DELLA ପ୍ରୋଟିନଗୁଡ଼ିକ ସଂରକ୍ଷିତ ରହିଛିଅଭିବୃଦ୍ଧି ନିୟାମକଯାହା ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ଏବଂ ବାହ୍ୟ ସଙ୍କେତର ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ଉଦ୍ଭିଦ ବିକାଶରେ ଏକ କେନ୍ଦ୍ରୀୟ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରେ। ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନଲ୍ ନିୟାମକ ଭାବରେ, DELLA ଗୁଡ଼ିକ ସେମାନଙ୍କର GRAS ଡୋମେନ୍ ମାଧ୍ୟମରେ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ ଫ୍ୟାକ୍ଟର (TFs) ଏବଂ ହିଷ୍ଟୋନ୍ H2A ସହିତ ବାନ୍ଧି ହୁଅନ୍ତି ଏବଂ ପ୍ରମୋଟରମାନଙ୍କ ଉପରେ କାର୍ଯ୍ୟ କରିବା ପାଇଁ ନିଯୁକ୍ତ ହୁଅନ୍ତି। ସାମ୍ପ୍ରତିକ ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ DELLA ସ୍ଥିରତା ଅନୁବାଦ ପରବର୍ତ୍ତୀ ଦୁଇଟି ଯନ୍ତ୍ର ଦ୍ୱାରା ନିୟନ୍ତ୍ରିତ ହୁଏ: ଉଦ୍ଭିଦ ହରମୋନ୍ ଦ୍ୱାରା ପ୍ରେରିତ ପଲିୟୁବିକ୍ୱିଟିନେସନ୍।ଗିବେରେଲିନ୍, ଯାହା ସେମାନଙ୍କର ଦ୍ରୁତ ଅବକ୍ଷୟକୁ ନେଇଥାଏ, ଏବଂ ଛୋଟ ubiquitin-ପରି ସଂଶୋଧକ (SUMO) ସହିତ ସଂଯୋଜନ କରିଥାଏ, ଯାହା ସେମାନଙ୍କର ସଂଗ୍ରହକୁ ବୃଦ୍ଧି କରିଥାଏ। ଅଧିକନ୍ତୁ, DELLA କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଦୁଇଟି ଭିନ୍ନ ଗ୍ଲାଇକୋସିଲେସନ୍ ଯନ୍ତ୍ର ଦ୍ୱାରା ଗତିଶୀଳ ଭାବରେ ନିୟନ୍ତ୍ରିତ ହୋଇଥାଏ: O-fucosylation DELLA-TF ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟାକୁ ବୃଦ୍ଧି କରେ, ଯେତେବେଳେ O-ଲିଙ୍କ୍ଡ୍ N-acetylglucosamine (O-GlcNAc) ପରିବର୍ତ୍ତନ DELLA-TF ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟାକୁ ବାଧା ଦିଏ। ତଥାପି, DELLA ଫସଫୋରାଇଲେସନ୍ ର ଭୂମିକା ଅସ୍ପଷ୍ଟ କାରଣ ପୂର୍ବ ଅଧ୍ୟୟନଗୁଡ଼ିକ ଦ୍ୱନ୍ଦ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଫଳାଫଳ ଦେଖାଇଛି, କିଛି ପରାମର୍ଶ ଦେଉଛନ୍ତି ଯେ ଫସଫୋରାଇଲେସନ୍ DELLA ଅବକ୍ଷୟକୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରେ କିମ୍ବା ଦମନ କରେ ଏବଂ ଅନ୍ୟମାନେ ପରାମର୍ଶ ଦେଉଛନ୍ତି ଯେ ଫସଫୋରାଇଲେସନ୍ ସେମାନଙ୍କର ସ୍ଥିରତାକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରେ ନାହିଁ। ଏଠାରେ, ଆମେ GA1-3 ରିପ୍ରେସର୍ (RGA), AtDELLA ରେ ଫସଫୋରାଇଲେସନ୍ ସାଇଟ୍ ଚିହ୍ନଟ କରୁଛୁ, ଯାହା mass spectrometry ଦ୍ୱାରା Arabidopsis thaliana ରୁ ପରିଷ୍କୃତ ଏବଂ ଦେଖାଉଛୁ ଯେ PolyS ଏବଂ PolyS/T ଅଞ୍ଚଳରେ ଦୁଇଟି RGA ପେପ୍ଟାଇଡ୍ ର ଫସଫୋରାଇଲେସନ୍ H2A ବନ୍ଧନ ଏବଂ ଲକ୍ଷ୍ୟ ପ୍ରମୋଟରମାନଙ୍କ ସହିତ RGA ସମ୍ପର୍କକୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରି RGA କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ବୃଦ୍ଧି କରେ। ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଭାବରେ, ଫସଫୋରାଇଲେସନ୍ RGA-TF ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା କିମ୍ବା RGA ସ୍ଥିରତାକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରିନାହିଁ। ଆମର ଅଧ୍ୟୟନ ଏକ ଆଣବିକ ଯନ୍ତ୍ରକୁ ପ୍ରକାଶ କରେ ଯାହା ଦ୍ୱାରା ଫସଫୋରାଇଲେସନ୍ DELLA କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ପ୍ରେରଣା ଦିଏ।
ଆମର ମାସ୍ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋମେଟ୍ରିକ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ GA-ଅଭାବୀ Ga1 ପୃଷ୍ଠଭୂମିରେ RGA ରେ Pep1 ଏବଂ Pep2 ଉଭୟ ଅତ୍ୟଧିକ ଫସଫୋରିଲେଟେଡ୍ ଥିଲେ। ଏହି ଅଧ୍ୟୟନ ସହିତ, ଫସଫୋପ୍ରୋଟିଓମିକ୍ ଅଧ୍ୟୟନ ମଧ୍ୟ RGA ରେ Pep1 ଫସଫୋରିଲେସନ୍ ପ୍ରକାଶ କରିଛି, ଯଦିଓ ଏହାର ଭୂମିକା ଏପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଅଧ୍ୟୟନ କରାଯାଇ ନାହିଁ53,54,55। ବିପରୀତରେ, Pep2 ଫସଫୋରିଲେସନ୍ ପୂର୍ବରୁ ବର୍ଣ୍ଣନା କରାଯାଇନାହିଁ କାରଣ ଏହି ପେପ୍ଟାଇଡ୍ କେବଳ RGAGKG ଟ୍ରାନ୍ସଜିନ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇପାରିବ। ଯଦିଓ m1A ମ୍ୟୁଟେସନ୍, ଯାହା Pep1 ଫସଫୋରିଲେସନ୍କୁ ବନ୍ଦ କରିଦେଇଥିଲା, ପ୍ଲାଣ୍ଟାରେ RGA କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ କେବଳ ସାମାନ୍ୟ ହ୍ରାସ କରିଥିଲା, RGA କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ହ୍ରାସ କରିବାରେ m2A ସହିତ ମିଶ୍ରଣ କଲେ ଏହାର ଏକ ଯୋଗାତ୍ମକ ପ୍ରଭାବ ଥିଲା (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 6)। ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଭାବରେ, ga1 ତୁଳନାରେ GA-ବର୍ଦ୍ଧିତ ସ୍ଲାଇ1 ମ୍ୟୁଟାଣ୍ଟରେ Pep1 ଫସଫୋରିଲେସନ୍ ଯଥେଷ୍ଟ ହ୍ରାସ ପାଇଥିଲା, ଯାହା ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ GA RGA ଡିଫସଫୋରିଲେସନ୍ କୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରେ, ଏହାର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ହ୍ରାସ କରେ। GA ଯେଉଁ ପଦ୍ଧତି ଦ୍ୱାରା RGA ଫସଫୋରିଲେସନ୍ ଦମନ କରେ ତାହା ଅଧିକ ତଦନ୍ତ ଆବଶ୍ୟକ କରେ। ଗୋଟିଏ ସମ୍ଭାବନା ହେଉଛି ଏହା ଏକ ଅଜ୍ଞାତ ପ୍ରୋଟିନ୍ କାଇନେଜ୍ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ମାଧ୍ୟମରେ ହାସଲ ହୁଏ। ଯଦିଓ ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ ଚାଉଳରେ GA ଦ୍ୱାରା CK1 ପ୍ରୋଟିନ୍ କାଇନେଜ୍ EL1 ର ପ୍ରକାଶନ ହ୍ରାସ ପାଇଛି, ଆମର ଫଳାଫଳ ସୂଚାଇଛି ଯେ Arabidopsis EL1 homologue (AEL1-4) ର ଉଚ୍ଚ-କ୍ରମ ପରିବର୍ତ୍ତନ RGA ଫସଫୋରାଇଲେସନ୍ ହ୍ରାସ କରେ ନାହିଁ। ଆମର ଫଳାଫଳ ସହିତ ସହମତ ହୋଇ, Arabidopsis AEL ଓଭରପ୍ରେସପିଂ ରେଖା ଏବଂ ଏକ ael ଟ୍ରିପଲ୍ ମ୍ୟୁଟାଣ୍ଟ ବ୍ୟବହାର କରି ଏକ ସାମ୍ପ୍ରତିକ ଫସଫୋପ୍ରୋଟିଓମିକ୍ ଅଧ୍ୟୟନ ଏହି କାଇନେଜ୍ 56 ର ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ଭାବରେ କୌଣସି DELLA ପ୍ରୋଟିନ୍ ଚିହ୍ନଟ କରିନାହିଁ। ଯେତେବେଳେ ଆମେ ପାଣ୍ଡୁଲିପି ପ୍ରସ୍ତୁତ କରିଥିଲୁ, ଏହା ରିପୋର୍ଟ କରାଯାଇଥିଲା ଯେ GSK3, ଗହମରେ GSK3/SHAGGY-ପରି କାଇନେଜ୍ ଏନକୋଡିଂ କରୁଥିବା ଜିନ୍ (Triticum aestivum), DELLA (Rht-B1b) 57 କୁ ଫସଫୋରାଇଲେଟ୍ କରିପାରେ, ଯଦିଓ GSK3 ଦ୍ୱାରା Rht-B1b ର ଫସଫୋରାଇଲେସନ୍ ପ୍ଲାଣ୍ଟାରେ ନିଶ୍ଚିତ ହୋଇନାହିଁ। GSK3 ର ଉପସ୍ଥିତିରେ ଇନ ଭିଟ୍ରୋ ଏନଜାଇମାଟିକ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାଗୁଡ଼ିକ ପରେ ମାସ୍ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋମେଟ୍ରି ବିଶ୍ଳେଷଣ Rht-B1b ର DELLA ଏବଂ GRAS ଡୋମେନ୍ ମଧ୍ୟରେ ଅବସ୍ଥିତ ତିନୋଟି ଫସଫୋରାଇଲେସନ୍ ସ୍ଥାନ ପ୍ରକାଶ କରିଥିଲା (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 3)। ତିନୋଟି ଫସଫୋରାଇଲେସନ ସ୍ଥାନରେ ସେରିନ୍ ରୁ ଆଲାନାଇନ୍ ପ୍ରତିସ୍ଥାପନ ଟ୍ରାନ୍ସଜେନିକ୍ ଗହମରେ Rht-B1b କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ହ୍ରାସ ପାଇଥିଲା, ଯାହା ଆମର ଫଳାଫଳ ସହିତ ସମାନ ଯେ Pep2 RGA ରେ ଆଲାନାଇନ୍ ପ୍ରତିସ୍ଥାପନ RGA କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ହ୍ରାସ କରିଥିଲା। ତଥାପି, ଇନ ଭିଟ୍ରୋ ପ୍ରୋଟିନ୍ ଡିଗ୍ରେଡେସନ୍ ପରୀକ୍ଷା ଆହୁରି ଦର୍ଶାଇଛି ଯେ ଫସଫୋରାଇଲେସନ୍ ମଧ୍ୟ Rht-B1b57କୁ ସ୍ଥିର କରିପାରିବ। ଏହା ଆମର ଫଳାଫଳ ସହିତ ବିପରୀତ ଯାହା ଦର୍ଶାଉଛି ଯେ Pep2 RGA ରେ ଆଲାନାଇନ୍ ପ୍ରତିସ୍ଥାପନ ପ୍ଲାଣ୍ଟାରେ ଏହାର ସ୍ଥିରତାକୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରେ ନାହିଁ। ଗହମରେ GSK3 ହେଉଛି Arabidopsis 57 ରେ ବ୍ରାସିନୋଷ୍ଟେରଏଡ୍-ଅସମ୍ବେଦନଶୀଳ ପ୍ରୋଟିନ୍ 2 (BIN2) ର ଏକ ଅର୍ଥୋଲୋଗ୍। BIN2 ହେଉଛି BR ସିଗନାଲିଙ୍ଗର ଏକ ନକାରାତ୍ମକ ନିୟାମକ, ଏବଂ BR BIN2 ଡିଗ୍ରେଡେସନ୍ 58 ସୃଷ୍ଟି କରି ଏହାର ସିଗନାଲିଙ୍ଗ ପଥକୁ ସକ୍ରିୟ କରେ। ଆମେ ଦେଖାଇଲୁ ଯେ BR ଚିକିତ୍ସା Arabidopsis (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 2) ରେ RGA ସ୍ଥିରତା 59 କିମ୍ବା ଫସଫୋରାଇଲେସନ୍ ସ୍ତରକୁ ହ୍ରାସ କରେ ନାହିଁ, ଏହା ସୂଚାଇ ଦେଉଛି ଯେ RGA BIN2 ଦ୍ୱାରା ଫସଫୋରାଇଲେଟ୍ ହେବାର ସମ୍ଭାବନା କମ୍।
ସମସ୍ତ ପରିମାଣାତ୍ମକ ତଥ୍ୟକୁ ଏକ୍ସେଲ ବ୍ୟବହାର କରି ପରିସଂଖ୍ୟାନଗତ ଭାବରେ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ଛାତ୍ରଙ୍କ ଟି-ପରୀକ୍ଷା ବ୍ୟବହାର କରି ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପାର୍ଥକ୍ୟ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା। ନମୁନା ଆକାର ପୂର୍ବ-ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା ପାଇଁ କୌଣସି ପରିସଂଖ୍ୟାନ ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇ ନଥିଲା। ବିଶ୍ଳେଷଣରୁ କୌଣସି ତଥ୍ୟକୁ ବାଦ ଦିଆଯାଇ ନଥିଲା; ପରୀକ୍ଷଣକୁ ଅନିୟମିତ କରାଯାଇ ନଥିଲା; ଏବଂ ଗବେଷକମାନେ ପରୀକ୍ଷଣ ଏବଂ ଫଳାଫଳ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ ସମୟରେ ଆବଣ୍ଟନ ବିଷୟରେ ଅବଗତ ଥିଲେ। ଚିତ୍ର କିମ୍ବଦନ୍ତୀ ଏବଂ କଞ୍ଚା ତଥ୍ୟ ଫାଇଲଗୁଡ଼ିକରେ ନମୁନା ଆକାର ପ୍ରଦାନ କରାଯାଇଛି।
ପୋଷ୍ଟ ସମୟ: ଏପ୍ରିଲ-୧୫-୨୦୨୫