ଉଦ୍ଭିଦ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ସକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରୁଥିବା ନୂତନ ଉଦ୍ଭିଦ ବୃଦ୍ଧି ନିରୋଧକ ଭାବରେ ଉର୍ସା ମନୋଆମାଇଡ୍ସର ଆବିଷ୍କାର, ଚରିତ୍ରୀକରଣ ଏବଂ କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମ ଉନ୍ନତି।

Nature.com ପରିଦର୍ଶନ କରିବା ପାଇଁ ଆପଣଙ୍କୁ ଧନ୍ୟବାଦ। ଆପଣ ବ୍ୟବହାର କରୁଥିବା ବ୍ରାଉଜରର ସଂସ୍କରଣରେ ସୀମିତ CSS ସମର୍ଥନ ଅଛି। ସର୍ବୋତ୍ତମ ଫଳାଫଳ ପାଇଁ, ଆମେ ଆପଣଙ୍କୁ ଆପଣଙ୍କର ବ୍ରାଉଜରର ଏକ ନୂତନ ସଂସ୍କରଣ ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ସୁପାରିଶ କରୁଛୁ (କିମ୍ବା ଇଣ୍ଟରନେଟ୍ ଏକ୍ସପ୍ଲୋରରରେ ସୁସଙ୍ଗତତା ମୋଡ୍ ଅକ୍ଷମ କରନ୍ତୁ)। ଏହି ସମୟ ମଧ୍ୟରେ, ଜାରି ସମର୍ଥନ ସୁନିଶ୍ଚିତ କରିବା ପାଇଁ, ଆମେ ଷ୍ଟାଇଲିଂ କିମ୍ବା JavaScript ବିନା ସାଇଟ୍ ଦେଖାଉଛୁ।
ପ୍ରାକୃତିକ ଉତ୍ପାଦର ଆବିଷ୍କାର ଏବଂ ଲାଭଦାୟକ ବ୍ୟବହାର ମାନବ ଜୀବନକୁ ଉନ୍ନତ କରିବାରେ ସାହାଯ୍ୟ କରିପାରିବ। ଉଦ୍ଭିଦ ବୃଦ୍ଧି ନିରୋଧକ ରାସାୟନିକ ପଦାର୍ଥଗୁଡ଼ିକୁ ଘାସ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ପାଇଁ ଘାସନାଶକ ଭାବରେ ବ୍ୟାପକ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ। ବିଭିନ୍ନ ପ୍ରକାରର ଘାସନାଶକ ବ୍ୟବହାର କରିବାର ଆବଶ୍ୟକତା ଯୋଗୁଁ, ନୂତନ କାର୍ଯ୍ୟ ପ୍ରଣାଳୀ ସହିତ ଯୌଗିକଗୁଡ଼ିକୁ ଚିହ୍ନଟ କରିବାର ଆବଶ୍ୟକତା ରହିଛି। ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ, ଆମେ Streptomyces werraensis MK493-CF1 ରୁ ଏକ ନୂତନ N -alkoxypyrrole ଯୌଗିକ, coumamonamide ଆବିଷ୍କାର କରି ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ସଂଶ୍ଳେଷଣ ପ୍ରକ୍ରିୟା ପ୍ରତିଷ୍ଠା କରିଥିଲୁ। ଜୈବିକ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ପରୀକ୍ଷା ମାଧ୍ୟମରେ, ଆମେ ଆବିଷ୍କାର କରିଥିଲୁ ଯେ urs-monoamic acid ହେଉଛି urs-monoamide ର ଏକ କୃତ୍ରିମ ମଧ୍ୟବର୍ତ୍ତୀ ଏବଂ ଏକ ସମ୍ଭାବନା।ଉଦ୍ଭିଦ ବୃଦ୍ଧି ନିରୋଧକ। ଏହା ବ୍ୟତୀତ, ଆମେ ବିଭିନ୍ନ ଅର୍ବେନୋନିକ୍ ଏସିଡ୍ ଡେରିଭେଟିଭ୍ ବିକଶିତ କରିଛୁ, ଯେଉଁଥିରେ ଅର୍ବେନିଲୋକ୍ସି ଡେରିଭେଟିଭ୍ (UDA) ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ, ଯାହାର HeLa କୋଷଗୁଡ଼ିକର ବୃଦ୍ଧିକୁ ନକାରାତ୍ମକ ଭାବରେ ପ୍ରଭାବିତ ନକରି ଉଚ୍ଚ ତୃଣନାଶକ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଅଛି। ଆମେ ଏହା ମଧ୍ୟ ପାଇଲୁ ଯେ ଉର୍ମୋଟୋନିକ୍ ଏସିଡ୍ ଡେରିଭେଟିଭ୍ ଉଦ୍ଭିଦ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ସକୁ ବିପର୍ଯ୍ୟସ୍ତ କରିଥାଏ; ଏହା ସହିତ, KAND ଆକ୍ଟିନ ଫିଲାମେଣ୍ଟକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରେ ଏବଂ କୋଷ ମୃତ୍ୟୁକୁ ପ୍ରେରଣା ଦିଏ; ଏହି ବହୁମୁଖୀ ପ୍ରଭାବ ଜ୍ଞାତ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ ଇନହିବିଟରମାନଙ୍କ ଠାରୁ ଭିନ୍ନ ଏବଂ ଅର୍ସୋନିକ୍ ଏସିଡ୍ ପାଇଁ କାର୍ଯ୍ୟର ଏକ ନୂତନ ପଦ୍ଧତି ସୂଚାଇଥାଏ, ଯାହା ନୂତନ ତୃଣନାଶକ ବିକାଶରେ ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ସୁବିଧା ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ।
ଲାଭଦାୟକ ପ୍ରାକୃତିକ ଉତ୍ପାଦ ଏବଂ ସେମାନଙ୍କ ଡେରିଭେଟିଭ୍ସର ଆବିଷ୍କାର ଏବଂ ବ୍ୟବହାରିକ ପ୍ରୟୋଗ ମାନବ ଜୀବନର ଗୁଣବତ୍ତା ଉନ୍ନତ କରିବାର ଏକ ମାଧ୍ୟମ। ଅଣୁଜୀବ, ଉଦ୍ଭିଦ ଏବଂ କୀଟପତଙ୍ଗ ଦ୍ୱାରା ଉତ୍ପାଦିତ ଦ୍ୱିତୀୟ ମେଟାବୋଲାଇଟ୍ସ ଔଷଧ ଏବଂ କୃଷି କ୍ଷେତ୍ରରେ ପ୍ରମୁଖ ଉନ୍ନତି ଆଣିଛି। ପ୍ରାକୃତିକ ଉତ୍ପାଦରୁ ଅନେକ ଆଣ୍ଟିବାୟୋଟିକ୍ ଏବଂ ଆଣ୍ଟି-ଲ୍ୟୁକେମିଆ ଔଷଧ ବିକଶିତ ହୋଇଛି। ଏହା ସହିତ, ବିଭିନ୍ନ ପ୍ରକାରରକୀଟନାଶକ, କବକନାଶକ ଏବଂ ତୃଣନାଶକ ଏହି ପ୍ରାକୃତିକ ଉତ୍ପାଦଗୁଡ଼ିକରୁ କୃଷିରେ ବ୍ୟବହାର ପାଇଁ ନିଷ୍କାସନ କରାଯାଏ। ବିଶେଷକରି, ଆଧୁନିକ କୃଷିରେ ଫସଲ ଉତ୍ପାଦନ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଁ ଘାସ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ତୃଣନାଶକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଉପକରଣ, ଏବଂ ବିଭିନ୍ନ ପ୍ରକାରର ଯୌଗିକ ପୂର୍ବରୁ ବାଣିଜ୍ୟିକ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହେଉଛି। ଉଦ୍ଭିଦରେ ଅନେକ କୋଷୀୟ ପ୍ରକ୍ରିୟା, ଯେପରିକି ଆଲୋକ ସଂଶ୍ଳେଷଣ, ଆମିନୋ ଏସିଡ୍ ବିପାକ, କୋଷ କାନ୍ଥ ସଂଶ୍ଳେଷଣ, ମାଇଟୋସିସ୍ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ, ଫାଇଟୋହର୍ମୋନ୍ ସଙ୍କେତ, କିମ୍ବା ପ୍ରୋଟିନ୍ ସଂଶ୍ଳେଷଣ, ତୃଣନାଶକର ସାଧାରଣ ଲକ୍ଷ୍ୟ ଭାବରେ ବିବେଚନା କରାଯାଏ। ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବଲ୍ କାର୍ଯ୍ୟକୁ ବାଧା ଦେଉଥିବା ଯୌଗିକଗୁଡ଼ିକ ତୃଣନାଶକର ଏକ ସାଧାରଣ ଶ୍ରେଣୀ ଯାହା ମାଇଟୋଟିକ୍ ନିୟନ୍ତ୍ରଣକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରି ଉଦ୍ଭିଦ ବୃଦ୍ଧିକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରେ।
ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ସ ସାଇଟୋସ୍କେଲିଟନର ଉପାଦାନ ଏବଂ ୟୁକାରିଓଟିକ୍ କୋଷରେ ବ୍ୟାପକ ଭାବରେ ସଂରକ୍ଷିତ। ଟ୍ୟୁବୁଲିନ୍ ହେଟୋରୋଡାଇମରରେ α-ଟ୍ୟୁବୁଲିନ୍ ଏବଂ β-ଟ୍ୟୁବୁଲିନ୍ ଗଠନକାରୀ ରେଖୀୟ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ ପ୍ରୋଟୋଫିଲାମେଣ୍ଟ୍ସ ଥାଏ, 13 ଟି ପ୍ରୋଟୋଫିଲାମେଣ୍ଟ୍ସ ଏକ ନଳାକାର ଗଠନ ଗଠନ କରିଥାଏ। ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ସ ଉଦ୍ଭିଦ କୋଷରେ ବହୁବିଧ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରେ, ଯେଉଁଥିରେ କୋଷ ଆକାର ନିର୍ଣ୍ଣୟ, କୋଷ ବିଭାଜନ ଏବଂ କୋଷକୋଷୀୟ ପରିବହନ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ 3,4। ଉଦ୍ଭିଦ କୋଷଗୁଡ଼ିକ ଇଣ୍ଟରଫେଜ୍ ପ୍ଲାଜମା ଝିଲ୍ଲୀ ତଳେ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ସ ଥାଏ, ଏବଂ ଏହି ତଥାକଥିତ କର୍ଟିକାଲ୍ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ସ ସେଲୁଲୋଜ୍ ସିନ୍ଥେଜ୍ କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସ 4,5 ର ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ମାଧ୍ୟମରେ ସେଲୁଲୋଜ୍ ମାଇକ୍ରୋଫାଇବ୍ରିଲ୍ସର ସଂଗଠନକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରନ୍ତି ବୋଲି ମନେ କରାଯାଏ। ମୂଳ ଅଗ୍ରଭାଗର ଦ୍ରୁତ ଦୀର୍ଘତା ଅଞ୍ଚଳରେ ଉପସ୍ଥିତ ମୂଳ ଏପିଡର୍ମାଲ କୋଷଗୁଡ଼ିକର କର୍ଟିକାଲ୍ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ସ ପାର୍ଶ୍ଵବର୍ତ୍ତୀ ଭାବରେ ଅବସ୍ଥିତ, ଏବଂ ସେଲୁଲୋଜ୍ ମାଇକ୍ରୋଫାୟର୍ ଏହି ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ସକୁ ଅନୁସରଣ କରନ୍ତି ଏବଂ କୋଷ ପ୍ରସାରଣର ଦିଗକୁ ସୀମିତ କରନ୍ତି, ଯାହା ଦ୍ଵାରା ଆନିସୋଟ୍ରୋପିକ୍ କୋଷ ଦୀର୍ଘତାକୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରନ୍ତି। ତେଣୁ, ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ କାର୍ଯ୍ୟ ଉଦ୍ଭିଦ ଆକୃତି ସହିତ ଘନିଷ୍ଠ ଭାବରେ ଜଡିତ। ଟ୍ୟୁବୁଲିନକୁ ଏନକୋଡିଂ କରୁଥିବା ଜିନରେ ଆମିନୋ ଏସିଡ୍ ପ୍ରତିସ୍ଥାପନ କର୍ଟିକାଲ୍ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ ଆରେର ବିକୃତି ଏବଂ ଆରାବିଡୋପସିସ୍ 6,7 ରେ ବାମ କିମ୍ବା ଡାହାଣ ପାର୍ଶ୍ୱ ବୃଦ୍ଧିର କାରଣ ହୁଏ। ସେହିପରି, ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍-ସମ୍ବନ୍ଧିତ ପ୍ରୋଟିନ୍‌ରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ ଯାହା ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ ଗତିବିଧିକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରେ ତାହା ମଧ୍ୟ ବିକୃତ ମୂଳ ବୃଦ୍ଧି8,9,10,11,12,13 ହୋଇପାରେ। ଏହା ସହିତ, ଡିସୋପାଇରାମାଇଡ୍ ଭଳି ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍-ବିଘ୍ନକାରୀ ତୃଣନାଶକ ସହିତ ଚିକିତ୍ସା, ଯାହାକୁ ପ୍ରେଟିଲାକ୍ଲୋର୍ ମଧ୍ୟ କୁହାଯାଏ, ମଧ୍ୟ ବାମ ପାର୍ଶ୍ୱ ତୀକ୍ଷ୍ଣ ମୂଳ ବୃଦ୍ଧି14 କରାଏ। ଏହି ତଥ୍ୟ ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ ଉଦ୍ଭିଦ ବୃଦ୍ଧିର ଦିଗ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା ପାଇଁ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ କାର୍ଯ୍ୟର ସଠିକ୍ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ।
ବିଭିନ୍ନ ପ୍ରକାରର ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବ୍ୟୁଲ୍ ଇନହିବିଟର ଆବିଷ୍କୃତ ହୋଇଛି, ଏବଂ ଏହି ଔଷଧଗୁଡ଼ିକ ସାଇଟୋସ୍କେଲେଟାଲ୍ ଗବେଷଣା, କୃଷି ଏବଂ ଔଷଧରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଅବଦାନ ଦେଇଛି। ବିଶେଷକରି, ଓରିଜାଲିନ୍, ଡାଇନିଟ୍ରୋଆନିଲାଇନ୍ ଯୌଗିକ, ଡିସୋପାଇରାମାଇଡ୍, ବେଞ୍ଜାମାଇଡ୍-ସମ୍ବନ୍ଧୀୟ ଯୌଗିକ ଏବଂ ସେମାନଙ୍କର ଆନାଲଗ୍ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବଲ୍ କାର୍ଯ୍ୟକୁ ବାଧା ଦେଇପାରେ ଏବଂ ଏହାଦ୍ୱାରା ଉଦ୍ଭିଦ ବୃଦ୍ଧିକୁ ବାଧା ଦେଇପାରେ। ତେଣୁ, ଏଗୁଡ଼ିକୁ ତୃଣନାଶକ ଭାବରେ ବ୍ୟାପକ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ। ତଥାପି, ଯେହେତୁ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବଲ୍ ଉଦ୍ଭିଦ ଏବଂ ପ୍ରାଣୀ କୋଷର ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଉପାଦାନ, ଅଧିକାଂଶ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବ୍ୟୁଲ୍ ଇନହିବିଟର ଉଭୟ କୋଷ ପ୍ରକାର ପାଇଁ ସାଇଟୋଟକ୍ସିକ। ତେଣୁ, ତୃଣନାଶକ ଭାବରେ ସେମାନଙ୍କର ସ୍ୱୀକୃତ ଉପଯୋଗିତା ସତ୍ତ୍ୱେ, ବ୍ୟବହାରିକ ଉଦ୍ଦେଶ୍ୟରେ ସୀମିତ ସଂଖ୍ୟକ ଆଣ୍ଟିମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବଲ୍ ଏଜେଣ୍ଟ ବ୍ୟବହାରିକ ଉଦ୍ଦେଶ୍ୟରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ।
ଷ୍ଟ୍ରେପ୍ଟୋମାଇସେସ୍ ହେଉଛି ଷ୍ଟ୍ରେପ୍ଟୋମାଇସେସ୍ ପରିବାରର ଏକ ପ୍ରଜାତି, ଯେଉଁଥିରେ ଏରୋବିକ୍, ଗ୍ରାମ-ପଜିଟିଭ୍, ଫିଲାମେଣ୍ଟସ୍ ଜୀବାଣୁ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ ଏବଂ ଏହା ବିଭିନ୍ନ ପ୍ରକାରର ଦ୍ୱିତୀୟ ମେଟାବୋଲାଇଟ୍ ଉତ୍ପାଦନ କରିବାର କ୍ଷମତା ପାଇଁ ବହୁଳ ଭାବରେ ଜଣାଶୁଣା। ତେଣୁ, ଏହାକୁ ନୂତନ ଜୈବିକ ଭାବରେ ସକ୍ରିୟ ପ୍ରାକୃତିକ ଉତ୍ପାଦଗୁଡ଼ିକର ସବୁଠାରୁ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଉତ୍ସ ମଧ୍ୟରୁ ଗୋଟିଏ ବୋଲି ବିବେଚନା କରାଯାଏ। ବର୍ତ୍ତମାନର ଅଧ୍ୟୟନରେ, ଆମେ କୁମାମୋନାମାଇଡ୍ ନାମକ ଏକ ନୂତନ ଯୌଗିକ ଆବିଷ୍କାର କରିଛୁ, ଯାହା ଷ୍ଟ୍ରେପ୍ଟୋମାଇସେସ୍ ୱେରେନ୍ସିସ୍ MK493-CF1 ଏବଂ S. ୱେରେନ୍ସିସ୍ ISP 5486 ରୁ ପୃଥକ କରାଯାଇଥିଲା। ବର୍ଣ୍ଣାଳୀ ବିଶ୍ଳେଷଣ ଏବଂ ପୂର୍ଣ୍ଣ ବର୍ଣ୍ଣାଳୀ ବିଶ୍ଳେଷଣ ବ୍ୟବହାର କରି, କୁମାମୋନାମାଇଡ୍ ର ଗଠନକୁ ବର୍ଣ୍ଣିତ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଏହାର ଅନନ୍ୟ N-ଆଲକୋକ୍ସିପାୟାରଲ କଙ୍କାଳ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା। ସଂଶ୍ଳେଷଣ। ଉର୍ସମୋନୋମାଇଡ୍ ଏବଂ ଏହାର ଡେରିଭେଟିଭ୍ସର ଏକ ସିନ୍ଥେଟିକ୍ ମଧ୍ୟବର୍ତ୍ତୀ ଉର୍ସମୋନିକ୍ ଏସିଡ୍, ଲୋକପ୍ରିୟ ମଡେଲ୍ ଉଦ୍ଭିଦ ଆରବିଡୋପ୍ସିସ୍ ଥାଲିଆନାର ବୃଦ୍ଧି ଏବଂ ଅଙ୍କୁରୀକରଣକୁ ବାଧା ଦେବା ପାଇଁ ମିଳିଲା। ଏକ ଗଠନ-କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ସମ୍ପର୍କ ଅଧ୍ୟୟନରେ, ଆମେ ପାଇଲୁ ଯେ C9 ସହିତ ଏକ ଯୌଗିକ ଉର୍ସୋନିକ୍ ଏସିଡ୍ ରେ ପରିବର୍ତ୍ତିତ, ଯାହାକୁ ଉର୍ସୋନିକ୍ ଏସିଡ୍ (KAND) ର ନନିଲୋକ୍ସି ଡେରିଭେଟିଭ୍ କୁହାଯାଏ, ବୃଦ୍ଧି ଏବଂ ଅଙ୍କୁରୀକରଣ ଉପରେ ନିରୋଧକ ପ୍ରଭାବକୁ ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଭାବରେ ବୃଦ୍ଧି କରେ। ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଭାବରେ, ନୂତନ ଭାବରେ ଆବିଷ୍କୃତ ଉଦ୍ଭିଦ ବୃଦ୍ଧି ନିରୋଧକ ତମାଖୁ ଏବଂ ଲିଭରୱାର୍ଟର ବୃଦ୍ଧିକୁ ମଧ୍ୟ ପ୍ରଭାବିତ କରିଥିଲା ​​ଏବଂ ଜୀବାଣୁ କିମ୍ବା HeLa କୋଷ ପାଇଁ ସାଇଟୋଟକ୍ସିକ ନଥିଲା। ଅଧିକନ୍ତୁ, କିଛି ଉର୍ମୋଟୋନିକ୍ ଏସିଡ୍ ଡେରିଭେଟିଭ୍ ଏକ ବିକୃତ ମୂଳ ଫେନୋଟାଇପ୍ ପ୍ରେରଣା ଦିଏ, ଯାହା ସୂଚାଇଥାଏ ଯେ ଏହି ଡେରିଭେଟିଭ୍ ପ୍ରତ୍ୟକ୍ଷ କିମ୍ବା ପରୋକ୍ଷ ଭାବରେ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ସକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରେ। ଏହି ଧାରଣା ସହିତ ସମନ୍ୱୟ ରଖି, ଇମ୍ୟୁନୋହିଷ୍ଟୋକେମିକାଲି କିମ୍ବା ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ ପ୍ରୋଟିନ୍ ସହିତ ଲେବଲ୍ ହୋଇଥିବା ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ସ ବିଷୟରେ ଆମର ପର୍ଯ୍ୟବେକ୍ଷଣ ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ KAND ଚିକିତ୍ସା ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ସକୁ ଡିପଲିମରାଇଜ୍ କରେ। ଏହା ସହିତ, କୁମାମୋଟୋନିକ୍ ଏସିଡ୍ ଡେରିଭେଟିଭ୍ସ ସହିତ ଚିକିତ୍ସା ଆକ୍ଟିନ ମାଇକ୍ରୋଫିଲାମେଣ୍ଟଗୁଡ଼ିକୁ ବାଧାପ୍ରାପ୍ତ କରେ। ଏହିପରି, ଆମେ ଏକ ନୂତନ ଉଦ୍ଭିଦ ବୃଦ୍ଧି ନିରୋଧକ ଆବିଷ୍କାର କରିଛୁ ଯାହାର କାର୍ଯ୍ୟର ଅନନ୍ୟ ଯନ୍ତ୍ର ସାଇଟୋସ୍କେଲିଟନର ବିନାଶ ସହିତ ଜଡିତ।
ଟୋକିଓର ଶିନାଗାୱା-କୁରେ ମାଟିରୁ MK493-CF1 ଷ୍ଟ୍ରେନକୁ ପୃଥକ କରାଯାଇଥିଲା। ଷ୍ଟ୍ରେନ MK493-CF1 ଭଲ ଶାଖାଯୁକ୍ତ ଷ୍ଟ୍ରୋମାଲ ମାଇସେଲିୟମ୍ ଗଠନ କରିଥିଲା। 16S ରାଇବୋସୋମାଲ RNA ଜିନ୍ (1422 bp) ର ଆଂଶିକ କ୍ରମ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା। ଏହି ଷ୍ଟ୍ରେନ S. werraensis (NBRC 13404T = ISP 5486, 1421/1422 bp, T: ସାଧାରଣ ଷ୍ଟ୍ରେନ, 99.93%) ସହିତ ବହୁତ ସମାନ। ଏହି ଫଳାଫଳ ଉପରେ ଆଧାର କରି, ଏହା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା ଯେ ଏହି ଷ୍ଟ୍ରେନ S. werraensis ର ପ୍ରକାର ଷ୍ଟ୍ରେନ ସହିତ ଘନିଷ୍ଠ ଭାବରେ ଜଡିତ ଥିଲା। ତେଣୁ, ଆମେ ଅସ୍ଥାୟୀ ଭାବରେ ଏହି ଷ୍ଟ୍ରେନକୁ S. werraensis MK493-CF1 ନାମ ଦେଇଥିଲୁ। S. werraensis ISP 5486T ମଧ୍ୟ ସମାନ ଜୈବ ସକ୍ରିୟ ଯୌଗିକ ଉତ୍ପାଦନ କରେ। ଯେହେତୁ ଏହି ସୂକ୍ଷ୍ମଜୀବରୁ ପ୍ରାକୃତିକ ଉତ୍ପାଦ ପାଇବା ପାଇଁ ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ଗବେଷଣା ବହୁତ କମ୍ ଥିଲା, ତେଣୁ ଅଧିକ ରାସାୟନିକ ଗବେଷଣା କରାଯାଇଥିଲା। 14 ଦିନ ପାଇଁ କଠିନ-ଅବସ୍ଥା କିଣ୍ମନ ଦ୍ୱାରା ବାର୍ଲି ମାଧ୍ୟମରେ S. werraensis MK493-CF1 ଚାଷ କରିବା ପରେ, 50% EtOH ସହିତ ମଧ୍ୟମ ବାହାର କରାଯାଇଥିଲା। 59.5 ମିଗ୍ରା ଅଶୋଧିତ ସାର ପାଇବା ପାଇଁ 60 ମିଲି ନମୁନା ଶୁଖାଯାଇଥିଲା। N-methoxy-1H-pyrole-2-carboxamide (1, ନାମ coumamonamide, 36.0 mg) ଦେବା ପାଇଁ ଅଶୋଧିତ ସାରକୁ ବିପରୀତ ପର୍ଯ୍ୟାୟ HPLC ଦିଆଯାଇଥିଲା। 1 ର ମୋଟ ପରିମାଣ ଅଶୋଧିତ ସାରର ପ୍ରାୟ 60%। ତେଣୁ, ଆମେ କୁମାମୋଟୋଆମାଇଡ୍ 1 ର ଗୁଣାବଳୀ ବିଷୟରେ ବିସ୍ତୃତ ଭାବରେ ଅଧ୍ୟୟନ କରିବାକୁ ନିଷ୍ପତ୍ତି ନେଇଥିଲୁ।
କୌମାମୋନାମାଇଡ୍ 1 ହେଉଛି ଏକ ଧଳା ଆମୋରଫସ୍ ପାଉଡର ଏବଂ ଉଚ୍ଚ ରିଜୋଲ୍ୟୁସନ୍ ମାସ୍ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋମେଟ୍ରି (HRESIMS) C6H8N2O2 (ଚିତ୍ର 1) ନିଶ୍ଚିତ କରେ। ଏହି ଯୌଗିକର C2-ପ୍ରତିସ୍ଥାପିତ ପାଇରୋଲ୍ ଖଣ୍ଡ δH 6.94 (1H, t, J = 2.8, 4.8 Hz, H-4), δH 6.78 (1H, d, J = 2.5, δH 1H NMR ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରମରେ: 4.5 Hz, H-5) ଏବଂ δH 6.78 (1H, d, J = 2.5 Hz, H-6) ଦ୍ୱାରା ବର୍ଣ୍ଣିତ, ଏବଂ 13C NMR ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରମ ଚାରୋଟି sp2 କାର୍ବନ ପରମାଣୁର ଉପସ୍ଥିତି ଦର୍ଶାଏ। C2 ସ୍ଥିତିରେ ଏକ ଆମାଇଡ୍ ଗୋଷ୍ଠୀର ଉପସ୍ଥିତି δC 161.1 ରେ C-3 ପ୍ରୋଟନ୍ ରୁ ଆମାଇଡ୍ କାର୍ବୋନିଲ୍ କାର୍ବନ ସହିତ HMBC ସହସଂଯୋଗ ଦ୍ୱାରା ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା। ଏହା ସହିତ, δH 4.10 (3H, S) ଏବଂ δC 68.3 ରେ 1 H ଏବଂ 13 C NMR ଶିଖର ଅଣୁରେ N-ମିଥୋକ୍ସି ଗୋଷ୍ଠୀର ଉପସ୍ଥିତିକୁ ସୂଚିତ କରେ। ଯଦିଓ ବର୍ଦ୍ଧିତ ପାର୍ଥକ୍ୟ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋସ୍କୋପି ଏବଂ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟର ଓଭରହାଉଜର ସଂକ୍ଷିପ୍ତକରଣ (NOEDF) ଭଳି ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋସ୍କୋପିକ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ ବ୍ୟବହାର କରି ମେଥୋକ୍ସି ଗୋଷ୍ଠୀର ସଠିକ୍ ସ୍ଥିତି ଏପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇ ନଥିଲା, N-ମିଥୋକ୍ସି-1H-ପାଇରୋଲ-2-କାର୍ବୋକ୍ସାମାଇଡ୍ ପ୍ରଥମ ପ୍ରାର୍ଥୀ ଯୌଗିକ ହୋଇଥିଲା।
1 ର ସଠିକ ଗଠନ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା ପାଇଁ, ଏକ ମୋଟ ସଂଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା (ଚିତ୍ର 2a)। ବାଣିଜ୍ୟିକ ଭାବରେ ଉପଲବ୍ଧ 2-ଆମିନୋପାଇରିଡିନ୍ 2 ର m-CPBA ସହିତ ଚିକିତ୍ସା ଫଳରେ ପରିମାଣାତ୍ମକ ଉତ୍ପାଦନରେ ଅନୁରୂପ N-ଅକ୍ସାଇଡ୍ 3 ମିଳିଥିଲା। 2 ର 2-ଆମିନୋଆଜିଡେସନ୍ ପରେ, ଆବ୍ରାମୋଭିଚ୍ ଦ୍ୱାରା ବର୍ଣ୍ଣିତ ସାଇକ୍ଲୋକଣ୍ଡେନ୍ସେସନ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା 90°C ରେ ବେଞ୍ଜିନରେ କରାଯାଇଥିଲା ଯାହା ଦ୍ୱାରା ଇଚ୍ଛିତ 1-ହାଇଡ୍ରୋକ୍ସି-1H-ପାଇରୋଲ୍-2-କାର୍ବୋନିଟ୍ରାଇଲ୍ 5 ଗ୍ରାମ ପ୍ରାପ୍ତ ହୋଇଥିଲା। ଗତି 60% (ଦୁଇଟି ପର୍ଯ୍ୟାୟ)। 15,16। 4 ର ମିଥାଇଲେସନ୍ ଏବଂ ହାଇଡ୍ରୋଲିସିସ୍ ପରେ 1-ମେଥୋକ୍ସି-1H-ପାଇରୋଲ୍-2-କାର୍ବୋକ୍ସିଲିକ୍ ଏସିଡ୍ ("କ୍ୟୁମୋଟୋନିକ୍ ଏସିଡ୍" କୁହାଯାଏ, 6) ଭଲ ଉତ୍ପାଦନରେ (70%, ଦୁଇଟି ପର୍ଯ୍ୟାୟ) ପ୍ରଦାନ କରିଥିଲା। ଶେଷରେ, ଜଳୀୟ ଆମୋନିଆ ବ୍ୟବହାର କରି ଏସିଡ୍ କ୍ଲୋରାଇଡ୍ ମଧ୍ୟବର୍ତ୍ତୀ 6 ମାଧ୍ୟମରେ ଆମାଇଡେସନ୍ 98% ଉତ୍ପାଦନରେ କୁମାମୋଟୋ ଆମାଇଡ୍ 1 ଦେଇଥିଲା। ସଂଶ୍ଳେଷିତ 1 ର ସମସ୍ତ ବର୍ଣ୍ଣାଳୀ ତଥ୍ୟ ପୃଥକ 1 ସହିତ ସମାନ ଥିଲା, ତେଣୁ 1 ର ଗଠନ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା;
ଉର୍ବେନାମାଇଡ୍ ଏବଂ ଉର୍ବେନିକ୍ ଏସିଡର ଜୈବିକ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପର ସାଧାରଣ ସଂଶ୍ଳେଷଣ ଏବଂ ବିଶ୍ଳେଷଣ। (କ) କୁମାମୋଟୋ ଆମାଇଡ୍ ର ମୋଟ ସଂଶ୍ଳେଷଣ। (ଖ) ସାତ ଦିନ ପୁରୁଣା ଜଙ୍ଗଲୀ ପ୍ରକାରର ଆରାବିଡୋପ୍ସିସ୍ କଲମ୍ବିଆ (କଲ୍) ଚାରାଗୁଡ଼ିକୁ ମୁରାଶିଗେ ଏବଂ ସ୍କୁଗ୍ (MS) ପ୍ଲେଟରେ କୁମାମୋନାମାଇଡ୍ 6 କିମ୍ବା କୁମାମୋନାମାଇଡ୍ 1 ସୂଚିତ ସାନ୍ଦ୍ରତାରେ ଚାଷ କରାଯାଇଥିଲା। ସ୍କେଲ୍ ବାର୍ = 1 ସେମି।
ପ୍ରଥମେ, ଆମେ ଉର୍ବେନାମାଇଡ୍ ଏବଂ ଏହାର ମଧ୍ୟବର୍ତ୍ତୀଗୁଡ଼ିକର ଜୈବିକ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ଉଦ୍ଭିଦ ବୃଦ୍ଧି ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରିବାର କ୍ଷମତା ପାଇଁ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରିଥିଲୁ। ଆମେ MS ଆଗର ମାଧ୍ୟମରେ ଉର୍ସମୋନାମାଇଡ୍ 1 କିମ୍ବା ଉର୍ସମୋନିକ୍ ଏସିଡ୍ 6 ର ବିଭିନ୍ନ ସାନ୍ଦ୍ରତା ଯୋଡିଥିଲୁ ଏବଂ ଏହି ମାଧ୍ୟମରେ ଆରାବିଡୋପ୍ସିସ୍ ଥାଲିଆନା ଚାରାକୁ କଲଚର୍ଡ କରିଥିଲୁ। ଏହି ପରୀକ୍ଷାଗୁଡ଼ିକ ଦେଖାଇଥିଲା ଯେ 6 ର ଉଚ୍ଚ ସାନ୍ଦ୍ରତା (500 μM) ମୂଳ ବୃଦ୍ଧିକୁ ବାଧା ଦେଇଥିଲା (ଚିତ୍ର 2b)। ପରବର୍ତ୍ତୀ ସମୟରେ, ଆମେ 6 ର N1 ସ୍ଥିତିକୁ ପ୍ରତିସ୍ଥାପନ କରି ବିଭିନ୍ନ ଡେରିଭେଟିଭ୍ ସୃଷ୍ଟି କରିଥିଲୁ ଏବଂ ସେମାନଙ୍କ ଉପରେ ଗଠନ-କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ସମ୍ପର୍କ ଅଧ୍ୟୟନ କରିଥିଲୁ (ଆନାଲଗ୍ ସଂଶ୍ଳେଷଣ ପ୍ରକ୍ରିୟା ସହାୟକ ସୂଚନା (SI) ରେ ବର୍ଣ୍ଣିତ ହୋଇଛି)। ଆରାବିଡୋପ୍ସିସ୍ ଚାରାଗୁଡ଼ିକୁ 50 μM ଉର୍ସନୋକ୍ ଏସିଡ୍ ଡେରିଭେଟିଭ୍ ଧାରଣ କରିଥିବା ଏକ ମାଧ୍ୟମରେ ଚାଷ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ମୂଳ ଲମ୍ବ ମାପ କରାଯାଇଥିଲା। ଯେପରି ଏହା ଚିତ୍ରରେ ଦେଖାଯାଇଛି। ଚିତ୍ର 3a, b, ଏବଂ S1 ରେ ଦେଖାଯାଇଥିବା ପରି, କୁମାମୋ ଏସିଡର N1 ସ୍ଥିତିରେ ରେଖୀୟ ଆଲକୋକ୍ସି ଚେନ (9, 10, 11, 12, ଏବଂ 13) କିମ୍ବା ବଡ଼ ଆଲକୋକ୍ସି ଚେନ (15, 16, ଏବଂ 17) ର ଲମ୍ବ ଭିନ୍ନ ଭିନ୍ନ ଥାଏ। ଡେରିଭେଟିଭ୍ସ ମୂଳ ବୃଦ୍ଧିରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପ୍ରତିରୋଧ ଦେଖାଇଥିଲା। ଏହା ସହିତ, ଆମେ ଦେଖିଲୁ ଯେ 200 μM 10, 11, କିମ୍ବା 17 ର ପ୍ରୟୋଗ ଅଙ୍କୁର ବୃଦ୍ଧିକୁ ବାଧା ଦିଏ (ଚିତ୍ର 3c ଏବଂ S2)।
କୁମାମୋଟୋ ଆମାଇଡ୍ ଏବଂ ସମ୍ପର୍କିତ ଯୌଗିକଗୁଡ଼ିକର ଗଠନ-କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ସମ୍ପର୍କର ଅଧ୍ୟୟନ। (କ) ସାଦୃଶ୍ୟଗୁଡ଼ିକର ଗଠନ ଏବଂ ସଂଶ୍ଳେଷଣ ଯୋଜନା। (ଖ) 50 μM କୁମାମୋନାମାଇଡ୍ ଡେରିଭେଟିଭ୍ ସହିତ କିମ୍ବା ବିନା MS ମାଧ୍ୟମରେ ଚାଷ କରାଯାଇଥିବା 7-ଦିନ ପୁରୁଣା ଚାରାଗୁଡ଼ିକର ମୂଳ ଲମ୍ବ ପରିମାଣ। ତାରାକୃତି ନକଲି ଚିକିତ୍ସା ସହିତ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପାର୍ଥକ୍ୟ ସୂଚାଇଥାଏ (t ପରୀକ୍ଷା, p< ୦.୦୫)। n>୧୮. ତଥ୍ୟକୁ ମଧ୍ୟମ ± SD ଭାବରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି। nt ଅର୍ଥ "ପରୀକ୍ଷିତ ହୋଇନାହିଁ" କାରଣ ୫୦% ରୁ ଅଧିକ ବିହନ ଗଜା ହୋଇନାହିଁ। (c) ୨୦୦ μM କୁମାମୋନାମାଇଡ୍ ଏବଂ ସମ୍ବନ୍ଧିତ ଯୌଗିକ ସହିତ କିମ୍ବା ବିନା MS ମାଧ୍ୟମରେ ୭ ଦିନ ପାଇଁ ଇନକ୍ୟୁବେଟେଡ୍ କରାଯାଇଥିବା ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା ବିହନର ଅଙ୍କୁର ହାରର ପରିମାଣ। ତାରାକୃତି ନକଲି ଚିକିତ୍ସା (ଚି-ବର୍ଗ ପରୀକ୍ଷା) ସହିତ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପାର୍ଥକ୍ୟ ସୂଚାଇଥାଏ। n=୯୬।
ଆଶ୍ଚର୍ଯ୍ୟଜନକ ଭାବରେ, C9 ଅପେକ୍ଷା ଲମ୍ବା ଆଲକାଇଲ୍ ପାର୍ଶ୍ୱ ଶୃଙ୍ଖଳା ଯୋଡିବା ଦ୍ୱାରା ନିରୋଧକ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ହ୍ରାସ ପାଇଲା, ଯାହା ସୂଚାଇ ଦେଉଛି ଯେ କୁମାମୋଟୋଇକ୍ ଏସିଡ୍-ସମ୍ବନ୍ଧୀୟ ଯୌଗିକଗୁଡ଼ିକୁ ସେମାନଙ୍କର ଜୈବିକ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିବା ପାଇଁ ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଆକାରର ପାର୍ଶ୍ୱ ଶୃଙ୍ଖଳା ଆବଶ୍ୟକ।
କାରଣ ଗଠନ-କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ସମ୍ପର୍କ ବିଶ୍ଳେଷଣରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ C9 କୁ ursonic ଏସିଡରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ursonic ଏସିଡର nonyloxy ଡେରିଭେଟିଭ୍ (ଏହାପରେ KAND 11 ଭାବରେ ଉଲ୍ଲେଖ କରାଯାଇଛି) ସବୁଠାରୁ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଉଦ୍ଭିଦ ବୃଦ୍ଧି ନିରୋଧକ ଥିଲା, ଆମେ KAND 11 ର ଅଧିକ ବିସ୍ତୃତ ବର୍ଣ୍ଣନା କରିଥିଲୁ। 50 μM KAND 11 ସହିତ Arabidopsis ର ଚିକିତ୍ସା ପ୍ରାୟ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଭାବରେ ଅଙ୍କୁରିତ ହେବାକୁ ରୋକିଥିଲା, ଯେତେବେଳେ KAND 11 ର କମ୍ ସାନ୍ଦ୍ରତା (40, 30, 20, କିମ୍ବା 10 μM) ଡୋଜ୍-ନିର୍ଭରଶୀଳ ଉପାୟରେ ମୂଳ ବୃଦ୍ଧିକୁ ବାଧା ଦେଇଥିଲା (ଚିତ୍ର 4a, b)। KAND 11 ମୂଳ ମେରିଷ୍ଟେମ କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତାକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରେ କି ନାହିଁ ତାହା ପରୀକ୍ଷା କରିବା ପାଇଁ, ଆମେ ପ୍ରୋପିଡିୟମ ଆୟୋଡାଇଡ୍ (PI) ସହିତ ରଙ୍ଗିତ ମୂଳ ମେରିଷ୍ଟେମଗୁଡ଼ିକୁ ପରୀକ୍ଷା କରିଥିଲୁ ଏବଂ ମେରିଷ୍ଟେମ କ୍ଷେତ୍ର ଆକାର ମାପିଥିଲୁ। 25 μM KAND-11 ଧାରଣ କରିଥିବା ଏକ ମାଧ୍ୟମରେ ଚାଷ ହୋଇଥିବା ଚାରାଗୁଡ଼ିକର ମେରିଷ୍ଟେମର ଆକାର 151.1 ± 32.5 μm ଥିଲା, ଯେତେବେଳେ DMSO ଧାରଣ କରିଥିବା ଏକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ମାଧ୍ୟମରେ ଚାଷ ହୋଇଥିବା ଚାରାଗୁଡ଼ିକର ମେରିଷ୍ଟେମର ଆକାର 264.7 ± 30.8 μm ଥିଲା (ଚିତ୍ର 4c, d), ଯାହା ସୂଚିତ କରେ ଯେ KAND-11 କୋଷୀୟ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ପୁନଃସ୍ଥାପିତ କରେ। ପ୍ରସାରଣ। ମୂଳ ମେରିଷ୍ଟେମ। ଏହା ସହିତ ସମନ୍ୱୟ ରଖି, KAND 11 ଚିକିତ୍ସା ମୂଳ ମେରିଷ୍ଟେମରେ କୋଷ ବିଭାଜନ ମାର୍କର CDKB2;1p::CDKB2;1-GUS ସିଗନାଲର ପରିମାଣ ହ୍ରାସ କରିଥିଲା ​​(ଚିତ୍ର 4e) 17। ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ସୂଚିତ କରେ ଯେ KAND 11 କୋଷ ପ୍ରସାର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ହ୍ରାସ କରି ମୂଳ ବୃଦ୍ଧିକୁ ବାଧା ଦିଏ।
ବୃଦ୍ଧି ଉପରେ ଅର୍ବେନୋନିକ୍ ଏସିଡ୍ ଡେରିଭେଟିଭ୍ସ (ଅର୍ବେନିଲୋକ୍ସି ଡେରିଭେଟିଭ୍ସ) ର ନିରୋଧକ ପ୍ରଭାବର ବିଶ୍ଳେଷଣ। (କ) KAND 11 ର ସୂଚିତ ସାନ୍ଦ୍ରତା ସହିତ MS ପ୍ଲେଟରେ ଚାଷ କରାଯାଇଥିବା 7 ଦିନ ପୁରୁଣା ଜଙ୍ଗଲୀ ପ୍ରକାରର କୋଲ୍ ଚାରା। ସ୍କେଲ୍ ବାର୍ = 1 ସେମି। (ଖ) ମୂଳ ଲମ୍ବ ପରିମାଣ। ଅକ୍ଷରଗୁଡ଼ିକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପାର୍ଥକ୍ୟ ସୂଚାଇଥାଏ (ଟୁକି HSD ପରୀକ୍ଷା, p< ୦.୦୫)। n>୧୬. ତଥ୍ୟକୁ ମଧ୍ୟମ ± SD ଭାବରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି। (c) 25 μM KAND ସହିତ କିମ୍ବା ବିନା MS ପ୍ଲେଟରେ ବଢ଼ିଥିବା ପ୍ରୋପିଡିୟମ ଆୟୋଡାଇଡ-ସ୍ଟେଣ୍ଡଡ୍ ୱାଇଲ୍ଡ-ଟାଇପ୍ କଲ୍ ମୂଳର କନଫୋକାଲ୍ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପି। ୧୧. ଧଳା ବନ୍ଧନୀ ମୂଳ ମେରିଷ୍ଟେମକୁ ସୂଚିତ କରେ। ସ୍କେଲ୍ ବାର୍ = ୧୦୦ μm। (d) ମୂଳ ମେରିଷ୍ଟେମ ଆକାରର ପରିମାଣ (n = ୧୦ ରୁ ୧୧)। ଟି-ପରୀକ୍ଷଣ (p) ବ୍ୟବହାର କରି ପରିସଂଖ୍ୟାନଗତ ପାର୍ଥକ୍ୟ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା।< 0.05)। ବାର୍ ଗୁଡିକ ହାରାହାରି ମେରିଷ୍ଟେମ୍ ଆକାରକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରନ୍ତି। (e) CDKB2 ଗଠନ ଧାରଣ କରିଥିବା ମୂଳ ମେରିଷ୍ଟେମର ଡିଫରେନ୍ସିଆଲ୍ ଇଣ୍ଟରଫେନ୍ସ କଣ୍ଟ୍ରାଷ୍ଟ (DIC) ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପି; 1pro: CDKB2; 25 µM KAND ପରୀକ୍ଷା ସହିତ କିମ୍ବା ବିନା MS ପ୍ଲେଟରେ ଚାଷ କରାଯାଇଥିବା 5-ଦିନ ପୁରୁଣା ଚାରା ଉପରେ 1-GUS ରଙ୍ଗ ଏବଂ ରଙ୍ଗ ଦିଆଯାଇଛି।
KAND 11 ର ଫାଇଟୋଟକ୍ସିସିଟିକୁ ଆଉ ଏକ ଦ୍ୱିକୋଟି ଉଦ୍ଭିଦ, ତମାଖୁ (ନିକୋଟିଆନା ଟାବାକମ୍) ଏବଂ ଏକ ପ୍ରମୁଖ ଭୂମି ଉଦ୍ଭିଦ ମଡେଲ୍ ଜୀବ, ଲିଭରୱର୍ଟ (ମାର୍ଚାଣ୍ଟିଆ ପଲିମୋର୍ଫା) ବ୍ୟବହାର କରି ପରୀକ୍ଷିତ କରାଯାଇଥିଲା। ଆରବିଡୋପ୍ସିସ୍ ପରି, 25 μM KAND 11 ଧାରଣ କରି ମଧ୍ୟମରେ ଚାଷ କରାଯାଇଥିବା ତମାଖୁ SR-1 ଚାରାଗୁଡ଼ିକ ଛୋଟ ମୂଳ ଉତ୍ପାଦନ କରିଥିଲା ​​(ଚିତ୍ର 5a)। ଏହା ସହିତ, 48 ଟି ବିହନରୁ 40 ଟି 200 μM KAND 11 ଧାରଣ କରି ପ୍ଲେଟରେ ଅଙ୍କୁରିତ ହୋଇଥିଲା, ଯେତେବେଳେ ସମସ୍ତ 48 ଟି ବିହନ ମକ୍-ଟ୍ରିଟେଡ୍ ମିଡିଆରେ ଅଙ୍କୁରିତ ହୋଇଥିଲା, ଯାହା ସୂଚାଇଥାଏ ଯେ KAND ର ଅଧିକ ସାନ୍ଦ୍ରତା ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଥିଲା (p< 0.05; ଚି ଟେଷ୍ଟ -ସ୍କୋୟାର) ତମାଖୁର ଅଙ୍କୁରୀକରଣକୁ ବାଧା ଦେଇଥିଲା। (ଚିତ୍ର 5b)। ଏହା ସହିତ, ଲିଭରୱାର୍ଟରେ ଜୀବାଣୁ ବୃଦ୍ଧିକୁ ବାଧା ଦେଉଥିବା KAND 11 ର ସାନ୍ଦ୍ରତା Arabidopsis (ଚିତ୍ର 5c) ରେ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ସାନ୍ଦ୍ରତା ସହିତ ସମାନ ଥିଲା। ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ସୂଚାଇଥାଏ ଯେ KAND 11 ବିଭିନ୍ନ ପ୍ରକାରର ଉଦ୍ଭିଦର ବୃଦ୍ଧିକୁ ବାଧା ଦେଇପାରେ। ତା'ପରେ ଆମେ ଉଚ୍ଚ ପ୍ରାଣୀ ଏବଂ ଜୀବାଣୁ କୋଷର ପ୍ରତିନିଧି ଭାବରେ ଅନ୍ୟ ଜୀବ, ଯଥା ମାନବ HeLa କୋଷ ଏବଂ Escherichia coli ଷ୍ଟ୍ରେନ୍ DH5α ରେ ଭାଲୁ ମୋନୋଆମାଇଡ୍-ସମ୍ବନ୍ଧୀୟ ଯୌଗିକଗୁଡ଼ିକର ସମ୍ଭାବ୍ୟ ସାଇଟୋଟକ୍ସିସିଟି ତଦନ୍ତ କରିଥିଲୁ। କୋଷ ପ୍ରସାର ପରୀକ୍ଷାର ଏକ କ୍ରମରେ, ଆମେ ଦେଖିଲୁ ଯେ 100 μM ସାନ୍ଦ୍ରତାରେ coumamonamide 1, coumamonamidic acid 6, ଏବଂ KAND 11 HeLa କିମ୍ବା E. coli କୋଷର ବୃଦ୍ଧିକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରିନଥିଲେ (ଚିତ୍ର 5d,e)।
ଅଣ-ଆରବିଡୋପ୍ସିସ୍ ଜୀବଜଗତରେ KAND 11 ର ବୃଦ୍ଧି ପ୍ରତିରୋଧ। (କ) ଦୁଇ ସପ୍ତାହ ପୁରୁଣା ବନ୍ୟ-ପ୍ରକାର SR-1 ତମାଖୁ ଚାରା 25 μM KAND 11 ଧାରଣ କରିଥିବା ଭୂଲମ୍ବ ଭାବରେ ଅବସ୍ଥିତ MS ପ୍ଲେଟରେ ଚାଷ କରାଯାଇଥିଲା। (ଖ) ଦୁଇ ସପ୍ତାହ ପୁରୁଣା ବନ୍ୟ-ପ୍ରକାର SR-1 ତମାଖୁ ଚାରା 200 μM KAND 11 ଧାରଣ କରିଥିବା ଭୂସମାନ୍ତର ଭାବରେ ଅବସ୍ଥିତ MS ପ୍ଲେଟରେ ଚାଷ କରାଯାଇଥିଲା। (ଗ) KAND 11 ର ସୂଚିତ ସାନ୍ଦ୍ରତା ସହିତ ଗାମ୍ବର୍ଗ B5 ପ୍ଲେଟରେ ଚାଷ କରାଯାଇଥିବା ଦୁଇ ସପ୍ତାହ ପୁରୁଣା ବନ୍ୟ-ପ୍ରକାର Tak-1 ଲିଭରୱାର୍ଟ କଡି। ଲାଲ ତୀର ଦୁଇ ସପ୍ତାହ ଇନକ୍ୟୁବେସନ୍ ଅବଧି ମଧ୍ୟରେ ବୃଦ୍ଧି ବନ୍ଦ କରିଥିବା ସ୍ପୋରଗୁଡ଼ିକୁ ସୂଚିତ କରେ। (ଘ) HeLa କୋଷଗୁଡ଼ିକର କୋଷ ପ୍ରସାର ପରୀକ୍ଷା। କୋଷ ଗଣନା କିଟ୍ 8 (ଡୋଜିଣ୍ଡୋ) ବ୍ୟବହାର କରି ସ୍ଥିର ସମୟ ବ୍ୟବଧାନରେ କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମ କୋଷଗୁଡ଼ିକର ସଂଖ୍ୟା ମାପ କରାଯାଇଥିଲା। ଏକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଭାବରେ, HeLa କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ 5 μg/ml ଆକ୍ଟିନୋମାଇସିନ୍ D (Act D) ସହିତ ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିଲା, ଯାହା RNA ପଲିମରେଜ୍ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ କୁ ବାଧା ଦିଏ ଏବଂ କୋଷ ମୃତ୍ୟୁର କାରଣ ହୁଏ। ବିଶ୍ଳେଷଣଗୁଡ଼ିକ ତ୍ରିପ୍ରତିଲିପିରେ କରାଯାଇଥିଲା। (ଙ) E. କୋଲି କୋଷ ପ୍ରସାର ପରୀକ୍ଷା। OD600 ମାପ କରି E. coli ବୃଦ୍ଧି ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଭାବରେ, କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ 50 μg/ml ଆମ୍ପିସିଲିନ୍ (Amp) ସହିତ ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିଲା, ଯାହା ଜୀବାଣୁ କୋଷ କାନ୍ଥ ସଂଶ୍ଳେଷଣକୁ ବାଧା ଦିଏ। ବିଶ୍ଳେଷଣଗୁଡ଼ିକ ତିନିପ୍ରତିଲିପିରେ କରାଯାଇଥିଲା।
ୟୁରାମାଇଡ୍-ସମ୍ବନ୍ଧିତ ଯୌଗିକଗୁଡ଼ିକ ଦ୍ୱାରା ହେଉଥିବା ସାଇଟୋଟକ୍ସିସିଟିର କାର୍ଯ୍ୟର କ୍ରିୟାକୁ ବୁଝାଇବା ପାଇଁ, ଆମେ ମଧ୍ୟମ ନିରୋଧୀ ପ୍ରଭାବ ସହିତ ୟୁରବେନିକ୍ ଏସିଡ୍ ଡେରିଭେଟିଭ୍ସକୁ ପୁନଃବିଶ୍ଳେଷଣ କରିଥିଲୁ। ଯେପରି ଏହା ଚିତ୍ରରେ ଦେଖାଯାଇଛି। ଚିତ୍ର 2b, 6a ରେ ଦେଖାଯାଇଛି, ଉରମୋଟୋନିକ୍ ଏସିଡ୍ 6 ର ଉଚ୍ଚ ସାନ୍ଦ୍ରତା (200 μM) ଥିବା ଆଗର ପ୍ଲେଟରେ ଚାଷ ହୋଇଥିବା ଚାରାଗୁଡ଼ିକ ଛୋଟ ଏବଂ ବାମ-ବକ୍ର ମୂଳ (θ = – 23.7 ± 6.1) ଉତ୍ପାଦନ କରିଥିଲା, ଯେତେବେଳେ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ମାଧ୍ୟମରେ ଚାଷ ହୋଇଥିବା ଚାରାଗୁଡ଼ିକ ପ୍ରାୟ ସିଧା ମୂଳ (θ = – 3.8 ± 7.1) ଉତ୍ପାଦନ କରିଥିଲା। ଏହି ବୈଶିଷ୍ଟ୍ୟପୂର୍ଣ୍ଣ ତୀକ୍ଷ୍ଣ ବୃଦ୍ଧି କର୍ଟିକାଲ୍ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବଲ୍ସର ଅକ୍ଷମତାରୁ ପରିଣାମ ସ୍ୱରୂପ ଜଣାଯାଏ14,18। ଏହି ସନ୍ଧାନ ସହିତ ସଂଗତ, ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବଲ୍-ଅସ୍ଥିରକାରୀ ଔଷଧ ଡିସୋପାଇରାମାଇଡ୍ ଏବଂ ଓରିଜାଲିନ୍ ଆମର ବୃଦ୍ଧି ପରିସ୍ଥିତିରେ ସମାନ ମୂଳ ଢଳିବା ପ୍ରେରଣା ଦେଇଥିଲା (ଚିତ୍ର 2b, 6a)। ସେହି ସମୟରେ, ଆମେ ଉରମୋଟୋନିକ୍ ଏସିଡ୍ ଡେରିଭେଟିଭ୍ସ ପରୀକ୍ଷା କରିଥିଲୁ ଏବଂ ସେମାନଙ୍କ ମଧ୍ୟରୁ ଅନେକଙ୍କୁ ଚୟନ କରିଥିଲୁ ଯାହା ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ସାନ୍ଦ୍ରତାରେ, ତୀକ୍ଷ୍ଣ ମୂଳ ବୃଦ୍ଧିକୁ ପ୍ରେରଣା ଦେଇଥିଲା। ଯୌଗିକ 8, 9, ଏବଂ 15 ଯଥାକ୍ରମେ 75 μM, 50 μM, ଏବଂ 40 μM ରେ ମୂଳ ବୃଦ୍ଧିର ଦିଗ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରିଥିଲେ, ଯାହା ସୂଚାଇଥିଲା ଯେ ଏହି ଯୌଗିକଗୁଡ଼ିକ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଭାବରେ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ସକୁ ଅସ୍ଥିର କରିପାରିବ (ଚିତ୍ର 2b, 6a)। ଆମେ ସବୁଠାରୁ ଶକ୍ତିଶାଳୀ ursolic acid ଡେରିଭେଟିଭ୍, KAND 11 କୁ ମଧ୍ୟ କମ ସାନ୍ଦ୍ରତା (15 μM) ରେ ପରୀକ୍ଷା କରି ଦେଖିଲୁ ଯେ KAND 11 ର ପ୍ରୟୋଗ ମୂଳ ବୃଦ୍ଧିକୁ ବାଧା ଦେଇଥିଲା ଏବଂ ମୂଳ ବୃଦ୍ଧିର ଦିଗ ଅସମାନ ଥିଲା, ଯଦିଓ ସେଗୁଡ଼ିକ ବାମ ପଟକୁ ଢଳା ଯାଇଥିଲା (ଚିତ୍ର C3)। କାରଣ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍-ଅସ୍ଥିରକାରୀ ଔଷଧର ଅଧିକ ସାନ୍ଦ୍ରତା କେତେକ ସମୟରେ ମୂଳ ଢଳାଇବା ପରିବର୍ତ୍ତେ ଉଦ୍ଭିଦ ବୃଦ୍ଧିକୁ ବାଧା ଦେଉଥିଲା, ଆମେ ପରବର୍ତ୍ତୀ ସମୟରେ ମୂଳ ଏପିଡର୍ମାଲ କୋଷଗୁଡ଼ିକରେ କର୍ଟିକାଲ୍ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ସକୁ ପର୍ଯ୍ୟବେକ୍ଷଣ କରି KAND 11 ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ସକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରିବାର ସମ୍ଭାବନାକୁ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରିଥିଲୁ। 25 μM KAND 11 ସହିତ ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା ଚାରା ମୂଳର ଏପିଡର୍ମାଲ କୋଷଗୁଡ଼ିକରେ ଆଣ୍ଟି-β-ଟ୍ୟୁବୁଲିନ୍ ଆଣ୍ଟିବଡି ବ୍ୟବହାର କରି ଇମ୍ୟୁନୋହିଷ୍ଟୋକେମିଷ୍ଟ୍ରି ଦେଖାଇଲା ଯେ ଦୀର୍ଘତା ଜୋନରେ ଏପିଡର୍ମାଲ କୋଷଗୁଡ଼ିକରେ ପ୍ରାୟ ସମସ୍ତ କର୍ଟିକାଲ୍ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ସ ଅଦୃଶ୍ୟ ହୋଇଗଲା (ଚିତ୍ର 6b)। ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ସୂଚିତ କରେ ଯେ କୁମାମୋଟୋନିକ୍ ଏସିଡ୍ ଏବଂ ଏହାର ଡେରିଭେଟିଭ୍ସ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ସ ଉପରେ ପ୍ରତ୍ୟକ୍ଷ କିମ୍ବା ପରୋକ୍ଷ ଭାବରେ କାର୍ଯ୍ୟ କରି ସେମାନଙ୍କୁ ବିପର୍ଯ୍ୟସ୍ତ କରନ୍ତି ଏବଂ ଏହି ଯୌଗିକଗୁଡ଼ିକ ନୂତନ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ ନିରୋଧକ।
ଅରସୋନିକ୍ ଏସିଡ୍ ଏବଂ ଏହାର ଡେରିଭେଟିଭ୍ସ ଆରାବିଡୋପ୍ସିସ୍ ଥାଲିଆନାରେ କର୍ଟିକାଲ୍ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ସକୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରନ୍ତି। (କ) ସୂଚିତ ସାନ୍ଦ୍ରତାରେ ବିଭିନ୍ନ ଉରମୋଟୋନିକ୍ ଏସିଡ୍ ଡେରିଭେଟିଭ୍ସର ଉପସ୍ଥିତିରେ ମୂଳ ଝୁଙ୍କା କୋଣ ମାପ କରାଯାଏ। ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ସକୁ ବାଧା ଦେବା ପାଇଁ ଜଣାଶୁଣା ଦୁଇଟି ଯୌଗିକର ପ୍ରଭାବ: ଡିସୋପାଇରାମାଇଡ୍ ଏବଂ ଓରିଜାଲିନ୍ ମଧ୍ୟ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। ଇନସେଟ୍ ମୂଳ ବୃଦ୍ଧି କୋଣ ମାପ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ମାନକକୁ ଦର୍ଶାଏ। ତାରାକୃତିଗୁଡ଼ିକ ନକଲି ଚିକିତ୍ସା ସହିତ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପାର୍ଥକ୍ୟ ସୂଚାଇଥାଏ (t ପରୀକ୍ଷା, p)< ୦.୦୫)। n>19. ସ୍କେଲ୍ ବାର୍ = 1 ସେମି। (ଖ) ଦୀର୍ଘତା ଜୋନ୍‌ରେ ଏପିଡର୍ମାଲ କୋଷଗୁଡ଼ିକରେ କର୍ଟିକାଲ୍ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ସ। 25 μM KAND 11 ସହିତ କିମ୍ବା ବିନା MS ପ୍ଲେଟ୍‌ରେ ବଢ଼ିଥିବା ଜଙ୍ଗଲୀ-ପ୍ରକାରର ଆରାବିଡୋପ୍ସିସ୍ କୋଲ୍ ମୂଳରେ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ସକୁ β-ଟ୍ୟୁବୁଲିନ୍ ପ୍ରାଥମିକ ଆଣ୍ଟିବଡି ଏବଂ ଆଲେକ୍ସା ଫ୍ଲୋର-କଞ୍ଜୁଗେଟେଡ୍ ସେକେଣ୍ଡାରୀ ଆଣ୍ଟିବଡି ବ୍ୟବହାର କରି ଇମ୍ୟୁନୋହିଷ୍ଟୋକେମିକାଲ୍ ଷ୍ଟେନିଂ ଦ୍ୱାରା ଦୃଶ୍ୟମାନ କରାଯାଇଥିଲା। ସ୍କେଲ୍ ବାର୍ = 10 μm। (ଗ) ମୂଳ ମେରିଷ୍ଟେମ୍‌ରେ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ସର ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ସକୁ ଇମ୍ୟୁନୋହିଷ୍ଟୋକେମିକାଲ୍ ଷ୍ଟେନିଂ ବ୍ୟବହାର କରି ଦୃଶ୍ୟମାନ କରାଯାଇଥିଲା। ପ୍ରୋଫେଜ୍ ଜୋନ୍, ସ୍ପିଣ୍ଡଲ୍ସ ଏବଂ ଫ୍ରାଗ୍ମୋପ୍ଲାଷ୍ଟ ସମେତ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ ଗଠନଗୁଡ଼ିକୁ କନ୍ଫୋକାଲ୍ ପ୍ରତିଛବିରୁ ଗଣନା କରାଯାଇଥିଲା। ତୀରଗୁଡ଼ିକ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ ଗଠନଗୁଡ଼ିକୁ ସୂଚିତ କରେ। ତାରାକୃତିଗୁଡ଼ିକ ଶାମ୍ ଚିକିତ୍ସା ସହିତ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପାର୍ଥକ୍ୟ ସୂଚିତ କରେ (t ପରୀକ୍ଷା, p)< ୦.୦୫)। n>୯. ସ୍କେଲ୍ ବାର୍ = ୫୦ µm।
ଯଦିଓ ଉର୍ସାରେ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ କାର୍ଯ୍ୟକୁ ବାଧା ଦେବାର କ୍ଷମତା ଅଛି, ଏହାର କାର୍ଯ୍ୟ ପ୍ରଣାଳୀ ସାଧାରଣ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ ଡିପଲିମରାଇଜିଂ ଏଜେଣ୍ଟମାନଙ୍କଠାରୁ ଭିନ୍ନ ହେବ ବୋଲି ଆଶା କରାଯାଉଛି। ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, ଡିସୋପାଇରାମାଇଡ୍ ଏବଂ ଓରିଜାଲିନ୍ ଭଳି ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ ଡିପଲିମରାଇଜିଂ ଏଜେଣ୍ଟଗୁଡ଼ିକର ଅଧିକ ସାନ୍ଦ୍ରତା ଏପିଡର୍ମାଲ କୋଷଗୁଡ଼ିକର ଆନିସୋଟ୍ରୋପିକ୍ ବିସ୍ତାରକୁ ପ୍ରେରଣା ଦିଏ, ଯେତେବେଳେ KAND 11 ତାହା କରେ ନାହିଁ। ଏହା ବ୍ୟତୀତ, KAND 11 ଏବଂ ଡିସୋପାଇରାମାଇଡ୍ ର ମିଳିତ ପ୍ରୟୋଗ ଫଳରେ ଏକ ମିଳିତ ଡିସୋପାଇରାମାଇଡ୍-ପ୍ରେରିତ ମୂଳ ବୃଦ୍ଧି ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଏବଂ KAND 11-ପ୍ରେରିତ ବୃଦ୍ଧି ନିରୋଧ ପରିଲକ୍ଷିତ ହୋଇଥିଲା (ଚିତ୍ର S4)। ଆମେ KAND 11 ପ୍ରତି ଅତିସମ୍ବେଦନଶୀଳ ଡିସୋପାଇରାମାଇଡ୍ 1-1 (phs1-1) ମ୍ୟୁଟାଣ୍ଟର ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ମଧ୍ୟ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରିଥିଲୁ। phs1-1 ରେ ଏକ ଅଣ-କାନୋନିକାଲ୍ ଟ୍ୟୁବୁଲିନ୍ କାଇନେଜ୍ ପଏଣ୍ଟ ମ୍ୟୁଟେସନ୍ ଅଛି ଏବଂ ଡିସୋପାଇରାମାଇଡ୍ 9,20 ସହିତ ଚିକିତ୍ସା କଲେ ଛୋଟ ମୂଳ ଉତ୍ପାଦନ କରେ। KAND 11 ଧାରଣ କରୁଥିବା ଅଗର ମାଧ୍ୟମରେ ଚାଷ କରାଯାଇଥିବା phs1-1 ମ୍ୟୁଟାଣ୍ଟ ଚାରାଗୁଡ଼ିକର ଡିସୋପାଇରାମାଇଡ୍ (ଚିତ୍ର S5) ଉପରେ ଚାଷ କରାଯାଇଥିବା ପରି ଛୋଟ ମୂଳ ଥିଲା।
ଏହା ସହିତ, ଆମେ KAND 11 ସହିତ ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା ଚାରାଗୁଡ଼ିକର ମୂଳ ମେରିଷ୍ଟେମରେ ପ୍ରୋଫେଜ୍ ଜୋନ୍, ସ୍ପିଣ୍ଡଲ୍ସ ଏବଂ ଫ୍ରାଗ୍ମୋପ୍ଲାଷ୍ଟ ଭଳି ମାଇଟୋଟିକ୍ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ ଗଠନ ଦେଖିଲୁ। CDKB2;1p::CDKB2;1-GUS ପାଇଁ ପର୍ଯ୍ୟବେକ୍ଷଣ ସହିତ ସମନ୍ୱୟ ରଖି, ମାଇଟୋଟିକ୍ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ ସଂଖ୍ୟାରେ ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ହ୍ରାସ ପରିଲକ୍ଷିତ ହୋଇଥିଲା (ଚିତ୍ର .6c)।
KAND 11 ର ସାଇଟୋଟକ୍ସିସିଟିକୁ ସବସେଲ୍ୟୁଲାର ରିଜୋଲ୍ୟୁସନରେ ଚିହ୍ନିତ କରିବା ପାଇଁ, ଆମେ KAND 11 ସହିତ ତମାଖୁ BY-2 ସସପେନସନ କୋଷଗୁଡ଼ିକର ଚିକିତ୍ସା କରିଥିଲୁ ଏବଂ ସେମାନଙ୍କର ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପର୍ଯ୍ୟବେକ୍ଷଣ କରିଥିଲୁ। ଆମେ ପ୍ରଥମେ KAND 11 କୁ TagRFP-TUA6 ପ୍ରକାଶ କରୁଥିବା BY-2 କୋଷରେ ଯୋଡିଥିଲୁ, ଯାହା ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ ଭାବରେ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ସକୁ ଲେବଲ୍ କରିଥାଏ, କର୍ଟିକାଲ୍ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ସ ଉପରେ KAND 11 ର ପ୍ରଭାବ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରିବା ପାଇଁ। ପ୍ରତିଛବି ବିଶ୍ଳେଷଣ ବ୍ୟବହାର କରି କର୍ଟିକାଲ୍ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ ଘନତା ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା, ଯାହା ସାଇଟୋପ୍ଲାଜମିକ୍ ପିକ୍ସେଲ ମଧ୍ୟରେ ସାଇଟୋସ୍କେଲେଟାଲ୍ ପିକ୍ସେଲର ପ୍ରତିଶତକୁ ପରିମାଣିତ କରିଥିଲା। ପରୀକ୍ଷା ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ଦର୍ଶାଇଥିଲା ଯେ 1 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ 50 μM କିମ୍ବା 100 μM KAND 11 ସହିତ ଚିକିତ୍ସା ପରେ, ଘନତା ଯଥାକ୍ରମେ 0.94 ± 0.74% କିମ୍ବା 0.23 ± 0.28% କୁ ହ୍ରାସ ପାଇଥିଲା, ଯେତେବେଳେ DMSO ସହିତ ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା କୋଷଗୁଡ଼ିକର ଘନତା 1.61 ± 0.34% (ଚିତ୍ର 7a) ଥିଲା। ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ Arabidopsis ରେ ଥିବା ପର୍ଯ୍ୟବେକ୍ଷଣ ସହିତ ସମାନ ଯେ KAND 11 ଚିକିତ୍ସା କର୍ଟିକାଲ୍ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ସର ଡିପଲିମରାଇଜେସନ୍ ପ୍ରେରଣା ଦିଏ (ଚିତ୍ର 6b)। ଆମେ KAND 11 ର ସମାନ ସାନ୍ଦ୍ରତା ସହିତ ଚିକିତ୍ସା ପରେ GFP-ABD-ଲେବଲ୍ ଆକ୍ଟିନ ଫିଲାମେଣ୍ଟ ସହିତ BY-2 ରେଖା ମଧ୍ୟ ପରୀକ୍ଷା କରିଥିଲୁ ଏବଂ ଦେଖିଥିଲୁ ଯେ KAND 11 ଚିକିତ୍ସା ଆକ୍ଟିନ ଫିଲାମେଣ୍ଟକୁ ବାଧା ଦେଇଥିଲା। 1 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ 50 μM କିମ୍ବା 100 μM KAND 11 ସହିତ ଚିକିତ୍ସା ଆକ୍ଟିନ ଫିଲାମେଣ୍ଟ ଘନତାକୁ ଯଥାକ୍ରମେ 1.20 ± 0.62% କିମ୍ବା 0.61 ± 0.26% କୁ ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଭାବରେ ହ୍ରାସ କରିଥିଲା, ଯେତେବେଳେ DMSO-ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା କୋଷଗୁଡିକରେ ଘନତା 1.69 ± 0.51% ଥିଲା (ଚିତ୍ର 2)। 7b)। ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ପ୍ରୋପିଜାମାଇଡ୍ ର ପ୍ରଭାବ ସହିତ ବିପରୀତ, ଯାହା ଆକ୍ଟିନ ଫିଲାମେଣ୍ଟକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରେ ନାହିଁ, ଏବଂ ଲାଟ୍ରନକ୍ୟୁଲିନ୍ B, ଏକ ଆକ୍ଟିନ ଡିପଲିମରାଇଜର ଯାହା ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ସକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରେ ନାହିଁ (SI ଚିତ୍ର S6)। ଏହା ସହିତ, coumamonamide 1, coumamonamide acid 6, କିମ୍ବା KAND 11 ସହିତ ଚିକିତ୍ସା HeLa କୋଷଗୁଡ଼ିକରେ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ସକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରିନଥିଲା (SI ଚିତ୍ର S7)। ତେଣୁ, KAND 11 ର କାର୍ଯ୍ୟ ପ୍ରଣାଳୀ ଜଣାଶୁଣା ସାଇଟୋସ୍କେଲିଟନ୍ ବିଭ୍ରାନ୍ତକାରୀଙ୍କଠାରୁ ଭିନ୍ନ ବୋଲି ବିଶ୍ୱାସ କରାଯାଏ। ଏହା ବ୍ୟତୀତ, KAND 11 ସହିତ ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା BY-2 କୋଷଗୁଡ଼ିକର ଆମର ଅଣୁବୀକ୍ଷଣିକ ପର୍ଯ୍ୟବେକ୍ଷଣ KAND 11 ଚିକିତ୍ସା ସମୟରେ କୋଷ ମୃତ୍ୟୁର ଆରମ୍ଭ ପ୍ରକାଶ କରିଥିଲା ​​ଏବଂ ଦେଖାଇଥିଲା ଯେ KAND 11 ଚିକିତ୍ସାର 30 ମିନିଟ୍ ପରେ ଇଭାନ୍ସ ନୀଳ-ଦାଗଯୁକ୍ତ ମୃତ କୋଷଗୁଡ଼ିକର ଅନୁପାତ ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଭାବରେ ବୃଦ୍ଧି ପାଇନଥିଲା, ଯେତେବେଳେ 50 μM କିମ୍ବା 100 μM KAND ସହିତ 90 ମିନିଟ୍ ଚିକିତ୍ସା ପରେ, ମୃତ କୋଷ ସଂଖ୍ୟା ଯଥାକ୍ରମେ 43.7% କିମ୍ବା 80.1% କୁ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଥିଲା (ଚିତ୍ର 7c)। ଏକତ୍ରିତ ଭାବରେ, ଏହି ତଥ୍ୟ ସୂଚାଇଥାଏ ଯେ ନୂତନ ursolic acid ଡେରିଭେଟିଭ୍ KAND 11 ହେଉଛି ଏକ ଉଦ୍ଭିଦ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ସାଇଟୋସ୍କେଲେଟାଲ୍ ଇନହିବିଟର ଯାହାର କାର୍ଯ୍ୟର ପୂର୍ବରୁ ଅଜଣା ଯନ୍ତ୍ରପାତି ଅଛି।
KAND କର୍ଟିକାଲ୍ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ସ, ଆକ୍ଟିନ ଫିଲାମେଣ୍ଟସ୍ ଏବଂ ତମାଖୁ BY-2 କୋଷଗୁଡ଼ିକର କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତାକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରେ। (a) TagRFP-TUA6 ଉପସ୍ଥିତିରେ BY-2 କୋଷଗୁଡ଼ିକରେ କର୍ଟିକାଲ୍ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ସର ଦୃଶ୍ୟକରଣ। KAND 11 (50 μM କିମ୍ବା 100 μM) କିମ୍ବା DMSO ସହିତ ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା BY-2 କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ କନଫୋକାଲ୍ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପି ଦ୍ୱାରା ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇଥିଲା। 25ଟି ସ୍ୱାଧୀନ କୋଷର ମାଇକ୍ରୋଗ୍ରାଫ୍ ରୁ କର୍ଟିକାଲ୍ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ ଘନତା ଗଣନା କରାଯାଇଥିଲା। ଅକ୍ଷରଗୁଡ଼ିକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପାର୍ଥକ୍ୟ ସୂଚାଇଥାଏ (ଟୁକି HSD ପରୀକ୍ଷା, p)< 0.05)। ସ୍କେଲ୍ ବାର୍ = 10 µm। (b) GFP-ABD2 ର ଉପସ୍ଥିତିରେ ଦୃଶ୍ୟମାନ BY-2 କୋଷରେ କର୍ଟିକାଲ୍ ଆକ୍ଟିନ୍ ଫିଲାମେଣ୍ଟ। KAND 11 (50 μM କିମ୍ବା 100 μM) କିମ୍ବା DMSO ସହିତ ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା BY-2 କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ କନଫୋକାଲ୍ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପି ଦ୍ୱାରା ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇଥିଲା। କର୍ଟିକାଲ୍ ଆକ୍ଟିନ୍ ଫିଲାମେଣ୍ଟର ଘନତା 25 ଟି ସ୍ୱାଧୀନ କୋଷର ମାଇକ୍ରୋଗ୍ରାଫ୍ ରୁ ଗଣନା କରାଯାଇଥିଲା। ଅକ୍ଷରଗୁଡ଼ିକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପାର୍ଥକ୍ୟ ସୂଚାଇଥାଏ (ଟୁକି HSD ପରୀକ୍ଷା, p< 0.05). ସ୍କେଲ୍ ବାର୍ = 10 µm. (c) ଇଭାନ୍ସ ନୀଳ ରଙ୍ଗ ଦ୍ୱାରା ମୃତ BY-2 କୋଷଗୁଡ଼ିକର ପର୍ଯ୍ୟବେକ୍ଷଣ। KAND 11 (50 μM କିମ୍ବା 100 μM) କିମ୍ବା DMSO ସହିତ ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା BY-2 କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ଉଜ୍ଜ୍ୱଳ-କ୍ଷେତ୍ର ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପି ଦ୍ୱାରା ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇଥିଲା। n = 3. ସ୍କେଲ୍ ବାର୍ = 100 µm.
ନୂତନ ପ୍ରାକୃତିକ ଉତ୍ପାଦର ଆବିଷ୍କାର ଏବଂ ପ୍ରୟୋଗ ମାନବ ଜୀବନର ବିଭିନ୍ନ ଦିଗରେ, ଯେପରିକି ଔଷଧ ଏବଂ କୃଷି, ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଉନ୍ନତି ଆଣିଛି। ପ୍ରାକୃତିକ ସମ୍ପଦରୁ ଉପଯୋଗୀ ଯୌଗିକ ପ୍ରାପ୍ତ କରିବା ପାଇଁ ଐତିହାସିକ ଗବେଷଣା କରାଯାଇଛି। ବିଶେଷକରି, ଆକ୍ଟିନୋମାଇସେଟ୍‌ଗୁଡ଼ିକ ନେମାଟୋଡ୍‌ମାନଙ୍କ ପାଇଁ ପରଜୀବୀ ବିରୋଧୀ ଆଣ୍ଟିବାୟୋଟିକ୍ ଭାବରେ ଉପଯୋଗୀ ବୋଲି ଜଣାଶୁଣା କାରଣ ସେମାନଙ୍କର ବିଭିନ୍ନ ଦ୍ୱିତୀୟ ମେଟାବୋଲାଇଟ୍‌ ଯେପରିକି ଆଭରମେକ୍ଟିନ, ଆଇଭରମେକ୍ଟିନ ଏବଂ ବ୍ଲୋମାଇସିନ୍‌ର ସୀସା ଯୌଗିକ ଏବଂ ଏହାର ଡେରିଭେଟିଭ୍‌, ଏକ କ୍ୟାନସର ବିରୋଧୀ ଏଜେଣ୍ଟ ଭାବରେ ଔଷଧୀୟ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ 21,22। ସେହିପରି, ଆକ୍ଟିନୋମାଇସେଟ୍‌ଗୁଡ଼ିକରୁ ବିଭିନ୍ନ ପ୍ରକାରର ଭେଷଜନାଶକ ଯୌଗିକ ଆବିଷ୍କାର କରାଯାଇଛି, ଯାହା ମଧ୍ୟରୁ କିଛି ପୂର୍ବରୁ ବାଣିଜ୍ୟିକ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହେଉଛି1,23। ତେଣୁ, ଇଚ୍ଛିତ ଜୈବିକ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ସହିତ ପ୍ରାକୃତିକ ଉତ୍ପାଦଗୁଡ଼ିକୁ ପୃଥକ କରିବା ପାଇଁ ଆକ୍ଟିନୋମାଇସେଟ୍ ମେଟାବୋଲାଇଟ୍‌ଗୁଡ଼ିକର ବିଶ୍ଳେଷଣକୁ ଏକ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ରଣନୀତି ଭାବରେ ବିବେଚନା କରାଯାଏ। ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ, ଆମେ S. werraensis ରୁ ଏକ ନୂତନ ଯୌଗିକ, coumamonamide, ଆବିଷ୍କାର କରିଛୁ ଏବଂ ଏହାକୁ ସଫଳତାର ସହିତ ସଂଶ୍ଳେଷଣ କରିଛୁ। ଉର୍ସୋନିକ୍ ଏସିଡ୍ ହେଉଛି ଉର୍ବେନାମାଇଡ୍ ଏବଂ ଏହାର ଡେରିଭେଟିଭ୍‌ର ଏକ କୃତ୍ରିମ ମଧ୍ୟବର୍ତ୍ତୀ। ଏହା ବୈଶିଷ୍ଟ୍ୟପୂର୍ଣ୍ଣ ମୂଳ କୁଣ୍ଡାଇ ସୃଷ୍ଟି କରିପାରେ, ମଧ୍ୟମରୁ ଶକ୍ତିଶାଳୀ ଭେଷଜନାଶକ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିପାରେ ଏବଂ ପ୍ରତ୍ୟକ୍ଷ କିମ୍ବା ପରୋକ୍ଷ ଭାବରେ ଉଦ୍ଭିଦ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍‌କୁ କ୍ଷତି ପହଞ୍ଚାଇପାରେ। ତଥାପି, ଉର୍ମୋଟୋନିକ୍ ଏସିଡର କାର୍ଯ୍ୟ ପ୍ରଣାଳୀ ବିଦ୍ୟମାନ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବ୍ୟୁଲ୍ ଇନହିବିଟରମାନଙ୍କଠାରୁ ଭିନ୍ନ ହୋଇପାରେ, କାରଣ KAND 11 ମଧ୍ୟ ଆକ୍ଟିନ ଫିଲାମେଣ୍ଟଗୁଡ଼ିକୁ ବିଚଳିତ କରେ ଏବଂ କୋଷ ମୃତ୍ୟୁର କାରଣ ହୁଏ, ଯାହା ଏକ ନିୟାମକ ପ୍ରଣାଳୀକୁ ସୂଚାଇଥାଏ ଯାହା ଦ୍ୱାରା ଉର୍ମୋଟୋନିକ୍ ଏସିଡ୍ ଏବଂ ଏହାର ଡେରିଭେଟିଭ୍ସ ସାଇଟୋସ୍କେଲେଟାଲ୍ ଗଠନର ଏକ ବିସ୍ତୃତ ପରିସରକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରେ।
ଅର୍ବେନୋନିକ୍ ଏସିଡର ଅଧିକ ବିସ୍ତୃତ ବର୍ଣ୍ଣନା ଅର୍ବେନୋନିକ୍ ଏସିଡର କାର୍ଯ୍ୟ ପ୍ରଣାଳୀକୁ ଭଲ ଭାବରେ ବୁଝିବାରେ ସାହାଯ୍ୟ କରିବ। ବିଶେଷକରି, ପରବର୍ତ୍ତୀ ଲକ୍ଷ୍ୟ ହେଉଛି ଅର୍ସୋନିକ୍ ଏସିଡର ହ୍ରାସିତ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ସ ସହିତ ବାନ୍ଧି ହେବାର କ୍ଷମତା ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରିବା ଯାହା ଦ୍ୱାରା ଅର୍ସୋନିକ୍ ଏସିଡ୍ ଏବଂ ଏହାର ଡେରିଭେଟିଭ୍ସ ସିଧାସଳଖ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ସ ଉପରେ କାର୍ଯ୍ୟ କରେ ଏବଂ ସେମାନଙ୍କୁ ଡିପଲିମରାଇଜ୍ କରେ କି ନାହିଁ, କିମ୍ବା ସେମାନଙ୍କର କାର୍ଯ୍ୟ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ସ ଅସ୍ଥିରତାରେ ପରିଣତ ହୁଏ କି ନାହିଁ ତାହା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇପାରିବ। ଏହା ବ୍ୟତୀତ, ଯେଉଁ କ୍ଷେତ୍ରରେ ଅର୍ସୋନିକ୍ ଏସିଡର କାର୍ଯ୍ୟ ସ୍ଥାନ ଏବଂ ଆଣବିକ ଲକ୍ଷ୍ୟ ଚିହ୍ନଟ କରିବା ଦ୍ୱାରା ଉଦ୍ଭିଦ କୋଷଗୁଡ଼ିକ ସିଧାସଳଖ ଲକ୍ଷ୍ୟ ନୁହେଁ, ସେ କ୍ଷେତ୍ରରେ ଅର୍ସୋନିକ୍ ଏସିଡର କାର୍ଯ୍ୟ ସ୍ଥାନ ଏବଂ ଆଣବିକ ଲକ୍ଷ୍ୟ ଚିହ୍ନଟ କରିବା ସମ୍ବନ୍ଧିତ ଯୌଗିକଗୁଡ଼ିକର ଗୁଣ ଏବଂ ତୃଣନାଶକ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ଉନ୍ନତ କରିବାର ସମ୍ଭାବ୍ୟ ଉପାୟଗୁଡ଼ିକୁ ଆହୁରି ବୁଝିବାରେ ସାହାଯ୍ୟ କରିବ। ଆମର ଜୈବ ସକ୍ରିୟତା ପରୀକ୍ଷା ଆରାବିଡୋପ୍ସିସ୍ ଥାଲିଆନା, ତମାଖୁ ଏବଂ ଲିଭରୱାର୍ଟ ପରି ଉଦ୍ଭିଦର ବୃଦ୍ଧି ଉପରେ ଅର୍ସୋନିକ୍ ଏସିଡର ଅନନ୍ୟ ସାଇଟୋଟକ୍ସିକ କ୍ଷମତା ପ୍ରକାଶ କରିଥିଲା, ଯେତେବେଳେ E. coli କିମ୍ବା HeLa କୋଷଗୁଡ଼ିକ ପ୍ରଭାବିତ ହୋଇନଥିଲେ। ଯଦି ଖୋଲା କୃଷି କ୍ଷେତ୍ରରେ ବ୍ୟବହାର ପାଇଁ ତୃଣନାଶକ ଭାବରେ ବିକଶିତ କରାଯାଏ ତେବେ ପ୍ରାଣୀ କୋଷଗୁଡ଼ିକ ପାଇଁ କମ୍ କିମ୍ବା କୌଣସି ବିଷାକ୍ତତା ଉର୍ସୋନିକ୍ ଏସିଡ୍ ଡେରିଭେଟିଭ୍ସର ଏକ ଲାଭ। ପ୍ରକୃତରେ, ଯେହେତୁ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ସ ୟୁକାରିଓଟ୍ସରେ ସାଧାରଣ ଗଠନ, ତେଣୁ ଉଦ୍ଭିଦଗୁଡ଼ିକରେ ସେମାନଙ୍କର ଚୟନାତ୍ମକ ପ୍ରତିରୋଧ ତୃଣନାଶକ ପାଇଁ ଏକ ପ୍ରମୁଖ ଆବଶ୍ୟକତା। ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, ପ୍ରୋପିଜାମାଇଡ୍, ଏକ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ ଡିପଲିମରାଇଜିଂ ଏଜେଣ୍ଟ ଯାହା ସିଧାସଳଖ ଟ୍ୟୁବୁଲିନ୍ ସହିତ ବାନ୍ଧିଥାଏ ଏବଂ ପଲିମରାଇଜେସନ୍‌କୁ ବାଧା ଦିଏ, ପ୍ରାଣୀ କୋଷଗୁଡ଼ିକ ପ୍ରତି ଏହାର କମ୍ ବିଷାକ୍ତତା ଯୋଗୁଁ ଏହାକୁ ଏକ ତୃଣନାଶକ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଏ24। ଡିସୋପାଇରାମାଇଡ୍ ବିପରୀତରେ, ସମ୍ବନ୍ଧିତ ବେଞ୍ଜାମାଇଡ୍‌ଗୁଡ଼ିକର ବିଭିନ୍ନ ଲକ୍ଷ୍ୟ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ଅଛି। ଉଦ୍ଭିଦ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ ସହିତ, RH-4032 କିମ୍ବା ବେଞ୍ଜୋକ୍ସାମାଇଡ୍ ମଧ୍ୟ ଯଥାକ୍ରମେ ପ୍ରାଣୀ କୋଷ କିମ୍ବା ଓମାଇସେଟ୍‌ଗୁଡ଼ିକର ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍‌ଗୁଡ଼ିକୁ ବାଧା ଦିଏ, ଏବଂ ଜାଲିଲାମାଇଡ୍ ଏହାର କମ୍ ଫାଇଟୋଟକ୍ସିଟି25,26,27 ହେତୁ ଏକ କବକନାଶକ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ। ନୂତନ ଭାବରେ ଆବିଷ୍କୃତ ଭାଲୁ ଏବଂ ଏହାର ଡେରିଭେଟିଭ୍ସ ଗଛଗୁଡ଼ିକ ବିରୁଦ୍ଧରେ ଚୟନାତ୍ମକ ସାଇଟୋଟକ୍ସିଟି ପ୍ରଦର୍ଶନ କରେ, କିନ୍ତୁ ଏହା ଲକ୍ଷ୍ୟ ରଖିବା ଯୋଗ୍ୟ ଯେ ଆହୁରି ପରିବର୍ତ୍ତନ ସେମାନଙ୍କର ଲକ୍ଷ୍ୟ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତାକୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରିପାରେ, ସମ୍ଭାବ୍ୟ ଭାବରେ ରୋଗଜନକ କବକ କିମ୍ବା ଓମାଇସେଟ୍‌ର ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ପାଇଁ ଅତିରିକ୍ତ ଡେରିଭେଟିଭ୍ସ ପ୍ରଦାନ କରେ।
ଉର୍ବେନୋନିକ୍ ଏସିଡ୍ ଏବଂ ଏହାର ଡେରିଭେଟିଭ୍ସର ଅନନ୍ୟ ଗୁଣଗୁଡ଼ିକ ତୃଣନାଶକ ଭାବରେ ସେମାନଙ୍କର ବିକାଶ ଏବଂ ଗବେଷଣା ଉପକରଣ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର ପାଇଁ ଉପଯୋଗୀ। ଉଦ୍ଭିଦ କୋଷ ଆକୃତିକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରିବାରେ ସାଇଟୋସ୍କେଲିଟନର ଗୁରୁତ୍ୱ ବହୁଳ ଭାବରେ ସ୍ୱୀକୃତ। ପୂର୍ବ ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ ଉଦ୍ଭିଦଗୁଡ଼ିକ ମର୍ଫୋଜେନେସିସ୍ କୁ ସଠିକ୍ ଭାବରେ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରିବା ପାଇଁ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ ଗତିବିଧିକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରି କର୍ଟିକାଲ୍ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ ସଂଗଠନର ଜଟିଳ ଯନ୍ତ୍ରପାତି ବିକଶିତ କରିଛନ୍ତି। ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପର ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ପାଇଁ ଦାୟୀ ବହୁ ସଂଖ୍ୟକ ଅଣୁ ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇଛି, ଏବଂ ସମ୍ବନ୍ଧିତ ଗବେଷଣା ଏପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଜାରି ରହିଛି 3,4,28। ଉଦ୍ଭିଦ କୋଷରେ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ ଗତିବିଧି ବିଷୟରେ ଆମର ବର୍ତ୍ତମାନର ବୁଝାମଣା କର୍ଟିକାଲ୍ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ ସଂଗଠନର ଯନ୍ତ୍ରପାତିକୁ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଭାବରେ ବ୍ୟାଖ୍ୟା କରେ ନାହିଁ। ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, ଯଦିଓ ଡିସୋପାଇରାମାଇଡ୍ ଏବଂ ଓରିଜାଲିନ୍ ଉଭୟ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ସକୁ ଡିପଲିମରାଇଜ୍ କରିପାରିବେ, ଡିସୋପାଇରାମାଇଡ୍ ଗୁରୁତର ମୂଳ ବିକୃତି ସୃଷ୍ଟି କରେ ଯେତେବେଳେ ଓରିଜାଲିନ୍ ଏକ ଅପେକ୍ଷାକୃତ ମୃଦୁ ପ୍ରଭାବ ପକାଇଥାଏ। ଅଧିକନ୍ତୁ, ଟ୍ୟୁବୁଲିନ୍ ରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ, ଯାହା ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ସକୁ ସ୍ଥିର କରେ, ମୂଳରେ ଡେକ୍ସଟ୍ରୋରୋଟେସନ୍ ମଧ୍ୟ ସୃଷ୍ଟି କରେ, ଯେତେବେଳେ ପାକ୍ଲିଟାକ୍ସେଲ, ଯାହା ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ ଗତିବିଧିକୁ ସ୍ଥିର କରେ, ତାହା କରେ ନାହିଁ। ତେଣୁ, ଉର୍ସୋଲିକ୍ ଏସିଡର ଆଣବିକ ଲକ୍ଷ୍ୟ ଅଧ୍ୟୟନ ଏବଂ ଚିହ୍ନଟ କରିବା ଦ୍ୱାରା ଉଦ୍ଭିଦ କର୍ଟିକାଲ୍ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲର ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ବିଷୟରେ ନୂତନ ଅନ୍ତର୍ଦୃଷ୍ଟି ପ୍ରଦାନ କରିବା ଉଚିତ। ସେହିପରି, ଡିସୋପାଇରାମାଇଡ୍ ଭଳି ବିକୃତ ବୃଦ୍ଧିକୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରିବାରେ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ରାସାୟନିକ ପଦାର୍ଥ ଏବଂ ଓରିଜାଲିନ୍ କିମ୍ବା କୁମାମୋଟୋରିକ୍ ​​ଏସିଡ୍ ଭଳି କମ୍ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ରାସାୟନିକ ପଦାର୍ଥର ଭବିଷ୍ୟତ ତୁଳନା, ବିକୃତ ବୃଦ୍ଧି କିପରି ଘଟେ ତାହାର ସୂଚନା ପ୍ରଦାନ କରିବ।
ଅନ୍ୟପକ୍ଷରେ, ପ୍ରତିରକ୍ଷା-ସମ୍ବନ୍ଧୀୟ ସାଇଟୋସ୍କେଲେଟାଲ୍ ପୁନଃସଂସ୍ଥାପନ ହେଉଛି ଉର୍ସୋନିକ୍ ଏସିଡ୍‌ର ସାଇଟୋଟକ୍ସିସିଟି ବ୍ୟାଖ୍ୟା କରିବାର ଆଉ ଏକ ସମ୍ଭାବନା। ଏକ ରୋଗ ସୃଷ୍ଟିକାରୀର ସଂକ୍ରମଣ କିମ୍ବା ଉଦ୍ଭିଦ କୋଷରେ ଏକ ଏଲିସିଟର ପ୍ରବେଶ କେତେକ ସମୟରେ ସାଇଟୋସ୍କେଲେଟନ୍‌ର ବିନାଶ ଏବଂ ପରବର୍ତ୍ତୀ କୋଷ ମୃତ୍ୟୁର କାରଣ ହୁଏ29। ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, ଓମାଇସେଟ୍‌ରୁ ପ୍ରାପ୍ତ କ୍ରିପ୍ଟୋକ୍ସାଥିନ୍‌ ତମାଖୁ କୋଷ ମୃତ୍ୟୁ ପୂର୍ବରୁ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ସ ଏବଂ ଆକ୍ଟିନ ଫିଲାମେଣ୍ଟ୍‌ଗୁଡ଼ିକୁ ବାଧାପ୍ରାପ୍ତ କରୁଥିବା ରିପୋର୍ଟ କରାଯାଇଛି, ଯାହା KAND ଚିକିତ୍ସା ସହିତ ଘଟେ30,31। ପ୍ରତିରକ୍ଷା ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଏବଂ ଉର୍ସୋନିକ୍ ଏସିଡ୍ ଦ୍ୱାରା ପ୍ରେରିତ କୋଷୀୟ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ମଧ୍ୟରେ ସମାନତା ଆମକୁ ଅନୁମାନ କରିବାକୁ ପ୍ରେରଣା ଦେଇଛି ଯେ ସେମାନେ ସାଧାରଣ କୋଷୀୟ ପ୍ରକ୍ରିୟାଗୁଡ଼ିକୁ ଟ୍ରିଗର କରନ୍ତି, ଯଦିଓ କ୍ରିପ୍ଟୋକ୍ସାଥିନ୍‌ ଅପେକ୍ଷା ଉର୍ସୋନିକ୍ ଏସିଡ୍‌ର ଏକ ଦ୍ରୁତ ଏବଂ ଶକ୍ତିଶାଳୀ ପ୍ରଭାବ ସ୍ପଷ୍ଟ। ତଥାପି, ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ ଆକ୍ଟିନ ଫିଲାମେଣ୍ଟ୍‌ଗୁଡ଼ିକର ବାଧା ସ୍ୱତଃସ୍ଫୂର୍ତ୍ତ କୋଷ ମୃତ୍ୟୁକୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରେ, ଯାହା ସର୍ବଦା ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ ବିଭ୍ରାଟ ସହିତ ହୁଏ ନାହିଁ29। ଏହା ସହିତ, ଏହା ଦେଖିବାକୁ ବାକି ଅଛି ଯେ ରୋଗକାରୀ କିମ୍ବା ଏଲିସିଟର ବିକୃତ ମୂଳ ବୃଦ୍ଧିର କାରଣ ହୁଏ କି, ଯେପରି ଉର୍ସୋନିକ୍ ଏସିଡ୍ ଡେରିଭେଟିଭ୍ସ କରନ୍ତି। ତେଣୁ, ପ୍ରତିରକ୍ଷା ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଏବଂ ସାଇଟୋସ୍କେଲେଟନ୍‌କୁ ସଂଯୋଗ କରୁଥିବା ଆଣବିକ ଜ୍ଞାନ ସମାଧାନ କରିବା ପାଇଁ ଏକ ଆକର୍ଷଣୀୟ ସମସ୍ୟା। ଉର୍ସୋନିକ୍ ଏସିଡ୍ ସହିତ ଜଡିତ କମ୍ ଆଣବିକ ଓଜନ ଯୌଗିକ ଏବଂ ବିଭିନ୍ନ କ୍ଷମତା ସହିତ ଡେରିଭେଟିଭ୍ସର ଏକ ପରିସରର ଉପସ୍ଥିତିକୁ ବ୍ୟବହାର କରି, ସେମାନେ ଅଜଣା କୋଷୀୟ ଯନ୍ତ୍ରକୁ ଟାର୍ଗେଟ କରିବାର ସୁଯୋଗ ପ୍ରଦାନ କରିପାରନ୍ତି।
ଏକତ୍ରିତ ଭାବରେ, ନୂତନ ଯୌଗିକଗୁଡ଼ିକର ଆବିଷ୍କାର ଏବଂ ପ୍ରୟୋଗ ଯାହା ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବଲ୍ ଗତିଶୀଳତାକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରେ, ଉଦ୍ଭିଦ କୋଷ ଆକୃତି ନିର୍ଣ୍ଣୟ ଅନ୍ତର୍ନିହିତ ଜଟିଳ ଆଣବିକ ଯନ୍ତ୍ରପାତିକୁ ସମାଧାନ କରିବା ପାଇଁ ଶକ୍ତିଶାଳୀ ପଦ୍ଧତି ପ୍ରଦାନ କରିବ। ଏହି ପରିପ୍ରେକ୍ଷୀରେ, ସମ୍ପ୍ରତି ବିକଶିତ ଯୌଗିକ ଉର୍ମୋଟୋନିକ୍ ଏସିଡ୍, ଯାହା ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବଲ୍ ଏବଂ ଆକ୍ଟିନ ଫିଲାମେଣ୍ଟକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରେ ଏବଂ କୋଷ ମୃତ୍ୟୁକୁ ପ୍ରେରଣା ଦିଏ, ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବଲ୍ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଏବଂ ଏହି ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ଯନ୍ତ୍ରପାତି ମଧ୍ୟରେ ସଂଯୋଗକୁ ବୁଝିବା ପାଇଁ ଏକ ସୁଯୋଗ ପ୍ରଦାନ କରିପାରେ। ତେଣୁ, ଉର୍ବେନୋନିକ୍ ଏସିଡ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ରାସାୟନିକ ଏବଂ ଜୈବିକ ବିଶ୍ଳେଷଣ ଆମକୁ ଉଦ୍ଭିଦ ସାଇଟୋସ୍କେଲିଟନ୍ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରୁଥିବା ଆଣବିକ ନିୟାମକ ଯନ୍ତ୍ରପାତିକୁ ବୁଝିବାରେ ସାହାଯ୍ୟ କରିବ।
S. werraensis MK493-CF1 କୁ ଏକ 500 mL ବିଭ୍ରାନ୍ତକାରୀ Erlenmeyer ଫ୍ଲାସ୍କରେ ଟୀକାକରଣ କରନ୍ତୁ ଯେଉଁଥିରେ 110 mL ବିହନ ମଧ୍ୟମ 2% (w/v) ଗାଲାକ୍ଟୋଜ୍, 2% (w/v) ଏସେନ୍ସ ପେଷ୍ଟ, 1% (w/v) ବାକ୍ଟୋ ରଚନା ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ। -ସୋୟଟନ୍ (ଥର୍ମୋ ଫିସର ସାଇଣ୍ଟିଫିକ୍, ଇନକର୍ପୋରେଟେଡ୍), 0.5% (w/v) ମକା ସାର (KOGOSTCH Co., Ltd., ଜାପାନ), 0.2% (w/v) (NH4)2SO4 ଏବଂ 0.2% CaCO3 ଡିଆୟୋନାଇଜଡ୍ ପାଣିରେ ମିଶ୍ରଣ କରନ୍ତୁ। (pH 7.4 ଜୀବାଣୁମୁକ୍ତ କରିବା ପୂର୍ବରୁ)। ବିହନ କଲଚରଗୁଡ଼ିକୁ ଏକ ରୋଟାରୀ ସେକର (180 rpm) ରେ 27°C ରେ 2 ଦିନ ପାଇଁ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା। କଠିନ ଅବସ୍ଥା କିଣ୍ମନ ମାଧ୍ୟମରେ ଉତ୍ପାଦନ ଚାଷ। ବିହନ କଲଚର (୭ ମିଲି) କୁ ଏକ ୫୦୦ ମିଲି K-୧ ଫ୍ଲାସ୍କରେ ସ୍ଥାନାନ୍ତରିତ କରାଯାଇଥିଲା ଯେଉଁଥିରେ ୪୦ ଗ୍ରାମ ଉତ୍ପାଦନ ମାଧ୍ୟମ ଥିଲା ଯେଉଁଥିରେ ୧୫ ଗ୍ରାମ ଚାପି ହୋଇଥିବା ବାର୍ଲି (MUSO Co., Ltd., ଜାପାନ) ଏବଂ ୨୫ ଗ୍ରାମ ଡିଆୟୋନାଇଜଡ୍ ପାଣି (pH ଜୀବାଣୁମୁକ୍ତ କରିବା ପୂର୍ବରୁ ଆଡଜଷ୍ଟ କରାଯାଇନଥିଲା) ଥିଲା। ୧୪ ଦିନ ପାଇଁ ଅନ୍ଧାରରେ ୩୦°C ରେ କିଣ୍ବନୀକରଣ କରାଯାଇଥିଲା। କିଣ୍ବନ ସାମଗ୍ରୀକୁ ୪୦ ମିଲି/ବୋତଲ EtOH ସହିତ ବାହାର କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫ୍ୟୁଜ୍ କରାଯାଇଥିଲା (୧୫୦୦ ଗ୍ରାମ, ୪°C, ୧୦ ମିନିଟ୍)। କଲ୍ଚର ସୁପରନାଟାଣ୍ଟ (୬୦ ମିଲି) କୁ ୧୦% MeOH/EtOAc ମିଶ୍ରଣ ସହିତ ବାହାର କରାଯାଇଥିଲା। ଜୈବିକ ସ୍ତରକୁ ହ୍ରାସ ଚାପରେ ବାଷ୍ପୀଭୂତ କରି ଏକ ଅବଶିଷ୍ଟାଂଶ (59.5 ମିଗ୍ରା) ପ୍ରାପ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା, ଯାହାକୁ ଏକ ବିପରୀତ ପର୍ଯ୍ୟାୟ ସ୍ତମ୍ଭରେ ଗ୍ରେଡିଏଣ୍ଟ ଏଲୁସନ୍ (0-10 ମିନିଟ୍: 90%) ସହିତ HPLC କରାଯାଇଥିଲା (SHISEIDO CAPCELL PAK C18 UG120, 5 μm, ID 10 mm × ଲମ୍ବ 250 ମିମି) H2O/CH3CN, 10-35 ମିନିଟ୍: 90% H2O/CH3CN ରୁ 70% H2O/CH3CN (ଗ୍ରାଡିଏଣ୍ଟ), 35-45 ମିନିଟ୍: 90% H2O/EtOH, 45-155 ମିନିଟ୍: 90% H2O/EtOH ରୁ 100% EtOH (ଗ୍ରାଡିଏଣ୍ଟ (ଗ୍ରାଡିଏଣ୍ଟ), 155-200 ମିନିଟ୍: 100% EtOH) 1.5 ମିଲି/ମିନିଟ୍ ପ୍ରବାହ ହାରରେ, କୁମାମୋନାମାଇଡ୍ (1, 36.0 ମିଗ୍ରା) ଏକ ଧଳା ଆକାରହୀନ ପାଉଡର ଭାବରେ ପୃଥକ କରାଯାଇଥିଲା।
କୁମାମୋଟୋଆମାଇଡ୍(1); 1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 6.93 (t, J = 2.5 Hz, 1H), 6.76 (dd, J = 4.3, 1.8 Hz 1H), 6.05 (t, J = 3.8 Hz, 1H)। ), 4.08 (s, 3H); 13C-NMR (125 MHz, CDCl3) δ 161.1, 121.0, 119.9, 112.2, 105.0, 68.3; ESI-HRMS [M+H]+: [C6H9N2O2]+ ଗଣନା କରାଯାଇଥିବା ମୂଲ୍ୟ: 141.0659, ମାପ କରାଯାଇଥିବା ମୂଲ୍ୟ: 141.0663, IR νସର୍ବାଧିକ 3451, 3414, 3173, 2938, 1603, 1593, 1537 cm–1।
ଗବେଷଣା ବ୍ୟବହାର ପାଇଁ ଅନୁମତି ସହିତ କଲମ୍ବିଆ ବିହନ (Col-0) Arabidopsis Biological Resource Center (ABRC) ରୁ ପ୍ରାପ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା। Col-0 ବିହନଗୁଡ଼ିକୁ ଆମର ପରୀକ୍ଷାଗାର ପରିସ୍ଥିତିରେ ପ୍ରଚାର ଏବଂ ରକ୍ଷଣାବେକ୍ଷଣ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଜଙ୍ଗଲୀ ପ୍ରକାରର Arabidopsis ଉଦ୍ଭିଦ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। Arabidopsis ବିହନଗୁଡ଼ିକୁ ପୃଷ୍ଠ ଜୀବାଣୁମୁକ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଅଧା-ଶକ୍ତି ମୁରାଶିଗେ ଏବଂ ସ୍କୁଗ ମାଧ୍ୟମରେ 2% ସୁକ୍ରୋଜ୍ (Fujifilm Wako Pure Chemical), 0.05% (w/v) 2-(4-morpholino) ethanesulfonic acid (MES) (Fujifilm Wako Pure Chemical) ଏବଂ 1.5% agar (Fujifilm Wako Pure Chemical), pH 5.7, 23 °C ଏବଂ ସ୍ଥିର ଆଲୋକରେ ପ୍ରଦାନ କରାଯାଇଥିଲା। phs1-1 ମ୍ୟୁଟାଣ୍ଟର ବିହନଗୁଡ଼ିକୁ T. Hashimoto (Nara Institute of Science and Technology) ଦ୍ୱାରା ଯୋଗାଇ ଦିଆଯାଇଥିଲା।
SR-1 ଷ୍ଟ୍ରେନର ବିହନଗୁଡ଼ିକ T. Hashimoto (ନାରା ଇନଷ୍ଟିଚ୍ୟୁଟ୍ ଅଫ୍ ସାଇନ୍ସ ଆଣ୍ଡ୍ ଟେକ୍ନୋଲୋଜି) ଦ୍ୱାରା ଯୋଗାଇ ଦିଆଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଜଙ୍ଗଲୀ ପ୍ରକାରର ତମାଖୁ ଗଛ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। ଅଙ୍କୁର ବୃଦ୍ଧି ପାଇଁ ତମାଖୁ ବିହନଗୁଡ଼ିକୁ ପୃଷ୍ଠ ଜୀବାଣୁମୁକ୍ତ କରାଯାଇ ତିନି ରାତି ପାଇଁ ଜୀବାଣୁମୁକ୍ତ ପାଣିରେ ବୁଡ଼ାଇ ଦିଆଯାଇଥିଲା, ତା’ପରେ 2% ସୁକ୍ରୋଜ୍, 0.05% (w/v) MES, ଏବଂ 0.8% ଜେଲାନ୍ ଗମ୍ (ଫୁଜିଫିଲ୍ମ ୱାକୋ ପ୍ୟୁର୍ କେମିକାଲ୍) ମୁରାଶିଗେ ଏବଂ ସ୍କୁଗ୍ ମାଧ୍ୟମ) ଧାରଣ କରିଥିବା ଏକ ଅଧା-ଶକ୍ତି ଦ୍ରବଣରେ pH 5.7 ସହିତ ରଖାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ସ୍ଥିର ଆଲୋକରେ 23°C ରେ ଇନକ୍ୟୁବେଟେଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା।
ଷ୍ଟ୍ରେନ୍ ଟାକ୍-୧ ଟି. କୋହଚି (କ୍ୟୋଟୋ ବିଶ୍ୱବିଦ୍ୟାଳୟ) ଦ୍ୱାରା ପ୍ରଦାନ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଲିଭରୱାର୍ଟ ଅଧ୍ୟୟନ ପାଇଁ ମାନକ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ୟୁନିଟ୍ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଥିଲା। ଜେମ୍ମାକୁ ଜୀବାଣୁମୁକ୍ତ କଲଚର୍ଡ ଉଦ୍ଭିଦରୁ ପ୍ରାପ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ତା’ପରେ ଗାମ୍ବର୍ଗ B5 ମାଧ୍ୟମ (ଫୁଜିଫିଲ୍ମ ୱାକୋ ପ୍ୟୁର୍ କେମିକାଲ୍) ଉପରେ ପ୍ଲେଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା ଯେଉଁଥିରେ 1% ସୁକ୍ରୋଜ୍ ଏବଂ 0.3% ଜେଲାନ୍ ଗମ୍ ଥିଲା ଏବଂ ନିରନ୍ତର ଆଲୋକରେ 23°C ତାପମାତ୍ରାରେ ଇନକ୍ୟୁବେଟେଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା।
ତମାଖୁ BY-2 କୋଷ (ନିକୋଟିଆନା ଟାବାକମ୍ L. cv. ଉଜ୍ଜ୍ୱଳ ହଳଦିଆ 2) S. Hasezawa (ଟୋକିଓ ବିଶ୍ୱବିଦ୍ୟାଳୟ) ଦ୍ୱାରା ପ୍ରଦାନ କରାଯାଇଥିଲା। BY-2 କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ପରିବର୍ତ୍ତିତ ଲିନ୍ସମେୟର ଏବଂ ସ୍କୁଗ୍ ମାଧ୍ୟମରେ 95 ଗୁଣ ତରଳ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ସପ୍ତାହରେ 2,4-ଡାଇକ୍ଲୋରୋଫେନୋକ୍ସାଏସେଟିକ୍ ଏସିଡ୍ 32 ସହିତ ପରିପୂରକ କରାଯାଇଥିଲା। କୋଷ ସସପେନସନକୁ ଅନ୍ଧାରରେ 27°C ରେ 130 rpm ରେ ଏକ ରୋଟାରୀ ସେକରରେ ମିଶ୍ରିତ କରାଯାଇଥିଲା। ତାଜା ମାଧ୍ୟମର 10 ଗୁଣ ଆୟତନ ସହିତ କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ଧୋଇ ସେହି ମାଧ୍ୟମରେ ପୁନଃସ୍ଥାପିତ କରନ୍ତୁ। ଫୁଲକୋବି ମୋଜାଇକ୍ ଭାଇରସ୍ 35S ପ୍ରମୋଟର ଅଧୀନରେ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବଲ୍ ମାର୍କର TagRFP-TUA6 କିମ୍ବା ଆକ୍ଟିନ ଫିଲାମେଣ୍ଟ ମାର୍କର GFP-ABD2 ସ୍ଥିର ଭାବରେ ପ୍ରକାଶ କରୁଥିବା BY-2 ଟ୍ରାନ୍ସଜେନିକ୍ କୋଷ ରେଖାଗୁଡ଼ିକ ବର୍ଣ୍ଣନା କରାଯାଇଥିବା 33,34,35 ଭାବରେ ସୃଷ୍ଟି ହୋଇଥିଲା। ଏହି କୋଷ ରେଖାଗୁଡ଼ିକୁ ମୂଳ BY-2 କୋଷ ରେଖା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ପ୍ରକ୍ରିୟାଗୁଡ଼ିକ ବ୍ୟବହାର କରି ରକ୍ଷଣାବେକ୍ଷଣ ଏବଂ ସିଙ୍କ୍ରୋନାଇଜେସନ୍ କରାଯାଇପାରିବ।
HeLa କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ଡୁଲବେକୋର ସଂଶୋଧିତ ଇଗଲ୍ସ ମାଧ୍ୟମ (DMEM) (ଲାଇଫ୍ ଟେକ୍ନୋଲୋଜି) ରେ 10% ଭ୍ରୁଣ ବୋଭାଇନ୍ ସେରମ୍, 1.2 U/ml ପେନିସିଲିନ୍ ଏବଂ 1.2 μg/ml ଷ୍ଟ୍ରେପ୍ଟୋମାଇସିନ୍ ସହିତ 5% CO2 ସହିତ ଏକ 37°C ଇନକ୍ୟୁବେଟରରେ ସଜ୍ଜିତ କରାଯାଇଥିଲା।
ଏହି ପାଣ୍ଡୁଲିପିରେ ବର୍ଣ୍ଣିତ ସମସ୍ତ ପରୀକ୍ଷଣ ଜାପାନୀ ଜୈବ ସୁରକ୍ଷା ନିୟମ ଏବଂ ନିର୍ଦ୍ଦେଶାବଳୀ ଅନୁସାରେ କରାଯାଇଥିଲା।
ଯୌଗିକଗୁଡ଼ିକୁ ଷ୍ଟକ୍ ଦ୍ରବଣ ଭାବରେ ଡାଇମିଥାଇଲ୍ ସଲଫକ୍ସାଇଡ୍ (DMSO; ଫୁଜିଫିଲ୍ମ ୱାକୋ ପ୍ୟୁର୍ କେମିକାଲ୍) ରେ ଦ୍ରବୀଭୂତ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଆରବିଡୋପ୍ସିସ୍ ଏବଂ ତମାଖୁ ପାଇଁ MS ମାଧ୍ୟମରେ କିମ୍ବା ଲିଭରୱର୍ଟ ପାଇଁ ଗାମ୍ବର୍ଗ B5 ମାଧ୍ୟମରେ ପତଳା କରାଯାଇଥିଲା। ମୂଳ ବୃଦ୍ଧି ନିରୋଧ ପରୀକ୍ଷା ପାଇଁ, ସୂଚିତ ଯୌଗିକ କିମ୍ବା DMSO ଧାରଣ କରିଥିବା ଅଗର ମାଧ୍ୟମରେ ପ୍ରତି ପ୍ଲେଟ୍ 10 ରୁ ଅଧିକ ବିହନ ବୁଣାଯାଇଥିଲା। ବିହନଗୁଡ଼ିକୁ 7 ଦିନ ପାଇଁ ଏକ ବୃଦ୍ଧି ଚାମ୍ବରରେ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ଚାରାଗୁଡ଼ିକର ଫଟୋଗ୍ରାଫ୍ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ମୂଳର ଲମ୍ବ ମାପ କରାଯାଇଥିଲା। ଆରବିଡୋପ୍ସିସ୍ ଅଙ୍କୋଦନ ପରୀକ୍ଷା ପାଇଁ, 200 μM ଯୌଗିକ କିମ୍ବା DMSO ଧାରଣ କରିଥିବା ଅଗର ମାଧ୍ୟମରେ ପ୍ରତି ପ୍ଲେଟ୍ 48 ବିହନ ବୁଣାଯାଇଥିଲା। ଆରବିଡୋପ୍ସିସ୍ ବିହନଗୁଡ଼ିକୁ ଏକ ବୃଦ୍ଧି ଚାମ୍ବରରେ ଚାଷ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଅଙ୍କୁରିତ ଚାରା ସଂଖ୍ୟା ଅଙ୍କୁରିତ ହେବାର 7 ଦିନ ପରେ ଗଣନା କରାଯାଇଥିଲା (ଡାଗ)। ତମାଖୁ ଅଙ୍କୁରିତ ପରୀକ୍ଷା ପାଇଁ, 200 μM KAND କିମ୍ବା DMSO ଧାରଣ କରିଥିବା ଅଗର ମାଧ୍ୟମରେ ପ୍ରତି ପ୍ଲେଟ୍ 24 ବିହନ ବୁଣାଯାଇଥିଲା। ତମାଖୁ ବିହନଗୁଡ଼ିକୁ ଏକ ବୃଦ୍ଧି ଚାମ୍ବରରେ ଚାଷ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଅଙ୍କୁରିତ ଚାରା ସଂଖ୍ୟା 14 ଦିନ ପରେ ଗଣନା କରାଯାଇଥିଲା। ଲିଭରୱାର୍ଟ ବୃଦ୍ଧି ନିବାରଣ ପରୀକ୍ଷା ପାଇଁ, ପ୍ରତ୍ୟେକ ପ୍ଲେଟରୁ 9ଟି ଭ୍ରୁଣକୁ KAND କିମ୍ବା DMSO ର ସୂଚିତ ସାନ୍ଦ୍ରତା ଧାରଣ କରିଥିବା ଆଗର ମାଧ୍ୟମରେ ପ୍ଲେଟ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ 14 ଦିନ ପାଇଁ ଏକ ବୃଦ୍ଧି ଚାମ୍ବରରେ ଇନକ୍ୟୁବେଟ କରାଯାଇଥିଲା।
ମୂଳ ମେରିଷ୍ଟେମ୍ ସଂଗଠନକୁ କଳ୍ପନା କରିବା ପାଇଁ 5 mg/ml ପ୍ରୋପିଡିୟମ ଆୟୋଡାଇଡ୍ (PI) ସହିତ ରଙ୍ଗିତ ଚାରା ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ। TCS SPE କନଫୋକାଲ୍ ଲେଜର ସ୍କାନିଂ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପି (Leica Microsystems) ବ୍ୟବହାର କରି ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପି ଦ୍ୱାରା PI ସଙ୍କେତଗୁଡ଼ିକୁ ପର୍ଯ୍ୟବେକ୍ଷଣ କରାଯାଇଥିଲା।
ମାଲାମି ଏବଂ ବେନଫେ36 ଦ୍ୱାରା ବର୍ଣ୍ଣିତ ପ୍ରୋଟୋକଲ ଅନୁସାରେ β-ଗ୍ଲୁକୁରୋନିଡେଜ୍ (GUS) ସହିତ ମୂଳର ହିଷ୍ଟୋକେମିକାଲ୍ ସ୍ଟେନ୍ିଂ କରାଯାଇଥିଲା। ବିହନଗୁଡ଼ିକୁ ରାତାରାତି 90% ଆସିଟୋନରେ ସ୍ଥିର କରାଯାଇଥିଲା, 0.5 mg/ml 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-d-glucuronic acid ସହିତ GUS ବଫରରେ 1 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ରଙ୍ଗ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଏକ ହାଇଡ୍ରେଟେଡ୍ କ୍ଲୋରାଲଡିହାଇଡ୍ ଦ୍ରବଣରେ ରଖାଯାଇଥିଲା। (8 ଗ୍ରାମ କ୍ଲୋରାଲ୍ ହାଇଡ୍ରେଟ୍, 2 ମିଲି ପାଣି ଏବଂ 1 ମିଲି ଗ୍ଲିସେରଲ୍) ଏବଂ ଏକ ଆକ୍ସିଓ ଇମେଜର M1 ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପ୍ (କାର୍ଲ ଜେଇସ୍) ବ୍ୟବହାର କରି ଡିଫରେନ୍ସିଆଲ୍ ଇଣ୍ଟେଫରେନ୍ସ କଣ୍ଟ୍ରାଷ୍ଟ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପି ଦ୍ୱାରା ପର୍ଯ୍ୟବେକ୍ଷଣ କରାଯାଇଥିଲା।
ଭୂଲମ୍ବ ଭାବରେ ରଖାଯାଇଥିବା ପ୍ଲେଟରେ ଚାଷ କରାଯାଇଥିବା 7 ଦିନ ପୁରୁଣା ଚାରା ଉପରେ ମୂଳ କୋଣ ମାପ କରାଯାଇଥିଲା। ପଦକ୍ଷେପ 6 ରେ ବର୍ଣ୍ଣିତ ଗୁରୁତ୍ୱାକର୍ଷଣ ଭେକ୍ଟର ଦିଗରୁ ମୂଳ କୋଣ ମାପ କରନ୍ତୁ।
ପ୍ରୋଟୋକଲ 37 ରେ ସାମାନ୍ୟ ପରିବର୍ତ୍ତନ ସହିତ, କର୍ଟିକାଲ୍ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲଗୁଡ଼ିକର ବ୍ୟବସ୍ଥା ବର୍ଣ୍ଣିତ ଭାବରେ ପରିଲକ୍ଷିତ ହୋଇଥିଲା। ଆଣ୍ଟି-β-ଟ୍ୟୁବୁଲିନ୍ ଆଣ୍ଟିବଡି (KMX-1, ମର୍କ ମିଲିପୋର: MAB3408) ଏବଂ ଆଲେକ୍ସା ଫ୍ଲୋର 488-କଞ୍ଜୁଗେଟେଡ୍ ଆଣ୍ଟି-ମାଉସ୍ IgG (ଥର୍ମୋ ଫିସର ସାଇଣ୍ଟିଫିକ୍: A32723) ଯଥାକ୍ରମେ 1:1000 ଏବଂ 1:100 ଡାଇଲ୍ୟୁସନ୍ ରେ ପ୍ରାଥମିକ ଏବଂ ଦ୍ୱିତୀୟ ଆଣ୍ଟିବଡି ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। ଏକ TCS SPE କନଫୋକାଲ୍ ଲେଜର ସ୍କାନିଂ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପ୍ (Leica ମାଇକ୍ରୋସିଷ୍ଟମ୍ସ) ବ୍ୟବହାର କରି ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ପ୍ରତିଛବିଗୁଡ଼ିକ ହାସଲ କରାଯାଇଥିଲା। ନିର୍ମାତାଙ୍କ ନିର୍ଦ୍ଦେଶ ଅନୁଯାୟୀ Z-ଷ୍ଟାକ୍ ପ୍ରତିଛବିଗୁଡ଼ିକ ପ୍ରାପ୍ତ କରନ୍ତୁ ଏବଂ ସର୍ବାଧିକ ତୀବ୍ରତା ପ୍ରୋଜେକ୍ସନ୍ ସୃଷ୍ଟି କରନ୍ତୁ।
ନିର୍ମାତାଙ୍କ ନିର୍ଦ୍ଦେଶ ଅନୁଯାୟୀ ସେଲ୍ କାଉଣ୍ଟିଂ କିଟ୍ 8 (ଡୋଜିଣ୍ଡୋ) ବ୍ୟବହାର କରି HeLa କୋଷ ପ୍ରସାର ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇଥିଲା।
600 nm (OD600) ରେ ଏକ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋଫଟୋମିଟର ବ୍ୟବହାର କରି କଲଚରରେ କୋଷ ଘନତା ମାପି E. coli DH5α ର ବୃଦ୍ଧି ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା।
CSU-X1 କନଫୋକାଲ୍ ସ୍କାନିଂ ଡିଭାଇସ୍ (ୟୋକୋଗାୱା) ଏବଂ ଏକ sCMOS କ୍ୟାମେରା (ଜାଇଲା, ଆଣ୍ଡୋର୍ ଟେକ୍ନୋଲୋଜି) ସହିତ ସଜ୍ଜିତ ଏକ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ଟ୍ରାନ୍ସଜେନିକ୍ BY-2 କୋଷଗୁଡ଼ିକରେ ସାଇଟୋସ୍କେଲେଟାଲ୍ ସଂଗଠନ ପର୍ଯ୍ୟବେକ୍ଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। ସାଇଟୋସ୍କେଲେଟାଲ୍ ଘନତା ପ୍ରତିଛବି ବିଶ୍ଳେଷଣ ଦ୍ୱାରା ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା, ଯାହା ବର୍ଣ୍ଣନା କରାଯାଇଥିବା 38,39 ପ୍ରକାରର ImageJ ସଫ୍ଟୱେର୍ ବ୍ୟବହାର କରି କନଫୋକାଲ୍ ପ୍ରତିଛବିଗୁଡ଼ିକରେ ସାଇଟୋପ୍ଲାଜମିକ୍ ପିକ୍ସେଲ ମଧ୍ୟରେ ସାଇଟୋସ୍କେଲେଟାଲ୍ ପିକ୍ସେଲର ପ୍ରତିଶତକୁ ପରିମାଣିତ କରିଥିଲା।
BY-2 କୋଷରେ କୋଷ ମୃତ୍ୟୁ ଚିହ୍ନଟ କରିବା ପାଇଁ, କୋଷ ସସପେନସନର ଏକ ଆଲିକୋଟ୍ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ 0.05% ଇଭାନ୍ସ ନୀଳ ସହିତ 10 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଇନକ୍ୟୁବେଟେଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ମୃତ କୋଷଗୁଡ଼ିକର ଚୟନିତ ଇଭାନ୍ସ ନୀଳ ରଙ୍ଗ ଅକ୍ଷୁର୍ଣ୍ଣ ପ୍ଲାଜମା ଝିଲ୍ଲୀ40 ଦ୍ୱାରା କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମ କୋଷରୁ ରଙ୍ଗ ବାହାର କରିବା ଉପରେ ନିର୍ଭର କରେ। ଏକ ଉଜ୍ଜ୍ୱଳ-କ୍ଷେତ୍ର ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପ (BX53, ଅଲିମ୍ପସ୍) ବ୍ୟବହାର କରି ରଙ୍ଗୀନ କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ପର୍ଯ୍ୟବେକ୍ଷଣ କରାଯାଇଥିଲା।
HeLa କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ DMEM ରେ 37°C ତାପମାତ୍ରାରେ ଏକ ଆର୍ଦ୍ରତାପ୍ରାପ୍ତ ଇନକ୍ୟୁବେଟରରେ 10% FBS ସହିତ ପରିପୂରକ ଭାବରେ ବୃଦ୍ଧି କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ 5% CO2 ଦିଆଯାଇଥିଲା। କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ 100 μM KAND 11, kumamonamic acid 6, kumamonamide 1, 100 ng/ml colcemid (Gibco), କିମ୍ବା 37°C ତାପମାତ୍ରାରେ 6 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ 100 ng/ml Nocodmaze (Sigma) ସହିତ ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିଲା। କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ 10 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ MetOH ସହିତ ସ୍ଥିର କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ତା'ପରେ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ 5 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଆସେଟେଟ୍ ସହିତ ସ୍ଥିର କରାଯାଇଥିଲା। ସ୍ଥିର କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ β-ଟ୍ୟୁବୁଲିନ୍ ପ୍ରାଥମିକ ଆଣ୍ଟିବଡି (1D4A4, ପ୍ରୋଟିନଟେକ୍: 66240-1) ସହିତ 0.5% BSA/PBS ରେ 2 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ମିଶ୍ରିତ କରାଯାଇଥିଲା, TBST ସହିତ 3 ଥର ଧୋଇ ଦିଆଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ତା'ପରେ Alexa Fluor ଛେଳି ଆଣ୍ଟିବଡି ସହିତ ସକ୍ରିୟ କରାଯାଇଥିଲା। 488 1 ଘଣ୍ଟା। – ମାଉସ୍ IgG (ଥର୍ମୋ ଫିସର ସାଇଣ୍ଟିଫିକ୍: A11001) ଏବଂ 15 ng/ml 4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) 0.5% BSA/PBS ରେ ମିଳାଇ ଦିଆଯାଇଛି। ତିନିଥର TBST ସହିତ ଧୋଇବା ପରେ, Nikon Eclipse Ti-E ଇନଭାର୍ଟଡ୍ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପରେ ଷ୍ଟେନ୍ କୋଷଗୁଡ଼ିକ ପର୍ଯ୍ୟବେକ୍ଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। MetaMorph ସଫ୍ଟୱେର୍ (ଆଣବିକ ଡିଭାଇସ୍) ବ୍ୟବହାର କରି ଏକ ଥଣ୍ଡା ହାମାମାତ୍ସୁ ORCA-R2 CCD କ୍ୟାମେରା ସହିତ ଚିତ୍ରଗୁଡ଼ିକ କଏଦ କରାଯାଇଥିଲା।