ର ସ୍ୱତନ୍ତ୍ର ବୈଶିଷ୍ଟ୍ୟଗୁଡ଼ିକୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରେ। ଯଦିଓ ଅଧିକାଂଶ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଫ୍ୟାକ୍ଟର ପାର୍ଟନର୍ସ DELLA26,51 ର LHR1 ଏବଂ SAW ଡୋମେନ୍ ସହିତ ଜଡିତ, PFYRE ଡୋମେନ୍ ରେ କିଛି ସଂରକ୍ଷିତ ଆମିନୋ ଏସିଡ୍ ଏହି ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟାକୁ ସ୍ଥିର କରିବାରେ ସାହାଯ୍ୟ କରିପାରେ।
ଉଦ୍ଭିଦ ସ୍ଥାପତ୍ୟ ଏବଂ ଅମଳ ଉନ୍ନତିରେ ଇଣ୍ଟରନୋଡ୍ ବିକାଶ ଏକ ପ୍ରମୁଖ ବୈଶିଷ୍ଟ୍ୟ। qmRGA IPR ଇଣ୍ଟର୍ନୋଡ୍ ପ୍ରୋଜେନିଟର କୋଷଗୁଡ଼ିକରେ ଉଚ୍ଚ GA ସଙ୍କେତିକ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ପ୍ରକାଶ କରିଛି। ପରିମାଣାତ୍ମକ ଇମେଜିଂ ଏବଂ ଜେନେଟିକ୍ସକୁ ମିଶ୍ରଣ କରି, ଆମେ ଦେଖାଇଲୁ ଯେ GA ସଙ୍କେତିକ ପଦ୍ଧତିଗୁଡ଼ିକ SAM ଏପିଡରମିସ୍ରେ ବୃତ୍ତାକାର/ଅନୁକ୍ରମିକ କୋଷ ବିଭାଜନ ପ୍ଲେନଗୁଡ଼ିକୁ ସୁପରଇମ୍ପୋଜ୍ କରେ, ଇଣ୍ଟର୍ନୋଡ୍ ବିକାଶ ପାଇଁ ଆବଶ୍ୟକ କୋଷ ବିଭାଜନ ସଂଗଠନକୁ ଆକାର ଦିଏ। ବିକାଶ ସମୟରେ କୋଷ ବିଭାଜନ ପ୍ଲେନ ଓରିଏଣ୍ଟେସନର ଅନେକ ନିୟାମକ ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇଛି52,53। ଆମର କାର୍ଯ୍ୟ GA ସଙ୍କେତିକ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଏହି କୋଷୀୟ ପାରାମିଟରକୁ କିପରି ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରେ ତାହାର ଏକ ସ୍ପଷ୍ଟ ଉଦାହରଣ ପ୍ରଦାନ କରେ। DELLA ପ୍ରିଫୋଲ୍ଡିଂ ପ୍ରୋଟିନ୍ କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସ ସହିତ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା କରିପାରିବ41, ତେଣୁ GA ସଙ୍କେତିକ କର୍ଟିକାଲ୍ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବଲ୍ ଓରିଏଣ୍ଟେସନକୁ ସିଧାସଳଖ ପ୍ରଭାବିତ କରି କୋଷ ବିଭାଜନ ପ୍ଲେନ ଓରିଏଣ୍ଟେସନକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରିପାରେ40,41,54,55। ଆମେ ଅପ୍ରତ୍ୟାଶିତ ଭାବରେ ଦେଖାଇଲୁ ଯେ SAM ରେ, ଉଚ୍ଚ GA ସଙ୍କେତିକ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପର ସହସଂଯୋଗ କୋଷ ଦୀର୍ଘତା କିମ୍ବା ବିଭାଜନ ନୁହେଁ, ବରଂ କେବଳ ବୃଦ୍ଧି ଆନିସୋଟ୍ରୋପି ଥିଲା, ଯାହା IPR ରେ କୋଷ ବିଭାଜନ ଦିଗରେ GA ର ସିଧାସଳଖ ପ୍ରଭାବ ସହିତ ସୁସଙ୍ଗତ। ତଥାପି, ଆମେ ଏହା ବାଦ୍ ଦେଇପାରିବୁ ନାହିଁ ଯେ ଏହି ପ୍ରଭାବ ପରୋକ୍ଷ ମଧ୍ୟ ହୋଇପାରେ, ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ GA-ପ୍ରେରିତ କୋଷ କାନ୍ଥ ନରମ କରିବା ଦ୍ୱାରା ମଧ୍ୟସ୍ଥତା56। କୋଷ କାନ୍ଥ ଗୁଣରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଚାପ57,58 ପ୍ରେରଣା କରେ, ଯାହା କର୍ଟିକାଲ୍ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ସର ଦିଗକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରି କୋଷ ବିଭାଜନ ସମତଳର ଦିଗକୁ ମଧ୍ୟ ପ୍ରଭାବିତ କରିପାରେ39,46,59। GA-ପ୍ରେରିତ ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଚାପର ମିଳିତ ପ୍ରଭାବ ଏବଂ GA ଦ୍ୱାରା ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ ଦିଗକୁ ସିଧାସଳଖ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଇଣ୍ଟରନୋଡ୍ ପରିଭାଷିତ କରିବା ପାଇଁ IPR ରେ କୋଷ ବିଭାଜନ ଦିଗକୁ ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପ୍ୟାଟର୍ଣ୍ଣ ସୃଷ୍ଟି କରିବାରେ ସାମିଲ ହୋଇପାରେ, ଏବଂ ଏହି ଧାରଣାକୁ ପରୀକ୍ଷା କରିବା ପାଇଁ ଅଧିକ ଅଧ୍ୟୟନ ଆବଶ୍ୟକ। ସେହିପରି, ପୂର୍ବ ଅଧ୍ୟୟନଗୁଡ଼ିକ ଇଣ୍ଟରନୋଡ୍ ଗଠନ ନିୟନ୍ତ୍ରଣରେ DELLA-ପାରସ୍ପରିକ ପ୍ରୋଟିନ୍ TCP14 ଏବଂ 15 ର ଗୁରୁତ୍ୱକୁ ଆଲୋକିତ କରିଛି60,61 ଏବଂ ଏହି କାରକଗୁଡ଼ିକ BREVIPEDICELLUS (BP) ଏବଂ PENNYWISE (PNY) ସହିତ GA ର କାର୍ଯ୍ୟ ମଧ୍ୟସ୍ଥତା କରିପାରେ, ଯାହା ଇଣ୍ଟରନୋଡ୍ ବିକାଶକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରେ ଏବଂ GA ସଙ୍କେତକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରୁଥିବା ଦେଖାଯାଇଛି2,62। DELLAs ବ୍ରାସିନୋଷ୍ଟେରଏଡ୍, ଇଥିଲିନ୍, ଜାସମୋନିକ୍ ଏସିଡ୍, ଏବଂ ଆବସିସିକ୍ ଏସିଡ୍ (ABA) ସିଗନାଲିଂ ପାଥୱେ ସହିତ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା କରୁଥିବାରୁ ଏବଂ ଏହି ହରମୋନ୍ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବଲ୍ ଓରିଏଣ୍ଟେସନ୍କୁ ପ୍ରଭାବିତ କରିପାରେ65, ତେଣୁ କୋଷ ବିଭାଜନ ଓରିଏଣ୍ଟେସନ୍ ଉପରେ GA ର ପ୍ରଭାବ ଅନ୍ୟ ହରମୋନ୍ ଦ୍ୱାରା ମଧ୍ୟସ୍ଥତା ହୋଇପାରେ।
ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ସାଇଟୋଲୋଜିକାଲ୍ ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ ଇଣ୍ଟର୍ନୋଡ୍ ବିକାଶ ପାଇଁ ଆରାବିଡୋପ୍ସିସ୍ SAM ର ଭିତର ଏବଂ ବାହ୍ୟ ଉଭୟ ଅଞ୍ଚଳ ଆବଶ୍ୟକ 2,42। GA ସକ୍ରିୟ ଭାବରେ ଭିତର ଟିସୁରେ କୋଷ ବିଭାଜନକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରେ 12 ଏହି ସତ୍ୟ ଯେ SAM ରେ ମେରିଷ୍ଟେମ୍ ଏବଂ ଇଣ୍ଟର୍ନୋଡ୍ ଆକାରକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରିବାରେ GA ର ଦ୍ୱୈତ କାର୍ଯ୍ୟକୁ ସମର୍ଥନ କରେ। ଦିଗଦର୍ଶନ କୋଷ ବିଭାଜନର ଢାଞ୍ଚା ମଧ୍ୟ ଭିତର SAM ଟିସୁରେ କଡ଼ା ଭାବରେ ନିୟନ୍ତ୍ରିତ ହୋଇଥାଏ, ଏବଂ ଏହି ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଷ୍ଟେମ୍ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଁ ଅତ୍ୟାବଶ୍ୟକ 52। ଏହା ପରୀକ୍ଷା କରିବା ଆକର୍ଷଣୀୟ ହେବ ଯେ GA ମଧ୍ୟ ଭିତର SAM ସଂଗଠନରେ କୋଷ ବିଭାଜନ ସମତଳକୁ ଦିଗନିର୍ଦ୍ଦେଶ କରିବାରେ ଏକ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରେ କି ନାହିଁ, ଏହା ଦ୍ୱାରା SAM ମଧ୍ୟରେ ଇଣ୍ଟର୍ନୋଡ୍‌ଗୁଡ଼ିକର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟକରଣ ଏବଂ ବିକାଶକୁ ସମନ୍ୱିତ କରିଥାଏ।
ମାଟିରେ ଭିଟ୍ରୋ କିମ୍ବା 1x ମୁରାଶିଗେ-ସ୍କୁଗ (MS) ମଧ୍ୟମ (ଡୁଚେଫା) ସହିତ 1% ସୁକ୍ରୋଜ୍ ଏବଂ 1% ଆଗର (ସିଗ୍ମା) ସହିତ ମାନକ ପରିସ୍ଥିତି (16 ଘଣ୍ଟା ଆଲୋକ, 22 ଡିଗ୍ରୀ ସେଲ୍ସିୟସ୍) ସହିତ ପରିପୂରକ ଭାବରେ ଉଦ୍ଭିଦ ଚାଷ କରାଯାଇଥିଲା, ହାଇପୋକୋଟାଇଲ୍ ଏବଂ ମୂଳ ବୃଦ୍ଧି ପରୀକ୍ଷା ବ୍ୟତୀତ ଯେଉଁଥିରେ ସ୍ଥିର ଆଲୋକ ଏବଂ 22 ଡିଗ୍ରୀ ସେଲ୍ସିୟସ୍ ତଳେ ଭୂଲମ୍ବ ପ୍ଲେଟରେ ଚାରା ଚାଷ କରାଯାଇଥିଲା। ନାଇଟ୍ରେଟ୍ ପରୀକ୍ଷଣ ପାଇଁ, ପରିବର୍ତ୍ତିତ MS ମାଧ୍ୟମ (ବାୟୋୱାର୍ଲ୍ଡ ଉଦ୍ଭିଦ ମାଧ୍ୟମ) ରେ ଉଦ୍ଭିଦ ଚାଷ କରାଯାଇଥିଲା ଯାହା ଦୀର୍ଘ ଦିନର ପରିସ୍ଥିତିରେ ପର୍ଯ୍ୟାପ୍ତ ନାଇଟ୍ରେଟ୍ (0 କିମ୍ବା 10 mM KNO3), 0.5 mM NH4-ସକ୍ସିନେଟ୍, 1% ସୁକ୍ରୋଜ୍ ଏବଂ 1% A-ଆଗର (ସିଗ୍ମା) ସହିତ ପରିପୂରକ ଥିଲା।
pDONR221 ରେ ସନ୍ନିବେଶିତ GID1a cDNA କୁ pDONR P4-P1R-pUBQ10 ଏବଂ pDONR P2R-P3-mCherry ସହିତ pB7m34GW ସହିତ ପୁନଃମିଶ୍ରିତ କରାଯାଇଥିଲା ଯାହା ଦ୍ୱାରା pUBQ10::GID1a-mCherry ସୃଷ୍ଟି ହୋଇଥିଲା। pDONR221 ରେ ସନ୍ନିବେଶିତ IDD2 DNA କୁ p35S:IDD2-RFP ସୃଷ୍ଟି କରିବା ପାଇଁ pB7RWG266 ସହିତ ପୁନଃମିଶ୍ରିତ କରାଯାଇଥିଲା। pGID1b::2xmTQ2-GID1b ସୃଷ୍ଟି କରିବା ପାଇଁ, GID1b କୋଡିଂ କ୍ଷେତ୍ରର ଉପରମୁଣ୍ଡରେ ଏକ 3.9 kb ଖଣ୍ଡ ଏବଂ GID1b cDNA (1.3 kb) ଏବଂ ଟର୍ମିନେଟର (3.4 kb) ଥିବା ଏକ 4.7 kb ଖଣ୍ଡକୁ ପ୍ରଥମେ ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ ଟେବୁଲ 3 ରେ ଥିବା ପ୍ରାଇମର ବ୍ୟବହାର କରି ବୃଦ୍ଧି କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ତା’ପରେ ଯଥାକ୍ରମେ pDONR P4-P1R (ଥର୍ମୋ ଫିସର ସାଇଣ୍ଟିଫିକ୍) ଏବଂ pDONR P2R-P3 (ଥର୍ମୋ ଫିସର ସାଇଣ୍ଟିଫିକ୍) ରେ ସନ୍ନିବେଶ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ଶେଷରେ ଗେଟୱେ କ୍ଲୋନିଂ ବ୍ୟବହାର କରି pGreen 012567 ଟାର୍ଗେଟ ଭେକ୍ଟରରେ pDONR221 2xmTQ268 ସହିତ ପୁନଃସଂଯୁକ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା। pCUC2::LSSmOrange ସୃଷ୍ଟି କରିବା ପାଇଁ, CUC2 ପ୍ରମୋଟର କ୍ରମ (ATG ର 3229 bp ଅପଷ୍ଟ୍ରିମ୍) ଏବଂ N7 ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟର ସ୍ଥାନୀୟକରଣ ସଙ୍କେତ ସହିତ ବଡ଼ ଷ୍ଟୋକ୍ସ-ଶିଫ୍ଟେଡ୍ mOrange (LSSmOrange)69 ର କୋଡିଂ କ୍ରମ ଏବଂ NOS ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନାଲ୍ ଟର୍ମିନେଟରକୁ ଗେଟୱେ 3-ଖଣ୍ଡ ପୁନଃସଂଯୋଗ ପ୍ରଣାଳୀ (ଇନଭିଟ୍ରୋଜେନ୍) ବ୍ୟବହାର କରି pଗ୍ରୀନ୍ କାନାମାଇସିନ୍ ଟାର୍ଗେଟିଂ ଭେକ୍ଟରରେ ଏକତ୍ରିତ କରାଯାଇଥିଲା। ଉଦ୍ଭିଦ ବାଇନାରୀ ଭେକ୍ଟରକୁ ଆଗ୍ରୋବ୍ୟାକ୍ଟେରିୟମ୍ ଟ୍ୟୁମେଫାସିଏନ୍ସ୍ ଷ୍ଟ୍ରେନ୍ GV3101 ରେ ପ୍ରଚଳନ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଆଗ୍ରୋବ୍ୟାକ୍ଟେରିୟମ୍ ଇନଫ୍ଲିଟ୍ରେସନ୍ ପଦ୍ଧତି ଦ୍ୱାରା ନିକୋଟିଆନା ବେନ୍ଥାମିଆନା ପତ୍ରରେ ଏବଂ ଫୁଲ ଡିପ୍ ପଦ୍ଧତି ଦ୍ୱାରା ଆରାବିଡୋପ୍ସିସ୍ ଥାଲିଆନା କଲ-0 ରେ ପ୍ରଚଳନ କରାଯାଇଥିଲା। pUBQ10::qmRGA pUBQ10::GID1a-mCherry ଏବଂ pCLV3::mCherry-NLS qmRGA କୁ ଯଥାକ୍ରମେ ସମ୍ପୃକ୍ତ କ୍ରସର F3 ଏବଂ F1 ବଂଶଧରଙ୍କଠାରୁ ପୃଥକ କରାଯାଇଥିଲା।
ପ୍ରାୟ 1 ସେମି ଲମ୍ବା ଶୁଟ୍ ଟିପ୍ସ72 ଉପରେ RNA ଇନ ସିଟୁ ହାଇବ୍ରିଡାଇଜେସନ୍ କରାଯାଇଥିଲା, ଯାହାକୁ ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ତୁରନ୍ତ FAA ଦ୍ରବଣରେ ସ୍ଥିର କରାଯାଇଥିଲା (3.7% ଫର୍ମାଲ୍ଡାଇଡ୍, 5% ଆସେଟିକ୍ ଏସିଡ୍, 50% ଇଥାନଲ୍) ଯାହା 4 °C ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ପୂର୍ବ-ଥଣ୍ଡା କରାଯାଇଥିଲା। 2 × 15 ମିନିଟ୍ ଭାକ୍ୟୁମ୍ ଚିକିତ୍ସା ପରେ, ଫିକ୍ସେଟିଭ୍ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ନମୁନାଗୁଡ଼ିକୁ ରାତାରାତି ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା। GID1a, GID1b, GID1c, GAI, RGL1, RGL2, ଏବଂ RGL3 cDNA ଏବଂ ସେମାନଙ୍କର 3′-UTR ପାଇଁ ଆଣ୍ଟିସେନ୍ସ ପ୍ରୋବ୍ ରୋଜିଅର୍ ଏଟ୍ ଅଲ୍.73 ଦ୍ୱାରା ବର୍ଣ୍ଣିତ ପରିପୂରକ ସାରଣୀ 3 ରେ ଦର୍ଶାଯାଇଥିବା ପ୍ରାଇମର ବ୍ୟବହାର କରି ସଂଶ୍ଳେଷିତ କରାଯାଇଥିଲା। ଡିଗୋକ୍ସିଜେନିନ୍-ଲେବଲ୍ ପ୍ରୋବ୍‌ଗୁଡ଼ିକୁ ଡିଗୋକ୍ସିଜେନିନ୍ ଆଣ୍ଟିବଡି (3000-ଗୁଣ ଡାଇଲ୍ୟୁସନ୍; ରୋଚେ, କ୍ୟାଟାଲଗ୍ ନମ୍ବର: 11 093 274 910) ବ୍ୟବହାର କରି ଇମ୍ୟୁନୋ ଡିଟେକ୍ଟ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ଅଂଶଗୁଡ଼ିକୁ 5-ବ୍ରୋମୋ-4-କ୍ଲୋରୋ-3-ଇଣ୍ଡୋଲିଲ୍ ଫସଫେଟ୍ (BCIP, 250-ଗୁଣ ଡାଇଲ୍ୟୁସନ୍)/ନାଇଟ୍ରୋବ୍ଲୁ ଟେଟ୍ରାଜୋଲିୟମ୍ (NBT, 200-ଗୁଣ ଡାଇଲ୍ୟୁସନ୍) ଦ୍ରବଣ ସହିତ ରଙ୍ଗ ଦିଆଯାଇଥିଲା।